基于膠體金免疫層析法快速篩查博羅縣水產(chǎn)品中的藥物殘留

梁彬霞，郭荷梅，陳冠禮，李愛群

（1.博羅縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢測(cè)中心，廣東惠州 516100；2.羅陽(yáng)鎮(zhèn)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢測(cè)站，廣東惠州 516100）

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，我國(guó)水產(chǎn)業(yè)的國(guó)際地位也在逐步提升，但水產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題也越來(lái)越受關(guān)注，水產(chǎn)品質(zhì)量安全事件也時(shí)有發(fā)生，它直接關(guān)系到消費(fèi)者身體健康，以及生產(chǎn)者和經(jīng)營(yíng)者的利益，甚至影響到社會(huì)穩(wěn)定[1]。目前，水產(chǎn)品藥物殘留超標(biāo)是危害水產(chǎn)品質(zhì)量安全的主要因素之一，其具有代表性的藥物殘留種類包括硝基呋喃類、氯霉素、孔雀石綠等[2-3]。因此，如何加強(qiáng)水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)控是我國(guó)目前面臨的最重要的問(wèn)題。

博羅縣地處珠三角，是惠州市淡水養(yǎng)殖面積最大的縣區(qū)，全縣池塘養(yǎng)殖總面積近9 380 hm2，主要以草魚、鰱魚、鳙魚、羅非魚、鯽魚養(yǎng)殖為主，是珠三角淡水養(yǎng)殖水產(chǎn)品的主要產(chǎn)區(qū)之一。膠體金免疫層析技術(shù)是基于膜的檢測(cè)方法，具有特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、操作快捷簡(jiǎn)便、定性或半定量的特點(diǎn)，近年來(lái)常被廣大基層檢驗(yàn)人員用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)[4-8]。利用膠體金免疫層析快速檢測(cè)法對(duì)全縣農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和各鎮(zhèn)主要養(yǎng)殖水產(chǎn)品進(jìn)行藥殘測(cè)定，通過(guò)測(cè)定對(duì)全縣水產(chǎn)品的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為建立適用于全縣水產(chǎn)品的質(zhì)量安全檢測(cè)體系，促進(jìn)全縣水產(chǎn)養(yǎng)殖向健康、安全、無(wú)公害的方面發(fā)展，提高消費(fèi)者對(duì)全縣水產(chǎn)品質(zhì)量安全的信心和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展提供借鑒和參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試樣品

檢測(cè)樣品來(lái)源于農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和全縣各鎮(zhèn)養(yǎng)殖基地，將抽取的樣品帶回實(shí)驗(yàn)室，樣本去皮與脂肪，取每份樣品的可食部分約100 g，用組織搗碎機(jī)充分絞碎、混勻，裝入樣品袋，標(biāo)明標(biāo)識(shí)，冷凍保存，備用。

1.1.2 試劑

膠體金快速檢測(cè)試劑盒（包括膠體金快速檢測(cè)試板、各種試劑）。

1.1.3 儀器

LC-2010型液相色譜儀、電子天平、移液器、均質(zhì)機(jī)、水浴振蕩機(jī)、全自動(dòng)氮吹儀、離心機(jī)等。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理

（1） 孔雀石綠（MG）。將樣本解凍至室溫，稱取3±0.05 g均質(zhì)物于15 mL離心管中；加入2 mL提取劑A，再加入1瓶提取劑B（5 mL），振蕩3 min，在室溫（20～25℃） 下以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心5 min。取2 mL上層有機(jī)相至5 mL離心管中，加入100 μL氧化劑，振蕩混勻后，靜置1 min，于50～60℃水浴中用氮?dú)猓ɑ蚩諝猓?吹干；然后加入0.3 mL緩沖液振蕩混勻20 s，待檢。

