SPF雞的檢測及在外源病毒檢測時的注意事項

戰(zhàn)玉清

（山東省青島易邦生物工程有限公司，山東 青島 266114）

1 SPF雞的定義及標(biāo)準(zhǔn)

SPF：Specific Pathoge Free即無特定病原。

SPF雞是指人工控制無標(biāo)準(zhǔn)指定微生物感染史，其本身雞所產(chǎn)的蛋供動物實驗及用做生物制品原材料的雞。SPF雞（蛋）的標(biāo)準(zhǔn)因國家、地區(qū)、行業(yè)及企業(yè)有所不同，我國目前執(zhí)行的“GB/T17999-2008-SPF雞微生物學(xué)檢測總則”是目前最基本的SPF雞標(biāo)準(zhǔn)，這項標(biāo)準(zhǔn)相對穩(wěn)定，但隨著科技的進步，對新病原的不斷發(fā)現(xiàn)及對已知病原的不斷認(rèn)識，檢測手段不斷提高而修訂。

2 檢測方法的確定及試劑的標(biāo)準(zhǔn)化

檢測方法的確立，應(yīng)具有良好的特異性和敏感性，操作簡便，易于判定，適宜的檢驗成本。由于SPF雞群的檢測樣品量大，檢測頻率高，試劑用量大，目前基本采用血清學(xué)方法，具體檢測項目及其方法見表1。集試驗；ELISA-酶聯(lián)免疫吸附試驗；CO-臨床觀察；IFA-間接免疫熒光試驗；IA-病原體分離；PCR-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；RT-PCR-反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；EST--胚敏感試驗；SN-血清中和試驗；IFA-間接免疫熒光試驗；TA-試管凝集試驗；HI試驗檢測病毒抗體效價＜1∶16為陰性。

表1 SPF雞檢測項目及其方法

3 生物制品生產(chǎn)使用SPF蛋的必要性

杜絕因垂直傳播蛋內(nèi)帶有的病原混入疫苗中，隨疫苗接種傳播疫病，造成發(fā)病，特別已造成免疫抑制。可介卵垂直傳播的病原如網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒（REV）、傳染性貧血病毒（CAV）、呼腸股病毒（REV）、禽白血病病毒（ALV）、傳染性腦脊髓炎病毒（AEV）、腺病毒Ⅰ群、腺病毒Ⅲ群、支原體、沙門氏菌。

非SPF蛋多帶有抗體，影響疫苗株的增殖，造成疫苗效價不高，保護率低。

4 檢測外源病毒時的干擾因素及方法

禽外源病毒檢驗（用雞檢查法）：除本疫苗所產(chǎn)生的特異性抗體外，不應(yīng)有其他病原的抗體存在，檢驗周期長（一般至少42d，有的需56d），要進行2次不同部位、不同劑量的免疫，所以首先排除外在干擾是非常重要的。

SPF雞在飼養(yǎng)過程中，飼養(yǎng)環(huán)境、運輸過程、轉(zhuǎn)移飼養(yǎng)容器等都要嚴(yán)格把控，應(yīng)避免這些環(huán)境因素造成機體抵抗力低而引起雞本身有其他病原的抗體存在。

在外源病毒檢驗時，為了正確判定疫苗本身是否帶有外源，最好的方式就是在疫苗檢測上雞之前把所有檢驗用雞進行采血，離心后提取血清凍存留樣，再免疫疫苗，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定時間后進行檢測，如果出現(xiàn)陽性，則把之前采過的血清進行檢測，這樣就能順利排除由SPF雞產(chǎn)生的抗體，對復(fù)檢結(jié)果也會有一定的參考。所以，SPF雞在使用前及過程中的監(jiān)控也是必不可少。兩種疫苗不同批次的試驗結(jié)果見附表2。

表2 SPF雞外源檢測前采血試驗