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    呼吸道感染中耐藥鮑曼不動桿菌(AB)β內酰胺酶基因的變異情況研究

    2018-05-07 03:23:47朱欣
    當代醫(yī)學 2018年12期
    關鍵詞:內酰胺酶鮑曼耐藥性

    朱欣

    (湘潭市中心醫(yī)院檢驗科,湖南 湘潭 411100)

    鮑曼不動桿菌(AB)屬于非發(fā)酵革蘭陰性桿菌,同時也是人體的共生菌。因AB為腐生菌,所以在送院環(huán)境中有著廣泛分布,且能長期的存活。據2010年我國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會(原衛(wèi)生部)的一項調查顯示,AB已成為重癥監(jiān)護治療病房(ICU)分離出的病原菌的首位病菌,同時在患者的尿液、呼吸道、大便及陰道均可檢測出該菌。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 選取2016年1月~2017年1月本院收治的呼吸道感染患者196例。其中男104例、女92例,年齡21~56歲,平均(37±9)歲。

    1.2 標本采集及細菌鑒定 對所有患者口腔進行重復清潔后,采用無菌吸痰器對所有患者深部呼吸道痰液進行抽取,隨后制作痰標本;Mueller-Hinto瓊脂培養(yǎng)基購自英國OXOID有限公司,隨后配置成M-H平皿進行痰標本細菌培養(yǎng),在35~37℃下持續(xù)培養(yǎng)18~24 h。采用法國BioMerieux公司的VITEK32全自動分析儀進行細菌種類鑒定,所有操作均嚴格參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[1],細菌種類判斷標準則參考美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)制定的規(guī)定進行。

    1.3 ADC基因變異分析 將細菌分離為單克隆體,提取單克隆菌落于LB液體培養(yǎng)基37℃培養(yǎng),將培養(yǎng)過夜的AB用2.0%低熔點膠灌膜,用蛋白酶K 50℃消化48 h,限制性內切酶Apel酶切12 h,脈沖場凝膠電泳儀14℃、6 V/en、120°、5~20 S梯度電泳22 h,溴化乙錠染色過夜并拍照,其中ADC基因引物序列正向:GGTATGGCTGTGGGGTGTTATTC,反向:CTAAGACTTGGTCGAAAGGT,退火溫度為54℃,片段長度為445 bp。

    1.4 觀察指標 ①統(tǒng)計AB感染在呼吸道感染中的發(fā)生情況及來自科室;②統(tǒng)計所有AB菌株對8種抗菌藥物的耐藥性;③統(tǒng)計AB感染菌株中ADC基因陽性率及變異性和ADC基因陽性和陰性對各種抗菌藥物的敏感性差異。

    1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據分析,計量資料采用“±s”表示,予以t檢驗;計數(shù)資料采用率(%)表示,予以χ2檢驗,以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 AB感染的發(fā)生率及來自科室 196例呼吸道感染患者中共檢測出68株AB,AB感染發(fā)生率為34.69%。68株AB陽性患者中,主要來自ICU,共36例,所占百分比為52.94%,其中又以重癥ICU最多,共20例,所占百分比為29.41%;其次為呼吸內科,共16例,所占百分比為23.53%。

    2.2 AB菌株耐藥性分析 AB菌株對頭孢唑啉、頭孢呋辛、氨芐西林的耐藥率較高,分別為97.06%(66/68)、85.29%(58/68)、79.41%(54/68),后續(xù)為慶大霉素70.59%(48/68)、環(huán)丙沙星52.91%(36/68)、亞胺培南38.24%(26/68),但對左氧氟沙星和頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥率較低,分別為20.59%(14/68)和8.80%(6/68)。

    2.3 AB菌株ADC基因陽性及耐藥性分析 所有AB菌株中,共檢測出26株AB出現(xiàn)ADC陽性,陽性率為38.2%,18株攜帶ADC、DHA基因,6株攜帶ADC、DHA和EBC基因,2株攜帶ADC、EBC基因;ADC陽性AB菌株對亞胺培南的耐藥率顯著高于ADC陰性AB菌株(P<0.05),見表1。

    表1 ADC基因陽性及陰性鮑曼不動桿菌菌株對不同抗菌藥物的耐藥性比較[n(%)]

