免疫多糖在鯽魚鰓出血防治中的應(yīng)用

王中清，厲成新，魏建中，王禮虎，祭中石，張 琪

（上海市海豐水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，上海 224153）

當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)已成為朝陽(yáng)產(chǎn)業(yè)，世界各國(guó)都越來(lái)越重視漁業(yè)的發(fā)展，并逐漸成為支柱產(chǎn)業(yè)之一。但是發(fā)展的同時(shí)水產(chǎn)養(yǎng)殖也面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖集約化程度的不斷提高，養(yǎng)殖密度的增加，養(yǎng)殖環(huán)境的惡化，病害暴發(fā)呈逐年上升趨勢(shì)，新的流行性病害種類不斷出現(xiàn)，尤其是難以治愈的病毒性疾病，給水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)造成巨大損失。

江蘇沿海地區(qū)大豐是全國(guó)鯽魚的主養(yǎng)地，多年來(lái)一直取得不錯(cuò)的經(jīng)濟(jì)效益。然而隨著病毒性疾病鰓出血的出現(xiàn)，已嚴(yán)重制約了鯽魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，截至2016年蘇北地區(qū)已有80%的塘口不同程度暴發(fā)鰓出血病?？股仡愃幬镫m然能達(dá)到一定控制細(xì)菌性疾病的作用，但對(duì)免疫系統(tǒng)低下及病毒性疾病的防治效果較差，使水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展受到極大威脅。在確保水產(chǎn)品安全與品質(zhì)的前提下，健康養(yǎng)殖已成為人們矚目的焦點(diǎn)。

預(yù)防動(dòng)物疫病應(yīng)從養(yǎng)殖過程入手，防重于治，提高水產(chǎn)動(dòng)物自身免疫力，增強(qiáng)抗病力是促進(jìn)健康養(yǎng)殖的有效途徑。研究發(fā)現(xiàn)微生物多糖具有提高動(dòng)物自身免疫力，增強(qiáng)自身對(duì)細(xì)菌、真菌、病毒及寄生蟲的抵抗力，減少不良應(yīng)激，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能等作用。酵母細(xì)胞壁多糖是目前研究和應(yīng)用比較多的一種真菌免疫多糖，本實(shí)驗(yàn)通過投喂酵母細(xì)胞壁多糖，觀察其對(duì)鯽魚鰓出血病的防治效果，以期為鯽魚鰓出血病的防治提供基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 試驗(yàn)用魚

選取魚種來(lái)源一致，放養(yǎng)規(guī)格一致，飼料廠家一致無(wú)異常現(xiàn)象出現(xiàn)的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)塘口用作血清免疫指標(biāo)測(cè)定實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)用菌株

用于本研究的攻毒的嗜水氣單胞菌分離自患病鯽魚經(jīng)鑒定并保存。

2 方法

2.1 飼料的投喂

將商品飼料在投喂前按照每噸添加4kg的酵母細(xì)胞壁多糖，另外一口塘投喂等量的商品飼料。在鯽魚鰓出血爆發(fā)前的4月上旬與8月下旬連續(xù)不間斷投喂4周。

2.2 菌液培養(yǎng)

將保存在-20℃的嗜水氣單胞菌菌種進(jìn)行活化培養(yǎng)，在固體培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線37℃培養(yǎng)18h。挑取單菌落接種到200mL的液體培養(yǎng)基中，150rpm培養(yǎng)12h的條件下進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

2.3 胸腔注射方法對(duì)試驗(yàn)魚進(jìn)行攻毒試驗(yàn)

飼喂結(jié)束后10d隨機(jī)抽取20尾鯽魚用作嗜水氣單胞菌攻毒試驗(yàn)，對(duì)照組為同等規(guī)格未投喂酵母多糖的鯽魚。

死亡率 (%)=［(試驗(yàn)初魚體尾數(shù)－試驗(yàn)?zāi)~體尾數(shù))/試驗(yàn)初魚體尾數(shù)］×100

免疫保護(hù)率(%)=(1－試驗(yàn)組死亡率/對(duì)照組死亡率)×100。

2.4 免疫指標(biāo)的測(cè)定

在飼喂前1周，飼喂第1周，飼喂第2周，飼喂第3周，飼喂第4周，飼喂后1周6個(gè)時(shí)間段的實(shí)驗(yàn)鯽魚各5條，抽血測(cè)定各時(shí)間段堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶的活性。

