羊流產(chǎn)衣原體滅活疫苗對綿羊流產(chǎn)的治療效果觀察

王文勇, 劉寶漢, 馬元蓮, 解安敏, 周繼章, 蔡金山

(1. 青海省互助縣畜牧獸醫(yī)工作站, 青海 互助810599 ;2. 中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所 家畜疫病病原學國家重點實驗室, 甘肅 蘭州730046 ;3. 青海省動物疫病預防控制中心, 青海 西寧810000)

衣原體(Chlamydia) 是嚴格胞內(nèi)寄生的革蘭陰性細菌,直徑0.2 ～0.5 μm,介于立克次體和病毒之間,能夠通過0.45 μm 濾膜,只能在宿主細胞內(nèi)生長,不能像大部分細菌一樣生長在瓊脂平板上。 衣原體病由不同種的衣原體感染引起,廣泛地流行于動物界和人類,是一種高度接觸性傳染病。 其中,流產(chǎn)衣原體主要寄生于豬、牛、羊等多種動物生殖道黏膜表面的上皮細胞內(nèi),能夠引發(fā)生殖道黏膜受損,導致母畜流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱胎等,還可能引發(fā)公畜睪丸炎、尿道炎、龜頭和包皮炎等,并且偶爾也會對妊娠婦女產(chǎn)生巨大的威脅,引起流產(chǎn)或急性感染[1]。 流產(chǎn)衣原體是羊地方性流產(chǎn)(OOEA)的病原,也能引起豬、牛等多種脊椎動物在妊娠晚期發(fā)生流產(chǎn),造成嚴重經(jīng)濟損失。 作為一種嚴重的人獸共患病病原,其防控研究具有非常重要的公共衛(wèi)生及經(jīng)濟意義。

我國對羊衣原體病的研究開始于1978 年,科研人員對青海、西藏、內(nèi)蒙以及甘肅等地的羊流產(chǎn)病料進行了分離、鑒定和免疫學研究[2-3],調查報道這些地區(qū)山羊的流產(chǎn)率高達20% ～25%。 何存利等對寧夏各地區(qū)的16 個規(guī)模化羊場進行了衣原體病調查,發(fā)現(xiàn)羊場的陽性率為100%,羊群的平均陽性率為19. 3%[4]。 何成基等采用衣原體間接血凝試驗對青海省海北州門源縣、祁連縣、剛察縣和海晏縣的1 223 份羊血清進行了檢測,結果顯示,公羊血清陽性率為6.18%,生產(chǎn)母羊血清陽性率為8.07%[5]。 成偉偉等對采自全國8 個省(區(qū))的羊血清樣本進行檢測,陽性率達46.09%(342/742),顯示羊衣原體在我國流行嚴重[6]。

青海省互助縣是畜牧業(yè)養(yǎng)殖大縣,目前全縣共存欄羊44.8 萬只,其中,規(guī)模養(yǎng)殖場存欄量占總存欄量的51.38%,散養(yǎng)戶存欄量占總存欄量的48.62%,規(guī)模養(yǎng)殖場存欄占全縣存欄量的比重越來越大,規(guī)模養(yǎng)殖業(yè)呈現(xiàn)“半放牧+半舍飼”和“全舍飼”的新型養(yǎng)殖方式。 由于規(guī)模養(yǎng)殖飼養(yǎng)密度大,衣原體病感染呈逐年上升趨勢,在預防免疫中發(fā)現(xiàn)衣原體疫苗對已感染衣原體病的母羊似乎有一定的治療作用,為了證實治療效果,用衣原體疫苗對流產(chǎn)母羊進行了免疫治療研究。

1 材料與方法

1.1 主要材料 布魯菌病用虎紅平板凝集試驗試劑盒(批號為201602),購自哈藥集團生物疫苗有限公司;接種用羊衣原體卵黃囊甲醛滅活疫苗(為試驗苗,批號為201603)、衣原體間接血凝試驗試劑盒(批號為151120)與弓形蟲用間接血凝試驗試劑盒(批號為150520),購自中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所;試驗動物試驗羊為互助縣塘川鎮(zhèn)某專業(yè)合作社飼圈養(yǎng)小尾寒羊母羊,全部為產(chǎn)一胎以上經(jīng)產(chǎn)母羊。