（2） 呋喃唑酮代謝物（AOE）。將樣本解凍至室溫，稱取3±0.05 g均質(zhì)物至50 mL離心管中。依次加入4 mL蒸餾水、0.5 mL試劑A和0.6 mL衍生化試劑，振蕩混勻5 min，在65℃水浴中孵育30 min。依次加入1 mL試劑B、0.4 mL試劑C和1瓶提取劑（6 mL），振蕩混勻5 min。在室溫（20～25℃） 下以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心5 min，取3 mL上層有機(jī)相至5 mL離心管中，在50～60℃水浴中用氮?dú)獯蹈?。? mL凈化劑溶解干燥物，再加入0.5 mL試劑D顛倒混勻10～15次，在室溫下（20～25℃）以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心2 min，待檢。

（3） 呋喃西林代謝物（SEM）。將樣本解凍至室溫，稱取3±0.05 g均質(zhì)物至50 mL離心管中。依次加入4 mL蒸餾水、0.5 mL試劑A和0.6 mL衍生化試劑，振蕩混勻5 min，在65℃水浴中孵育30 min。依次加入1 mL試劑B、0.4 mL試劑C和1瓶提取劑（6 mL），振蕩混勻5 min。在室溫（20～25℃） 下以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心5 min，取3 mL上層有機(jī)相至5 mL離心管中，在50～60℃水浴中用氮?dú)獯蹈伞Ｈ? mL凈化劑溶解干燥物，再加入0.5 mL試劑D振蕩混勻，在室溫下（20～25℃） 以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心2 min，待檢。

（4） 氯霉素（GAP）。將樣本解凍至室溫，稱取4±0.05 g均質(zhì)物至50 mL離心管中。加入1瓶提取劑（5 mL），振蕩混勻5 min，在室溫（20～25℃） 下以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心5 min。取上層有機(jī)相全部轉(zhuǎn)移至5 mL離心管中，在50～60℃水浴中用氮?dú)獯蹈?。? mL凈化劑溶解干燥物，再加入0.3 mL緩沖液振蕩混勻，在室溫下（20～25℃） 以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心2 min，待檢。

1.2.2 快篩的判定方法

測(cè)呋喃唑酮類代謝物、呋喃西林代謝物、氯霉素時(shí)，用移液器吸取待測(cè)液下層液體80 μL至加樣孔，靜置，按照規(guī)定時(shí)間內(nèi)讀取結(jié)果。

測(cè)孔雀石綠時(shí)，用移液器吸取待檢液體80 μL至微孔中充分混勻，靜置2 min，然后全部滴加至檢測(cè)卡加樣孔，靜置，按照規(guī)定時(shí)間內(nèi)讀取結(jié)果。

結(jié)果判讀示意圖見圖1。

圖1 結(jié)果判讀示意圖

1.2.3 符合性試驗(yàn)[9]

對(duì)經(jīng)試劑卡初篩、液相色譜確認(rèn)的氯霉素、孔雀石綠、呋喃類代謝物等的陽(yáng)性樣品和陰性樣品（各1份），按照1.2中各項(xiàng)目快篩方法分別進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品做6次平行，計(jì)算檢出率，比較與原測(cè)值的符合性情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 符合性試驗(yàn)

通過(guò)符合性試驗(yàn)，比較與原測(cè)值的情況，結(jié)果表明測(cè)試卡陽(yáng)性樣品的假陰性率與陰性樣品的假陽(yáng)性率均為0；檢測(cè)限能達(dá)到：氯霉素≤0.3 μg/kg，孔雀石綠≤2 μg/kg，呋喃西林代謝物≤1 μg/kg，呋喃唑酮代謝物≤1 μg/kg，快檢測(cè)試結(jié)果與樣品LC測(cè)定結(jié)果一致，符合國(guó)家規(guī)定的水產(chǎn)藥殘標(biāo)準(zhǔn)。

符合性試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 符合性試驗(yàn)結(jié)果

2.2 水產(chǎn)藥物殘留情況分析

2016年10月至2017年10月，博羅縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢測(cè)中心抽查了全縣各農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、養(yǎng)殖基地的鰱魚、鳙魚、鯉魚、草魚、鯰魚、羅非魚、鯽魚、鯪魚等13個(gè)品種268個(gè)樣品，應(yīng)用膠體金免疫層析法快速篩查氯霉素、孔雀石綠、呋喃類代謝物等指標(biāo)。

