不同炮制法白芍制品的芍藥苷含量檢測對比及其鎮(zhèn)痛效果研究*

王慧超，張 威，李鐵軍 ，許紅瑋

1.河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院(開封 475000),2.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院(鄭州 450000)

中藥白芍是干燥后的芍藥根部，性溫、味苦，具有鎮(zhèn)痛、養(yǎng)血、收斂、柔等功效，臨床上多用于肝火旺盛所致的血虛、腹痛、肋痛、肢痛等癥[1-3]。在中藥飲片中除了生白芍外還有多種白芍的炮制品，這些不同炮制法制備出的炮制品具有不同的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，白芍中主要成分芍藥苷是白芍發(fā)揮鎮(zhèn)痛、抗炎等作用的組份。因此白芍與其炮制品在臨床組方中主要發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用[4-6]。而芍藥苷成分則成為白芍質(zhì)量評價(jià)的主要指標(biāo)。本院開展本次研究以明確不同白芍炮制品當(dāng)中芍藥苷的含量及其鎮(zhèn)痛效果，旨在為今后臨床用藥的選擇提供參考。

材料與方法

1 藥品、儀器與試劑 本次研究所用白芍均購自同仁堂中藥飲片公司。涉及試劑及儀器：芍藥苷對照品、對乙酰氨基酚片、乙酸、甲醇、乙腈等試劑(北京萬佳首化生物科技有限公司出品)。屈臣氏蒸餾水，高效液相色譜儀。

2 試驗(yàn)用動(dòng)物 昆明小鼠(購自第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)力中心)，60只，雄性體重為18～22g。

3 炮制方法 ①生白芍，將白芍適度清洗后以蒸餾水浸泡至清透，正常切片后常規(guī)干燥。②炒白芍，將生白芍進(jìn)行清炒，觀察生品出現(xiàn)微黃色后停止炒制，自然冷卻。③酒制白芍，將生白芍完全浸泡于白酒中12 h，以文火炒制浸酒后的白芍至出現(xiàn)微黃色停止，自然冷卻。④醋制白芍，將生白芍完全浸泡于米醋中12 h，以文火炒制浸酒后的白芍至出現(xiàn)微黃色停止，自然冷卻；⑤將生白芍與麩皮共同炒制，炒至生白芍呈黃色偶見焦斑時(shí)停止，自然冷卻后篩去麩皮。每種各制備500 g。

將上述白芍炮制品研為粉末儲存?zhèn)溆?；自每種白芍制品粉末中各取0.64 g，均置于25 ml容量瓶當(dāng)中，于瓶中加20 ml甲醇混勻后浸泡30 min，以超聲處理30 min，自然冷卻后以甲醇定容至容量瓶的刻度，充分混勻后過濾。對照品的制備，稱取干燥芍藥苷對照品0.38 mg，置于5 ml的容量瓶當(dāng)中，以甲醇定容，取得0.76 mg/ml濃度的的芍藥苷對照品。

4 檢測方法 以高效液相色譜儀檢測芍藥苷含量，使用250 mm×4.6 mm，5 μm的C18反相色譜柱；流動(dòng)相使用乙腈-水；檢測波長為230 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫為30 ℃。采用上述條件，進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)。芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，取對照品溶液2 μl、4 μl、6 μl、8 μl、10 μl、12 μl檢測，獲取峰面積后與濃度共同繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線；取 10 μl的進(jìn)樣行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證精密度；取同一批次的樣品另外制備6份樣品溶液，分別上樣10 μl校驗(yàn)重現(xiàn)性；取6份測定含量后的樣品溶液，以對照品溶液上樣后測量，計(jì)算樣品回收率。測量不同白芍炮制品的芍藥苷含量，總共測量3次。

5 鎮(zhèn)痛效果實(shí)驗(yàn) 將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為空白對照組、生白芍組、炒制組、醋制組、酒制組、麩炒組，每組各10只；以0.3%醋酸溶液于全部小鼠頸背部皮下注射?？瞻讓φ战M小鼠以0.3 ml/10g(體重)蒸餾水灌胃；其它各組均取白芍炮制品30 g加入900 ml水中煎煮2次濃縮至30 ml，以0.3 ml/10 g(體重)灌胃。統(tǒng)計(jì)15 min內(nèi)各組小鼠的扭體次數(shù)，以評估鎮(zhèn)痛效果。

6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)均錄入至SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算，計(jì)量數(shù)據(jù)均以單因素ANOVA分析，進(jìn)一步兩兩對比以LSD-L分析；相關(guān)性以Pearson分析，以P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異標(biāo)準(zhǔn)。

結(jié) 果

1 芍藥苷含量 見表1。生白芍與各炮制品的芍藥苷含量均具有差異性(P<0.05)，其中生白芍含量最高；在白芍制品中麩炒白芍的芍藥苷含量最高為(63.26±0.19) μg。

表1 不同白芍炮制品芍藥苷含量統(tǒng)計(jì)對比表

2 鎮(zhèn)痛效果 見表2。各白芍泡制組扭體次數(shù)均少于空白對照組(P<0.05)；酒制組、醋制組間、炒制組、麩炒制組間無差異(P>0.05)；酒制組、醋制組間扭體次數(shù)少于生白芍組(P<0.05)；酒制組與醋制組鎮(zhèn)痛效果最佳。

表2 小鼠鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)對比表

注：與空白對照組對比，★P<0.05;與生白芍組對比,☆P<0.05

3 相關(guān)性分析 經(jīng)相關(guān)性分析，鎮(zhèn)痛效果與芍藥苷含量間無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性(r<0.3，P<0.05)。

4 不同白芍制品性狀 生白芍與不同白芍制品的性狀觀察見下表3所示。

表3 不同白芍制品性狀觀察特征描述明細(xì)