3 結(jié)果

3.1 攻毒感染結(jié)果

攻毒后各組的感染死亡結(jié)果如表1，經(jīng)過觀察鯽魚的癥狀為比較明顯的出血病癥狀。

表1 嗜水氣單胞菌攻毒后各組的免疫保護(hù)情況（尾 %）

3.2 免疫指標(biāo)的測(cè)定

免疫后投喂酵母多糖的鯽魚血清超氧化物歧化酶活性檢測(cè)結(jié)果顯示：血清中AKP與SOD活性在投喂拜克后均顯著下降，停喂后均有升高，但是實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，AKP無(wú)顯著差異(P＞0.05)，SOD顯著差異(P＜0.05)。投喂酵母后，AKP與SOD均在第2周達(dá)到頂峰，之后緩慢下降至初期水平。

3.3 鰓出血發(fā)病率與發(fā)病程度

表2 鰓出血發(fā)病塘口數(shù)與干塘數(shù)

由表2可知，在整體自養(yǎng)養(yǎng)殖塘口數(shù)相差不大的情況下，不管是鯽魚精養(yǎng)還是混養(yǎng)模式，公司2017年度鯽魚鰓出血整體發(fā)病率遠(yuǎn)低于2016年，且發(fā)病程度及發(fā)病后干塘率也遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于去年。橫向?qū)Ρ纫裁黠@優(yōu)于周邊養(yǎng)殖戶對(duì)鯽魚鰓出血的防治效果。

4 討論

采用免疫多糖作為免疫添加劑，可以有效地激活魚體免疫反應(yīng)，提高魚類的抗病力，達(dá)到預(yù)防并減少疾病發(fā)生的目的。王慶奎等采用口服的方式用當(dāng)歸多糖對(duì)點(diǎn)帶石斑魚進(jìn)行免疫，攻毒結(jié)果表明投喂當(dāng)歸多糖可以降低點(diǎn)帶石斑魚的死亡率。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示添加酵母細(xì)胞壁多糖組的感染率和發(fā)病程度要明顯低于未添加酵母細(xì)胞壁多糖組，這與王慶奎的研究結(jié)果基本相似。此外，擴(kuò)大酵母細(xì)胞壁多糖應(yīng)用塘口取得的成果顯示，從養(yǎng)殖過程入手，通過投喂酵母細(xì)胞壁多糖提高水產(chǎn)動(dòng)物自身免疫力，是水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物免疫系統(tǒng)低下和抗生素治療病毒類疾病無(wú)效情況下的有效預(yù)防途徑。

堿性磷酸酶（AKP）廣泛存在于各種動(dòng)物體內(nèi)，它在免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用。超氧化物歧化酶是魚類清除機(jī)體自由基的重要物質(zhì)，SOD與生物的免疫有密切關(guān)系。張偉妮等認(rèn)為，在飼料中添加黃芪多糖可以不同程度地提高羅非魚血清中堿性磷酸酶的活性和超氧化物歧化酶的活性。龐素風(fēng)等將云芝免疫活性多糖添加到銀鯽的飼料中，血清超氧化物歧化酶活性顯示明顯上升。本試驗(yàn)結(jié)果顯示超氧化物歧化酶的活性變化與上述的研究基本一致，但是堿性磷酸酶的活性變化有所差異，分析原因可能是魚類不同以及免疫多糖的來(lái)源不同造成的差異。

5 小結(jié)

投喂酵母細(xì)胞壁多糖后AKP與SOD活力指標(biāo)明顯升高，非特異性免疫力得到改善與提高，更易抵抗環(huán)境刺激和病原侵襲。酵母細(xì)胞壁多糖可以增強(qiáng)鯽魚對(duì)嗜水氣單胞菌的抵抗能力，提高鯽魚在細(xì)菌感染狀態(tài)下的存活率。酵母細(xì)胞壁多糖可特異地及非特異地提高機(jī)體的免疫功能，加強(qiáng)抗病毒能力，具有其它防治方法無(wú)法比擬的功效。

[1]王慶奎.當(dāng)歸多糖對(duì)點(diǎn)帶石斑魚非特異性免疫力的影響[D].中國(guó)海洋大學(xué),2012.

[2]孫靜秋,等.凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)ACP、AKP酶的細(xì)胞化學(xué)定位[J].復(fù)旦學(xué)報(bào)∶自然科學(xué)版,2007,46(6)∶947－951.