1.2 試驗方法 本研究在青海省互助縣塘川鎮(zhèn)某專業(yè)合作社進行,從2016 年3 月2 日至2016 年10月10 日,共218 d。 對試驗母羊在衣原體疫苗免疫前進行內(nèi)外寄生蟲驅蟲,并注射羊四聯(lián)苗(羊快疫,羊猝阻,羊腸毒血癥,羔羊痢疾)、小反芻獸疫疫苗。

1.2.1 分組 采集流產(chǎn)母羊的血清進行衣原體間接血凝試驗,將檢測出的衣原體陽性母羊分為A、B 二個組,其中A 組為試驗組,進行衣原體疫苗注射免疫,B組為對照組,注射生理鹽水,每組50 只,共100 只。

1.2.2 疫苗接種前血清學檢測 (1)樣本采集：采集試驗羊血樣共計100 份,采集后置室溫下,待凝固后用離心機分離血清,待檢;(2)布魯菌病用虎紅平板凝集試劑盒進行檢測,布魯菌病虎紅平板凝集試驗判定標準：+ + + + 凝集塊呈菌叢狀,凝塊間液體明顯清亮;+ + + 凝集反應較強,液體比較清亮;+ +形成較明顯卷邊,凝集塊間液體稍清亮; + 稍能查到凝集,稍有卷邊形成,凝集物間液體呈紅色; -無凝集,呈均勻和粉紅色。 陽性血清用試管凝集試驗進行復檢。 衣原體病用衣原體間接血凝試劑盒進行檢測,判定標準為對照各孔成立,則被撿血清1∶24 孔出現(xiàn)“ + +”以上者為陽性;1∶22 孔出現(xiàn)“ +”以下者為陰性;1∶22 孔“ + +”至1∶24 孔“ +”以下者為可疑。 弓形蟲用間接血凝試劑盒進行檢測,判定標準為被撿血清效價達到或超過1 ∶26 為陽性,“ + +”為陽性終點。

1.2.3 疫苗免疫 從4 月至5 月份對配種25 ～30 d內(nèi)的A 組50 只試驗母羊全部進行免疫,每只羊肌肉接種羊衣原體卵黃囊甲醛滅活疫苗2 mL,B 組50只對照母羊全部接種2 mL 生理鹽水,免疫后按照本養(yǎng)殖場正常養(yǎng)殖程序進行分組飼養(yǎng)。 自分組飼養(yǎng)開始,記錄各組母羊的妊娠數(shù)、流產(chǎn)數(shù)、流產(chǎn)率、產(chǎn)羔數(shù)、產(chǎn)死羔數(shù)、產(chǎn)死胎率,并統(tǒng)計分析。

2 結果

2.1 疫苗接種前血清學檢測 共檢測100 份血清,經(jīng)檢測,布魯菌病和弓形蟲陽性率均為零,衣原體陽性率為100%,見表1。

表1 疫苗接種前血清學檢測結果

2.2 疫苗接種后結果統(tǒng)計 A 組免疫注射后,母羊的流產(chǎn)、產(chǎn)死胎現(xiàn)象明顯減少,從2016 年6 月至7月份對免疫后母羊調查統(tǒng)計,A 組50 只母羊中,妊娠母羊48 只,妊娠率為96%,48 只妊娠母羊中沒有出現(xiàn)流產(chǎn)現(xiàn)象,流產(chǎn)率為0;B 組50 只母羊中,妊娠母羊49 只,妊娠率為98%,在49 只妊娠母羊流產(chǎn)9只,流產(chǎn)率為18.4%,A 組比B 組流產(chǎn)率降低了18.4%;A 組產(chǎn)羔95 只,死胎2 只,死胎率為2.1%,B 組產(chǎn)羔79 只,死胎24 只,死胎率為30.4%,A 組比B 組死胎率降低了28.3%,見表2。

