血漿血小板反應(yīng)蛋白-1水平與冠狀動脈狹窄病變程度的關(guān)系研究

王竟悟, 艾鳳英, 王大勝, 吳 悠,蘇巖杰, 楊鑫泉, 王大新

(1. 揚(yáng)州大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院, 江蘇 揚(yáng)州, 225000; 2. 大連醫(yī)科大學(xué), 遼寧 大連, 116044;3. 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院, 湖南 長沙, 410011)

冠狀動脈疾病(CAD)目前仍然是全球人類死亡的主要原因之一，盡管人們對心血管疾病的預(yù)防已有相當(dāng)?shù)年P(guān)注[1]。2016年國人死因排序中，缺血性心臟病排在第2位[2]。血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)又名凝血栓蛋白-1，是血小板反應(yīng)蛋白家族的成員。TSP-1在心肌肥厚、心力衰竭、動脈粥樣硬化等疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用[3]。目前研究TSP-1與冠狀動脈狹窄程度關(guān)系的還很少。Gensini評分(GS)是1983年GOFFRED和GENSINI 聯(lián)合提出的一種冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的病變嚴(yán)重程度的評分方法，一直沿用至今，也是目前臨床工作中常用的一種評估冠脈狹窄嚴(yán)重程度的方法[4]。本研究探討血漿TSP-1水平與冠狀動脈粥樣硬化嚴(yán)重程度的關(guān)系及其臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年7—11月在江蘇省蘇北人民醫(yī)院心內(nèi)科206病區(qū)住院并接受冠脈造影檢查的患者共79例，根據(jù)Gensini積分分為低、中、高3組。低評分組男17例，女10例，年齡(64.37±8.09)歲，體質(zhì)量指數(shù)(23.99±3.11) kg/m2。中評分組男18例，女8例，年齡(63.3±11.78)歲，體質(zhì)量指數(shù)(24.11±2.75) kg/m2。高評分組男20例，女6 例，年齡(60.08±11.98)歲，體質(zhì)量指數(shù)(24.34±3.8) kg/m2。對照組選取同期住院但冠狀動脈造影結(jié)果為陰性者，即Gensini評分為0分者27例，男9例，女18例，年齡(58.74±8.78)歲，體質(zhì)量指數(shù)(23.19±3.35) kg/m2。

排除標(biāo)準(zhǔn): 年齡>80周歲; 既往有明確冠心病病史，行冠脈支架植入或冠脈搭橋術(shù)者; 合并慢性腎臟病(CKD)病史或急性腎損傷或規(guī)律血液透析者; 拒絕行冠脈造影檢查或造影不成功者; 心肌炎、心肌病、嚴(yán)重主動脈瓣疾病、外周動脈疾病及結(jié)締組織病者; 重度或難治性高血壓; 良、惡性腫瘤及腫瘤術(shù)后患者; 嚴(yán)重心律失常、貧血、感染者; 不自愿入組者和心理精神疾病患者。

1.2 研究方法

所有研究對象于入院24 h內(nèi)采集5 mL空腹靜脈血于EDTA抗凝管內(nèi)，立即送至江蘇省蘇北人民醫(yī)院研究中心, 4 ℃冰箱靜置30 min后，以3 000轉(zhuǎn)/min離心10 min; 吸取上層淡黃色血漿于1.5 mL EP管中，置-80 ℃冰箱凍存盒中保存待檢。以酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定各組血漿TSP-1、MMP-9、TGF-β1、hs-CRP的濃度; ELISA試劑盒均購自中國上海BG公司。