    3 討論

    臨床研究顯示,AB已成為目前醫(yī)院感染的主要病原菌,其作為人體的共生菌,主要定植與皮膚,同時在院內環(huán)境中也有廣泛分布,因此AB感染在一年四季中均可發(fā)生,但以春秋季節(jié)感染最為常見。AB是一種條件致病菌,在院內主要以呼吸道感染為主,且研究發(fā)現(xiàn)[2],ICU發(fā)生AB感染最為多見,可能與ICU患者長期抗菌藥物使用及侵入性操作,及合并較多基礎疾病,自身免疫能力低下有關。隨著AB院內感染率的逐年增加,目前已得到臨床的廣泛關注,醫(yī)護人員提高對自身免疫力低下患者的重視度,避免自身攜帶AB移位等措施,有助于降低AB的院內感染率[3]。臨床研究[4]顯示,AB是一種耐藥性極強的病原菌,可對多種抗菌藥物產生天然耐藥,隨著抗菌藥物廣泛應用及不合理使用現(xiàn)象增加,AB還可獲得對某些抗菌藥物的耐藥性。目前關于AB多重耐藥的報道不斷增加,其耐藥機制也得到深入研究,目前認為外膜孔蛋白的丟失、外排泵激活、PBPs改變及β內酰胺酶等因素均與其耐藥有關[5],其中PBPs改變可使其無法與抗菌藥物PBP1a、PBP2等靶點結合而產生耐藥,外排泵激活則使抗菌藥物在體內無法達到有效濃度而出現(xiàn)耐藥,β內酰胺酶則是通過水解β內酰胺酶類抗菌藥物實現(xiàn)耐藥。本研究結果顯示,AB對頭孢哌酮/舒巴坦、左氧氟沙星的耐藥率較低,分別為8.8%和20.59%,同時對青霉素類和二代頭孢類藥普遍存在較高耐藥性。臨床研究顯示,AB對頭孢哌酮/舒巴坦的低耐藥,主要因為舒巴坦為酶抑制劑,可抑制AB中β內酰胺酶活性,同時還可作用于細胞表面的PBPs進而增強抗菌活性,因此頭孢哌酮/舒巴坦可作為臨床治療AB感染的首選藥物。而AB對頭孢唑啉、環(huán)丙沙星、頭孢呋辛等抗菌藥物的高耐藥性,可能與其在臨床廣泛使用有關;而對亞胺培南的耐藥則與其產生了碳青霉烯有關,而碳青霉烯能有效水解亞胺培南而使其失去抗菌活性。研究證實[6-7],AB所產生的β內酰胺酶是其耐藥的主要機制,β內酰胺酶可作用于β內酰胺酶類抗菌藥物的β內酰胺環(huán),使其中β內酰胺鍵裂開,進而抑制其抗菌活性。ADC型β內酰胺酶是AB菌株產生的一類β內酰胺酶,研究顯示,ADC基因具有較強擴散能力,可導致不同菌株及菌種之間耐藥性的傳遞,存在較高傳染風險,同時攜帶此基因的菌株可產生特殊碳青霉烯酶,能更有效地滅活碳青霉烯抗菌藥物的活性部位,使其失去抗菌活性。本研究發(fā)現(xiàn)其有一定的變異性。同時比較發(fā)現(xiàn)ADC陽性AB菌株對亞胺培南的耐藥性明顯增加,對其他藥物耐藥性無明顯差異。臨床應加強對廣泛耐藥菌和多重耐藥菌的篩選和檢測,重點觀察具有相關流行病史的患者,做到感染者及時發(fā)現(xiàn)及隔離,提高臨床的治療效果。

    [1] 尚紅,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2015:65-89.

    [2] 楊艷,王厚照,張玲.多重耐藥鮑曼不動桿菌耐藥性及β-內酰胺酶耐藥基因的研究[J].微生物學雜志,2015,35(4):54-58.

    [3] 王巖巖,陳向東,汪輝,等.多重耐藥鮑曼不動桿菌的β-內酰胺酶基因及插入序列ISAba1的檢測[J].藥物生物技術,2015,22(5):407-411.

    [4] 安慶麗,喻昌利,王鍵瑋,等.頭孢哌酮舒巴坦聯(lián)合米諾環(huán)素治療多重耐藥鮑曼不動桿菌肺炎療效評價[J].實用藥物與臨床,2016,19(5):558-561.

    [5] 邢麗丹,糜祖煌,徐鑫鑫,等.多重耐藥鮑曼不動桿菌中β內酰胺酶基因的檢測[J].中國感染與化療雜志,2014,14(1):54-57.

    [6] 翁幸鐾,糜祖煌.泛耐藥鮑曼不動桿菌PBP1A、CarO及β-內酰胺酶的編碼基因分析[J].中華臨床感染病雜志,2012,5(4):215-220.

    [7] 馮秋女,羅鋒,張麗琴.鮑曼不動桿菌耐藥性調查與用藥策略探究[J].當代醫(yī)學,2016,22(10):130-131.

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