3 討論

流產(chǎn)衣原體引起的羊地方性流產(chǎn)作為一種重要的人獸共患傳染病,不僅給養(yǎng)羊業(yè)造成了相當大的經(jīng)濟損失,也危及人員健康。 懷孕期的婦女被流產(chǎn)衣原體感染可能會導致嚴重的敗血癥進而發(fā)生流產(chǎn)或產(chǎn)下死胎。 作為一種世界性的流行性疫病,羊地方性流產(chǎn)危害嚴重,羊衣原體病的防治工作受到人們的廣泛關注。 因此,探究羊衣原體病的診斷和防治措施對提高羊養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益具有十分重要的意義。

表2 疫苗接種后結果統(tǒng)計

目前對于已經(jīng)發(fā)病的羊只采取措施,主要為添加抗生素進行治療。 根據(jù)患病羊體出現(xiàn)癥狀的不同,需要采用不同的治療手段。 針對呼吸道、敗血癥、生殖道感染等癥狀,需要采用復方芐星青霉素3號進行注射,每次注射200 萬IU ～300 萬IU,每天2次,連續(xù)注射3 d。 針對衣原體結膜炎癥狀,則需要在飲水和飼料中加入磺胺二甲嘧啶鈉,飲水的混入劑量為1 g/15 ～20 kg·bw,而飼料中是按照1 g/8 ～12 kg·bw 量,進行混飼。 對于呼吸道感染、骨髓炎、關節(jié)炎和軟組織感染等癥狀,要按照0.03 mL/kg·bw劑量,注射鹽酸林可霉素,每天2 次,連續(xù)3 d[7]。 但是由于抗生素與化學合成藥物在畜牧生產(chǎn)中濫用,飼料中抗菌藥物的添加等,導致病原體出現(xiàn)耐藥性、甚至變異,同時藥物殘留問題也逐漸浮現(xiàn)出來,因此,尋找綠色、高效、有利于生物體健康、有利于環(huán)境保護以及提高養(yǎng)殖效益的能夠代替抗生素的新型生物治療制劑迫在眉睫。 作為眾多疫苗的一種,治療性疫苗是指在已感染病原生物或患某些疾病的機體中,可誘導機體產(chǎn)生特異性或非特異性免疫應答,從而達到治療疾病的制品,具有廣泛的應用前景[8]。

從本試驗結果可以看出,衣原體感染母羊引起懷孕后期流產(chǎn)中,除在頭胎中流產(chǎn)外,有少數(shù)母羊流產(chǎn)一胎后還會繼續(xù)流產(chǎn)數(shù)胎,而且在初產(chǎn)羔羊中死胎多,死胎率達到了30.4%,是導致養(yǎng)殖效益低的主要原因。 用羊衣原體卵黃囊甲醛滅活疫苗按每只2 mL 免疫注射后,該疫苗對配種后1 個月內(nèi)的衣原體陽性母羊有良好的治療效果,母羊流產(chǎn)、死胎現(xiàn)象明顯減少,但是,仍然有流產(chǎn)現(xiàn)象發(fā)生,這是否與免疫時間有關(如懷孕前1 個月),因為,感染母羊一旦懷孕,從理論上來說,懷孕胎兒立刻受到衣原體的侵襲,從而導致一定的損傷。 這時候免疫,也許生命力弱的胎兒無法得到很好的免疫治療,最后死亡,導致流產(chǎn)。 另外,眾所周知,獸用疫苗基本用來預防動物疾病的,就當前而言,未見到預防疫苗具有治療效果的相關報道。 因此,羊流產(chǎn)衣原體滅活疫苗是否確有一定的治療效果,還應展開進一步研究,從分子的水平對衣原體滅活疫苗的治療效果進行闡釋。