1.3 Gensini積分計算方法

根據(jù)冠脈造影所顯示冠脈內(nèi)徑狹窄程度進(jìn)行積分: 冠脈狹窄1%～25%為1分，狹窄程度達(dá)>25%～50%計為2分，>50%～75%計為4分，>75%～90%計為8分，>90%～<100%計為16分，100%(即完全閉塞)計為32分。根據(jù)病變部位及分支血管所對應(yīng)的計分系數(shù): 左主干5分，前降支近段2.5分、中段1.5分、遠(yuǎn)段1分，第1對角支1分、第2對角支0.5分，回旋支近段2.5分、遠(yuǎn)段1分、鈍緣支1分，右冠脈近段1分、中段1分、遠(yuǎn)段1分，后降支1分，左室后支1分。Gensini積分=冠脈各段系數(shù)的計分×該段狹窄程度的計分。累加該患者所有病變段的積分即為總Gensini積分。結(jié)果由手術(shù)醫(yī)師判定，取2人判定結(jié)果的均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用graphpad prism 5和SPSS 20.0統(tǒng)計軟件。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用The Shapiro-Will test來評價計量資料是否符合正態(tài)分布。計數(shù)資料用頻數(shù)、百分構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗。計數(shù)資料呈正態(tài)分布且總體方差齊時，則采用獨立樣本t檢驗及單因素方差分析(one-way ANOVA); 若計數(shù)資料不呈正態(tài)分布時，則用the Mann-WhitneyUtest和Kruskal-Wallis test。用Spearman的相關(guān)系數(shù)計算兩個連續(xù)變量之間的關(guān)系; 多元逐步回歸分析法用于不同變量對TSP-1、GS的影響評價，并對協(xié)變量進(jìn)行調(diào)整。

2 結(jié) 果

2.1 受試者的基線資料

根據(jù)Gensini 積分將患者分為3組，即低評分組(≤12分)、中評分組(>12～<60分)、高評分組(≥60分)。收集臨床基線資料發(fā)現(xiàn), Gensini得分越高，受試者患2型糖尿病、吸煙的比例就越高，同時左室射血分?jǐn)?shù)也隨著評分的增高而降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗室指標(biāo)中只有總膽固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、肌酐的數(shù)值隨著Gensini評分的上升而上升。傳統(tǒng)意義上具有保護(hù)意義的高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和血清載脂蛋白A1(ApoA1)的值則隨著評分的上升而顯著下降(P<0.05)。見表1。

表1 不同組別受試者的臨床資料比較

2.2 各組間血漿TSP-1與Gensini評分的相關(guān)性

高評分組TSP-1水平顯著高于對照組(P<0.001)。對照組、低評分組、中評分組和高評分組兩兩比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。線性相關(guān)分析顯示TSP-1與GS有顯著相關(guān)性(r=0.4674,P<0.001)。見圖1。

圖1各組血漿TSP-1水平和血漿TSP-1水平與GS的線性相關(guān)及散點圖

2.3 血漿TSP-1水平與血漿相關(guān)細(xì)胞因子水平的分析結(jié)果

酶聯(lián)免疫法在4組患者的血漿中均能檢測到TGF-β1、MMP-9、hs-CRP。三者均是研究較廣泛與冠狀動脈粥樣硬化狹窄有密切關(guān)系的細(xì)胞因子。hs-CRP被稱為最敏感的炎癥因子，目前已經(jīng)被廣泛運用到臨床。相關(guān)性分析顯示，TSP-1和hs-CRP、MMP9、TGF-β1存在顯著相關(guān)性(P<0.001)。見圖2。

2.4 多元逐步線性回歸分析結(jié)果

為確定與TSP-1、GS是否存在密切聯(lián)系，分別以TSP-1、GS為因變量，以年齡、性別、BMI、是否吸煙、左室射血分?jǐn)?shù)、TG、TC、LDL-C、HDL-C、LDL-C、ApoA1、空腹血糖、尿酸、尿素氮、肌酐、hs-CRP為自變量，進(jìn)行多元逐步線性回歸分析，發(fā)現(xiàn)GS能夠獨立預(yù)測TSP-1, 同時TSP-1也是GS的獨立預(yù)測因子。見表2、3。

