實驗動物山羊自體輸血及交叉配血試驗

王振芳, 宋 倩, 王 帥, 王 亞, 馬建青, 吳占勇

(冀中能源邢臺礦業(yè)集團總醫(yī)院, 河北 邢臺054000)

儲存式自體輸血是自體輸血的一種方式,即根據(jù)患者手術(shù)時間的長短、失血量的預(yù)測以及患者自身條件,在手術(shù)前數(shù)天乃至數(shù)月前,采集自體血液儲存,以備手術(shù)使用[1]。 該種輸血方法是一種科學(xué)、安全、合理、經(jīng)濟、易行的輸血新技術(shù),國內(nèi)不少醫(yī)療單位開展該項新技術(shù)[2-4]。 但儲存式自體輸血,在實驗動物山羊術(shù)中應(yīng)用臨床少見。 對山羊的血型鑒定及交叉配血國內(nèi)未見報道。 為防止山羊在新術(shù)式實驗出血過多而導(dǎo)致死亡,筆者嘗試對實驗山羊進行儲存式自體輸血,取得好的效果,同時,也進行了山羊術(shù)前血型鑒定及交叉配血實驗。 現(xiàn)簡介如下。

1 材料與方法

1.1 實驗山羊簡介 本院骨科研究中心飼養(yǎng)的山羊3 只(分別稱山羊A、B、C),其中山羊A 雌性,年齡2 歲,體重28.5 kg;山羊B 雌性,年齡2 歲,體重27.2 kg;山羊C 雌性,年齡1.5 歲,體重23.7 kg。

1.2 試劑與儀器 A 型紅細胞、B 型紅細胞及O 型紅細胞(批號20170907、20171029)為長春博德生物技術(shù)有限責任公司生產(chǎn);微柱凝膠血型卡、配血卡(批號：20170815、20170908),FYQ 免疫微柱孵育器,TD-3A 型血清學(xué)離心機,均為長春博德生物技術(shù)有限責任公司生產(chǎn),2005 - 2 型血庫專用離心機(BaSo 貝索)。

1.3 血型鑒定 (1)將山羊血標本的壓積紅細胞洗滌3 次;(2)用低離子介質(zhì)溶液配成0.8%紅細胞懸液;(3)取出微柱凝膠血型卡,標記檢測號,撕開封口膜;(4)微柱凝膠血型卡前三孔從左到右依次各加入山羊紅細胞懸液50 μL;微柱凝膠血型卡后三孔從左到右依次加入山羊血漿各50 μL,再分別加入0.8%O 型紅細胞、A 型紅細胞、B 型紅細胞各50 μL,離心5 min 觀察結(jié)果。

1.4 交叉配血 采用微柱凝膠卡法和試管法。

2 結(jié)果

2.1 3只山羊血型 鑒定結(jié)果見表1。

2.2 交叉配血試驗 山羊A 與供血山羊B、山羊C交叉配血;山羊B 與供血山羊A、山羊C 交叉配血;山羊C 與供血山羊A、山羊B 交叉配血。 主側(cè)管內(nèi)容物為受血者血清加供血者紅細胞,次側(cè)管內(nèi)容物為供血者血清加受血者紅細胞。 用微核凝膠卡和鹽水試管法主次側(cè)均無溶血無凝集。

3 討論

臨床醫(yī)生在探索某些高難新術(shù)式中,有時需要先在動物身上做實驗。 我院骨科研究中心,選用山羊開展新術(shù)式,在開展新術(shù)式過程中,為預(yù)防因山羊出血過多而達不到手術(shù)預(yù)期效果的情況發(fā)生,實驗人員對山羊開展了術(shù)前儲存式自體輸血,與此同時,還應(yīng)用微柱凝膠新技術(shù),對山羊的血型鑒定和交叉配血試驗進行了嘗試。 微柱凝膠技術(shù)基于生物學(xué)凝膠過濾技術(shù)和離心技術(shù)及免疫化學(xué)抗原抗體特異性反應(yīng),將凝膠抗及人球蛋白血清抗體或其他抗體裝入微柱中離心,抗原抗體反應(yīng)形成凝集塊經(jīng)離心不能通過凝膠間隙,而留在凝膠上層,呈陽性反應(yīng),未凝集的紅細胞離心時還可通過凝集間隙,而沉積于凝膠管底部,呈陰性反應(yīng)[5]。 該方法所用紅細胞不用洗滌,操作方法簡便,尤其適合批量標本檢測,且試驗結(jié)果明確可靠,重復(fù)性好,判讀結(jié)果人為因素少,并可拍照永久保存。

表1 3 只山羊血型鑒定結(jié)果

由表1 可知,山羊血型正定型時,山羊的紅細胞加入微柱凝膠血型卡中,微柱管中的單克隆抗-A、抗-B、抗-D 均出現(xiàn)陰性結(jié)果。 正定型結(jié)果好似人類O 型RhD 陰性血型;反定型山羊血清加人類Ac、Bc全出現(xiàn)凝集現(xiàn)象,反定型也似人類O 血型,但對照管山羊血清加O 型標準紅細胞,同樣出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。 對照管內(nèi)所加的O 型標準紅細胞,因其紅細胞上無抗原,無論待檢山羊為何血型,不應(yīng)該出現(xiàn)凝集紅細胞現(xiàn)象。 對照管出現(xiàn)陽性結(jié)果,推測可能有兩種原因：其一可能有干擾因素存在,其二可能山羊血清中有抗人類紅細胞的種族抗體。 由于試驗的標本例數(shù)太少,有待于日后擴大樣本,探索檢測山羊血型更匹配的方法。

筆者對山羊術(shù)中輸血設(shè)計了兩套方案：其一自體輸血,3 只山羊均在術(shù)前2 ～3 周各采自體全血100 mL,術(shù)中將預(yù)存血液回輸于山羊,山羊術(shù)中、術(shù)后均無輸血反應(yīng),術(shù)后也未發(fā)生傷口感染,山羊輸血后效果良好。 其二異體輸血準備,為防止山羊術(shù)中萬一大出血,實驗人員術(shù)前將山羊A、山羊B、山羊C 均進行了交叉配血,3 只山羊互相配血結(jié)果全為陰性,一旦任何1 只山羊術(shù)中大出血,輸自體血后仍然需要輸血時,其他待備山羊的預(yù)存血液均可輸用。