不同品種魚類檢測(cè)出違禁藥物使用情況調(diào)查結(jié)果見表2。

表2 不同品種魚類檢測(cè)出違禁藥物使用情況調(diào)查結(jié)果

結(jié)果表明，博羅縣水產(chǎn)品中仍出現(xiàn)違禁藥物氯霉素、孔雀石綠、呋喃唑酮類代謝物和呋喃西林類代謝物殘留檢出情況；抽檢涉及博羅縣主要經(jīng)濟(jì)魚類13個(gè)品種的268個(gè)水產(chǎn)樣品中，9個(gè)檢測(cè)出氯霉素，8個(gè)檢測(cè)出孔雀石綠，4個(gè)檢測(cè)出呋喃唑酮類代謝物，3個(gè)檢測(cè)出呋喃西林類代謝物。從分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氯霉素和孔雀石綠使用率在測(cè)試的違禁藥物中所占的比例較大，草魚、鳙魚和鯽魚違禁藥物使用率在抽檢的所有魚類品種中所占的比例較高。

3 結(jié)論

基于膠體金免疫層析技術(shù)的特點(diǎn)，結(jié)合符合性試驗(yàn)對(duì)購(gòu)置的試劑卡進(jìn)行驗(yàn)證，檢測(cè)限能達(dá)到：氯霉素≤0.3 μg/kg，孔雀石綠≤2 μg/kg，呋喃西林代謝物≤1 μg/kg，呋喃唑酮代謝物≤1 μg/kg；測(cè)試試劑卡陽(yáng)性樣品的假陰性率與陰性樣品的假陽(yáng)性率均為0；快檢測(cè)試結(jié)果與樣品LC測(cè)定結(jié)果基本一致，符合國(guó)家規(guī)定的水產(chǎn)藥殘標(biāo)準(zhǔn)。

試驗(yàn)在符合性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上應(yīng)用膠體金免疫層析法對(duì)博羅縣農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和全縣各鎮(zhèn)養(yǎng)殖基地的陽(yáng)性樣品進(jìn)行快速篩查，結(jié)果表明博羅縣水產(chǎn)品中仍出現(xiàn)違禁藥物氯霉素、孔雀石綠、呋喃唑酮類代謝物和呋喃西林類代謝物殘留檢出情況，且氯霉素和孔雀石綠使用率在測(cè)試的違禁藥物中所占的比例較大，檢出率分別為3.36%和2.98%；草魚、鳙魚和鯽魚違禁藥物使用率在抽檢的所有魚類品種中所占的比例較高。該結(jié)論為水產(chǎn)品在質(zhì)量安全監(jiān)控中對(duì)于魚類品種和違禁藥物的使用重點(diǎn)跟蹤起到積極參考作用。

在我國(guó)，對(duì)高毒藥物是明令禁止的，但從研究數(shù)據(jù)可以看出博羅縣水產(chǎn)品仍然存在1%～4%的陽(yáng)性樣品。由于禁用物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物多屬難降解物質(zhì)，高濃度長(zhǎng)期使用導(dǎo)致養(yǎng)殖用水和塘底泥受污染，在今后漁業(yè)養(yǎng)殖時(shí)雖未再使用禁用藥物，但仍可能導(dǎo)致水產(chǎn)品檢出禁用藥物殘留，造成水體及水產(chǎn)品的二次污染，這對(duì)水產(chǎn)品的監(jiān)管提出了新的挑戰(zhàn)。在今后的工作中，加快建立適用于博羅縣水產(chǎn)品的質(zhì)量安全檢測(cè)體系的步伐，加強(qiáng)對(duì)易超標(biāo)高風(fēng)險(xiǎn)魚類品、易檢出違禁藥物實(shí)行年度專項(xiàng)抽檢；同時(shí)在年度監(jiān)控計(jì)劃中將養(yǎng)殖用水也列入監(jiān)控范圍，彌補(bǔ)以往這方面的監(jiān)控空白，進(jìn)一步確保餐桌上的水產(chǎn)品安全可靠，以保障消費(fèi)者的健康。

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