3 討 論

TSP-1是一種多結(jié)構(gòu)域及多功能的細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，可由激活的血小板α顆粒、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等合成分泌，能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞與基質(zhì)間的相互作用、參與調(diào)節(jié)平滑肌增值與遷移、內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、血小板聚集、血栓形成及血管新生等生物學(xué)過程。在Gene Quest研究中，Topol等[5]發(fā)現(xiàn)TSP-1基因多態(tài)性A2210G(N700S)在冠狀動脈粥樣硬化不定斑塊形成過程中起著重要的作用。但多項針對中國人群的研究[6-7]發(fā)現(xiàn), TSP-1的700N→S變異發(fā)生率明顯低于西方人群，且與ACS發(fā)病無相關(guān)性。由此可見，對中國人群血漿中TSP-1的水平進(jìn)行研究仍具有積極的意義。

圖2 各組血漿hs-CRP、MMP-9、TGF-β1水平及其與血漿TSP-1的相關(guān)性

表3 以Gensini積分為因變量的多元逐步線性回歸結(jié)果

本研究是首次從冠脈動脈的狹窄程度這一角度出發(fā)，探討不同Gensini積分患者血漿中TSP-1的變化情況。研究結(jié)果顯示TSP-1與冠狀動脈的狹窄病變程度存在密切的關(guān)系，隨著GS的增高，TSP-1在血漿中的水平顯著上升(P<0.001), 同時由多元逐步線性回歸的結(jié)果可以看出，血漿中TSP-1的水平和冠狀動脈的狹窄程度互成因果關(guān)系，TSP-1在血漿中的水平越高，導(dǎo)致冠脈狹窄越嚴(yán)重; 而狹窄的冠脈又進(jìn)一步促進(jìn)TSP-1分泌增多，血漿水平增高?？赡苡蛇@幾方面原因?qū)е? ① 動脈粥樣硬化早期TSP-1上調(diào)了細(xì)胞間的黏附分子的表達(dá)，促進(jìn)單核細(xì)胞結(jié)合至內(nèi)皮細(xì)胞[8-11]。而單核細(xì)胞可通過介導(dǎo)炎癥反應(yīng)并促進(jìn)斑塊內(nèi)血管新生，在動脈粥樣硬化進(jìn)展中起關(guān)鍵作用[12-15]。② 斑塊形成階段TSP-1可促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，多細(xì)胞的聚集和相互作用使斑塊分泌TSP-1增加[16-17]。③ 心肌梗死發(fā)生后，梗死的心臟直接分泌出TSP-1, 使血漿中TSP-1的水平進(jìn)一步上升。這些均提示冠狀動脈狹窄患者血漿TSP-1水平變化間接反映冠狀動脈的病變程度[18]。

細(xì)胞因子一直是動脈粥樣硬化過程中的研究熱點, MMP-9和 TGF-β1分別是目前被研究最多和最廣泛的損傷性和保護(hù)性細(xì)胞因子，二者均已被證實與冠狀動脈狹窄程度存在顯著相關(guān)性[19-20]。本研究結(jié)果顯示, TSP-1與二者均存在顯著相關(guān)性(P<0.001)。同時，近期大量臨床研究表明hs-CRP不僅僅是一種炎癥標(biāo)志物，同時也是動脈粥樣斑塊脆性的標(biāo)志。本研究多元逐步線性回歸也發(fā)現(xiàn)TSP-1與hs-CRP存在獨立相關(guān)性，這些都意味著TSP-1不僅僅是一個冠心病潛在的預(yù)測標(biāo)記物，同時也是一個重要的干預(yù)、治療靶點。同時，本研究也有一些共性研究結(jié)果，即TC、LVEF、空腹血糖與冠脈病變程度存在相關(guān)性，這些結(jié)果已經(jīng)被許多臨床研究所證實。

綜上所述，血漿TSP-1水平與冠狀動脈狹窄程度存在顯著正相關(guān)性, TSP-1有望成為反映冠狀動脈病變程度的標(biāo)志物之一，同時也是一個潛在的干預(yù)、治療靶點。

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