牛羊布病的診斷及防治

通遼市科爾沁左翼后旗農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)站 028100

1 病原

布魯氏菌為革蘭氏陰性短桿菌，大小為0.6～1.3um×0.5～0.7um，散在分布，無(wú)芽孢及鞭毛，在條件不利時(shí)有形成夾膜的能力。該菌難以著色，吉姆薩染色呈紫色。該菌屬包括6個(gè)種19個(gè)生物型。按生化和血清學(xué)反應(yīng)可分為馬爾他布魯菌(羊型)、流產(chǎn)布魯菌(牛型)和豬布魯菌(豬型)，另外還有森林鼠型、綿羊附睪型和犬型。感染人者主要為羊、牛和豬型。其中致病力最強(qiáng)的為羊型，其次為豬型，牛型最弱。傳染源是患病的羊、牛、豬，病原菌主要存在于病畜的組織、糞便、尿液、乳汁、產(chǎn)道分泌物、羊水、胎盤及皮毛內(nèi)。消化道、呼吸道和生殖道是主要的感染途徑，也可通過(guò)損傷的皮膚和黏膜感染，常呈地方性流行。人主要通過(guò)皮膚、黏膜、消化道和呼吸道感染，尤其以感染羊種布魯氏菌、牛種布魯氏菌最為嚴(yán)重。豬種布魯氏菌感染人較少見，犬種布魯氏菌感染人罕見，綿羊附睪種布魯氏菌和沙林鼠種布魯氏菌基本不感染人。

2 臨床癥狀

（1）牛的潛狀期為2周至6個(gè)月。母牛最明顯的臨診癥狀是流產(chǎn)，通常發(fā)生于妊娠后的6～8個(gè)月。流產(chǎn)前數(shù)日表現(xiàn)出分娩預(yù)兆，陰道黏膜潮紅腫脹，有粟粒大紅色的結(jié)節(jié)，陰唇及乳房腫脹，不久即發(fā)生流產(chǎn)。流產(chǎn)胎兒多為死胎，有時(shí)產(chǎn)下弱犢，往往存活不久。大多數(shù)母牛流產(chǎn)后伴發(fā)胎衣停滯和子宮內(nèi)膜炎，從陰道內(nèi)流出污穢不潔的紅褐色惡臭分泌物，持續(xù)2～3周，有的病例長(zhǎng)期不愈，不能妊娠。非妊娠牛常常發(fā)生關(guān)節(jié)炎和局部腫脹，多見于膝關(guān)節(jié)。病公牛發(fā)生睪丸炎、附睪腫脹、關(guān)節(jié)炎及局部腫脹，配種能力降低。牛布魯氏菌病的病程為慢性經(jīng)過(guò)，可延續(xù)數(shù)年之久。明顯癥狀消失后，如不伴發(fā)慢性子宮炎可自愈。

（2）妊娠病母羊的主要臨床癥狀是流產(chǎn)，多發(fā)于妊娠后的3～4個(gè)月。流產(chǎn)前的癥狀一般不明顯，部分病羊在流產(chǎn)前2～3天呈現(xiàn)胃腸弛緩和精神沉郁癥狀，常喜伏臥，食欲減退，飲欲增加，體溫升高，陰道流出黏液性或黏性血樣分泌物，還可能有乳房炎、關(guān)節(jié)炎、滑膜炎及支氣管炎癥狀。病公羊經(jīng)常發(fā)生睪丸炎、附睪炎及多發(fā)性關(guān)節(jié)炎。

3 診斷

（1）母牛最顯著的臨診癥狀是流產(chǎn)。流產(chǎn)前數(shù)日除表現(xiàn)出陰唇和乳房增大、肷部與肋部下陷及生殖道發(fā)炎等分娩預(yù)兆外，流產(chǎn)時(shí)胎水多清薄，但有時(shí)渾濁含有膿樣絮片。公牛有時(shí)可見陰莖潮紅腫脹，更常見的是睪丸炎、附睪炎、腱鞘炎和滑液囊炎。妊娠母羊流產(chǎn)常發(fā)生在妊娠后的90～110天，食欲減退、精神萎頓、起臥不安，陰道中流出黃色或灰黃色黏液，流產(chǎn)母羊發(fā)生子宮內(nèi)膜炎，排污穢惡露。也有早產(chǎn)、產(chǎn)死胎、乳房炎、關(guān)節(jié)炎、跛行、公羊睪丸炎和附睪炎等。