討 論

白芍也稱為白花芍藥，為毛茛科芍藥屬的植物，在我國許多地區(qū)均有栽培，種植歷史悠久。中醫(yī)中不同白芍制品有著不同主治功效，這與其不同的化學(xué)成分相關(guān)。芍藥苷為白芍的主要有效成分，具有退熱解痙、護(hù)肝養(yǎng)肝之功效。生白芍具有斂固滋陰、強(qiáng)效平肝的作用，主要與其芍藥苷的含量較高有關(guān)。白芍經(jīng)過炒制后其芍藥苷的含量稍有下降，藥性更趨平緩，養(yǎng)血、滋陰的效果更加顯著；因此多應(yīng)用于肝火旺盛、脾弱陰虛之癥。酒炒白芍能夠提高其多糖與鞣質(zhì)的含量，白芍含有的多糖及鞣質(zhì)具有理想的抗氧化、調(diào)節(jié)免疫力等功效，并可輔助發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用，提高芍藥苷的起效速度；因此酒制白芍能夠和中緩急、快速鎮(zhèn)痛，特別適用于產(chǎn)后鎮(zhèn)痛當(dāng)中。醋制白芍入肝經(jīng)，加強(qiáng)了疏肝解郁、柔肝止痛之功效。麩炒白芍可加強(qiáng)養(yǎng)肝、柔肝的作用，緩解酸痛。中藥的藥理機(jī)制具有多層次、多靶點(diǎn)的特征，在臨床治療中具有獨(dú)特優(yōu)勢。雖然中國藥典中將芍藥苷含量作為評估白芍質(zhì)量的評價(jià)指標(biāo)，但芍藥苷的評估無法全面涵蓋各種白芍炮制品的臨床用途。以往中醫(yī)中藥的傳承多以經(jīng)驗(yàn)為主體，在精準(zhǔn)性、數(shù)字性方面有所欠缺，因此在臨床藥理學(xué)研究中應(yīng)對白芍不同制品進(jìn)行全面研究，為臨床應(yīng)用的具體白芍制品選擇提供依據(jù)。

白芍是中藥組方中較為多用的一種中藥飲片，最主要的功能為鎮(zhèn)痛[7-8]。高效液相色譜法是檢測藥物有效成分的一種常用方法，該方法檢測結(jié)果穩(wěn)定可靠[9-10]。在測定芍藥苷的含量時(shí)使用甲醇-水作為檢測流動(dòng)相無法分離芍藥苷。本次研究中我們以乙腈-水作為流動(dòng)相，測量過程當(dāng)中的基線平穩(wěn)，數(shù)據(jù)可靠，完全可以達(dá)到計(jì)劃分離效果。浸泡12 h可使芍藥苷的浸出達(dá)到最佳效果，超過12 h后隨著浸泡時(shí)間的延長其含量可出現(xiàn)下降[11-12]。因此本次研究中，我們在炮制過程中均采取浸泡12 h，以確保芍藥苷的含量被最大程度的浸出，且不會因浸泡時(shí)間過長而有所損失。

芍藥苷成分在生白芍飲片中含量為最高，炒、酒、醋法炮制后芍藥苷含量會有所降低[13]。不同炮制法的芍藥苷含量數(shù)值為生品芍藥大于醋炒芍藥、醋炒芍藥又大于酒炒芍藥。另外白芍藥中氨基酸、丹皮酚的含量亦受不同炮制方法的影響，因此，由于炮制方法的不同而引起的白芍多種成分的變化，即會使臨證用藥選擇更有針對性。為進(jìn)一步證明中藥材經(jīng)炮制后使用的科學(xué)性，現(xiàn)代藥理學(xué)對于經(jīng)炮制白芍進(jìn)行了多項(xiàng)藥理學(xué)研究，結(jié)果表明經(jīng)幾種方法炮制后的白芍其藥效普遍增強(qiáng)，生白芍、炒白芍、醋炒白芍、酒炒白芍作用于離體兔腸，發(fā)現(xiàn)其自發(fā)振幅、收縮活動(dòng)均呈現(xiàn)增強(qiáng)并與藥物劑量的增加呈正比，而且醋炒白芍各項(xiàng)作用最強(qiáng)[14-15]。此外清炒、醋炒、酒炒白芍可明顯拮抗腎上腺素性腸管蠕動(dòng)抑制。以當(dāng)代高科技炮制工藝針對中醫(yī)臨床用藥需求對白芍的多種方法炮制技術(shù)進(jìn)行研究，有利于傳統(tǒng)炮制方法的革新，使中藥炮制工藝更快的發(fā)展、進(jìn)步，更加科學(xué)、標(biāo)準(zhǔn)，以保證中藥材炮制產(chǎn)品的質(zhì)量，促進(jìn)我國中醫(yī)中藥更好的傳承發(fā)展。

本次研究結(jié)果表明，生白芍當(dāng)中的芍藥苷含量最高，炒制品中的芍藥苷含量最低。這一現(xiàn)象可能與芍藥苷的性質(zhì)并不完全穩(wěn)定，而高溫的炮制過程可能導(dǎo)致芍藥苷含量部分喪失有關(guān)。通過動(dòng)物鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)證明，酒制白芍與醋制白芍的鎮(zhèn)痛作用最為理想。通過相關(guān)性分析可知，芍藥苷的含量與鎮(zhèn)痛效果間無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性，這一研究結(jié)果提示芍藥苷含量最高的生白芍具鎮(zhèn)痛效果并非最理想。芍藥苷的主要作用包含有鎮(zhèn)痛、抗炎、利尿、解痙、清熱等。因此在臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)考慮主要治療目的，并非單純以芍藥苷的含量作為用藥選擇的標(biāo)準(zhǔn)。

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