實(shí)時(shí)熒光PCR監(jiān)測(cè)非洲豬瘟病毒

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(四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041)

0 引言

非洲豬瘟(Africanswinefever,ASF)又稱非洲豬瘟疫、疣豬病，是由非洲豬瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)感染引起的一種豬急性、熱性、高度接觸性傳染病。臨床癥狀以高熱、高死亡率、內(nèi)臟器官廣泛性出血以及呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)功能改變?yōu)橹饕卣鱗1]。該病是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織的法定報(bào)告動(dòng)物疫病(OIE，2004)，我國(guó)農(nóng)業(yè)部將其列為一類動(dòng)物疫病，是《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃(2012-2020年)》中明確規(guī)定須重點(diǎn)防范的外來動(dòng)物疫病之一[2]，世界尚缺乏有效疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防。

近年來，ASF疫情從非洲、歐洲逐步擴(kuò)散至亞洲地區(qū)，對(duì)疫情國(guó)家的養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重危害。非洲豬瘟近10年來已成為俄羅斯養(yǎng)豬業(yè)的主要威脅，俄羅斯46個(gè)地區(qū)都曾出現(xiàn)過疫情，造成的直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)到50億盧布，間接經(jīng)濟(jì)損失更高達(dá)數(shù)百億盧布。2017年3月，俄羅斯伊爾庫茨克州爆發(fā)非洲豬瘟疫情，疫情發(fā)生地距離我國(guó)較近，是與我國(guó)貿(mào)易和人員往來頻繁的交通和商貿(mào)樞紐。對(duì)此，農(nóng)業(yè)部發(fā)布了《農(nóng)業(yè)部辦公廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)非洲豬瘟風(fēng)險(xiǎn)防范工作的緊急通知》，通知要求各地要高度警惕疫情風(fēng)險(xiǎn)，切實(shí)做好風(fēng)險(xiǎn)防范工作，切實(shí)加強(qiáng)境外疫情信息的收集、分析和報(bào)告，深入開展非洲豬瘟病毒病原學(xué)研究，加強(qiáng)快速診斷等技術(shù)研究?jī)?chǔ)備，加強(qiáng)監(jiān)測(cè)排查，加大高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)豬群的采樣監(jiān)測(cè)工作。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品采集

樣品來源于四川省的規(guī)模場(chǎng)及散養(yǎng)戶的豬組織病料，癥狀表現(xiàn)為皮膚發(fā)紺或淋巴結(jié)、脾、腎、胃腸黏膜明顯出血。樣品共計(jì)51份見表1。

表1 豬組織病料采集情況

1.1.2 檢測(cè)試劑

非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：ASF20170428P，購自北京世紀(jì)元亨公司。

1.2 檢測(cè)方法

參照非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果判定

2.1 結(jié)果有效性

陽性對(duì)照Cq值≤30并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，陰性對(duì)照Cq值≥37并且無特定的擴(kuò)增曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。

2.2 結(jié)果

所有樣本Cq值均為“無”，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)中所有被試樣品均為ASFV抗原陰性。檢測(cè)結(jié)果見圖1。

圖1 檢測(cè)結(jié)果

3 討論

對(duì)于非洲豬瘟，世界范圍尚未研制出有效疫苗。在非免疫狀態(tài)下，使用實(shí)時(shí)熒光PCR進(jìn)行非洲豬瘟病毒檢測(cè)，是目前靈敏度及準(zhǔn)確度最高的方法。本研究選取51份臨床及病理特征與非洲豬瘟相似的病料進(jìn)行檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟陽性的病例。

非洲豬瘟屬于外來病，邊境地區(qū)、生豬養(yǎng)殖貿(mào)易活躍區(qū)是重點(diǎn)防范地區(qū)。此前,四川省已針對(duì)高危的5個(gè)邊境市(州)開展調(diào)查，印證了四川省尚未發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟感染的現(xiàn)狀[4,5]。此次研究中，取樣地區(qū)進(jìn)一步擴(kuò)大，增加邊境市(州)數(shù)量，并加入四川省內(nèi)地的貿(mào)易活躍區(qū)，提髙了調(diào)查的合理性。

目前，我國(guó)境內(nèi)尚無非洲豬瘟發(fā)生的報(bào)道，但國(guó)際及周邊國(guó)家疫情形勢(shì)嚴(yán)峻，本實(shí)驗(yàn)延續(xù)以往探索的實(shí)時(shí)熒光PCR病原檢測(cè)與ELISA抗體檢測(cè)相結(jié)合、高危邊境地區(qū)抽樣的監(jiān)測(cè)模式，為嚴(yán)控非洲豬瘟傳入提供了技術(shù)儲(chǔ)備支撐。未來將繼續(xù)密切關(guān)注各國(guó)非洲豬瘟疫情發(fā)展態(tài)勢(shì)，根據(jù)防控形勢(shì)變化針對(duì)性地加強(qiáng)防控監(jiān)測(cè)，切實(shí)做好非洲豬瘟風(fēng)險(xiǎn)防范工作。

[1] 王華,王君瑋,徐天剛,等.非洲豬瘟流行病學(xué)和診斷方法的研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué),2008(6):544-548.

[2] 李洪利,曹金山,王君瑋,等.非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2012,39(6):37-40.

[3] 張永強(qiáng),吳曉東,張志亮.非洲豬瘟的流行歷史與現(xiàn)狀[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2015,32(9):11-15.

[4] 鄧飛.阻斷ELISA法檢測(cè)非洲豬瘟抗體[J].四川畜牧獸醫(yī)，2016(6):22-23.

[5] 張睿,裴超信,張毅,等.實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)非洲豬瘟病毒[J]. 豬業(yè)科學(xué), 2017, 34(5):48-49.