（2）病理學(xué)診斷。該病的主要病變?yōu)樯称鞴俚难仔詨乃?，脾、淋巴結(jié)、肝、腎等器官形成特征性肉芽腫(布病結(jié)節(jié))，有的可見關(guān)節(jié)炎。胎兒主要呈敗血癥病變，漿膜和黏膜有出血點(diǎn)和出血斑，皮下結(jié)締組織發(fā)生漿液性和出血性炎癥。

（3）細(xì)菌學(xué)診斷。流產(chǎn)胎兒的胎衣和胃內(nèi)容，病畜的肝、脾、乳房、腹股溝及下頜骨等處的淋巴結(jié)，子宮和睪丸等組織都是布魯氏菌分離的好材料[1]。將其制成涂片，使用柯茲羅夫斯基染色法染色，通過(guò)顯微鏡觀察，可見單個(gè)、成對(duì)或成堆存在的紅色球桿狀細(xì)菌，其他細(xì)菌被染成綠色或藍(lán)色[2]。也可將采取的病料接種于培養(yǎng)基、敏感的動(dòng)物或未受精的雞卵進(jìn)行分離培養(yǎng)。雖然細(xì)菌學(xué)檢查是確診人畜間布魯菌病最可靠的方法，可鑒定布魯菌的各生物型，但是組織中含布魯菌的量比較少，又很難獲得未污染的樣本[3]。進(jìn)行血和組織培養(yǎng)時(shí)，因敏感性低、耗時(shí)和生物安全要求較高等因素，使這種診斷方法不宜推廣，常規(guī)檢測(cè)應(yīng)用時(shí)受到了限制。

（4）血清學(xué)診斷。血清學(xué)診斷的基本原理是用已知的布魯菌抗原檢測(cè)被檢動(dòng)物血清中的抗體確定是否被感染，結(jié)合臨床癥狀等分析發(fā)病情況。臨床中常用的血清方法有虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)等，這些血清學(xué)方法各具優(yōu)點(diǎn)、各有不足，所以臨床中同時(shí)使用幾種方法來(lái)綜合分析其檢測(cè)結(jié)果。

①虎紅平板凝集試驗(yàn)。取一潔凈玻璃板，用玻璃鉛筆劃分為4cm2的方格，在玻璃板上標(biāo)記各受檢血清號(hào)，然后加相應(yīng)血清30ul，接著在受檢血清旁滴加抗原30ul，用牙簽將各格中的血清和抗原混勻，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)玻璃板，5分鐘后在對(duì)照組完全成立的條件下判讀結(jié)果。

徐春厚等人在1995年報(bào)道，使用虎紅平板凝集試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)、二巰基乙醇試管凝集試驗(yàn)和致敏紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)檢測(cè)了32份奶牛血樣，比較了這4種診斷方法的優(yōu)缺點(diǎn)、符合率和檢出率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)虎紅平板凝集試驗(yàn)檢出的陽(yáng)性率最高，占90.63%，其他3種診斷方法基本類似；這4種診斷方法的陰陽(yáng)性符合率僅為50%，二巰基乙醇試管凝集試驗(yàn)與試管凝集試驗(yàn)，這兩者與致敏紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)的符合率偏低。由此看出，診斷布魯菌病不可單用一種檢測(cè)方法來(lái)判定，必須結(jié)合幾種檢測(cè)方法來(lái)綜合判定，因?yàn)橛锌赡艹霈F(xiàn)非特性結(jié)果[4]。1981年呂南平報(bào)道，虎紅平板凝集試驗(yàn)與抗球蛋白試驗(yàn)要比試管凝集試驗(yàn)、半胱氨酸試驗(yàn)敏感性高，而虎紅平板凝集試驗(yàn)比抗球蛋白試驗(yàn)的操作程序要簡(jiǎn)單得多?；⒓t平板凝集試驗(yàn)簡(jiǎn)便易行、成本低廉，適用于布魯菌病大面積檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查，我們國(guó)家將其作為布魯菌病診斷的初篩檢測(cè)方法。

②試管凝集試驗(yàn)。用0.5%石炭酸生理鹽水稀釋牛血清 1∶25、1∶50、l∶100 及 l∶200，檢驗(yàn)羊血清時(shí)，稀釋度為 1∶12.5、l∶25、1∶50 及 1∶100， 稀釋后加入 l∶20 倍稀釋抗原，置37～38℃溫箱中20～22小時(shí)，取出在室溫中靜止2小時(shí)判定結(jié)果。試管凝集試驗(yàn)是各國(guó)診斷布魯菌病的常規(guī)血清學(xué)診斷方法，至今仍在臨床中廣泛使用。1997年馮元璋描述，試管凝集試驗(yàn)是比較敏感、特異和穩(wěn)定的診斷方法，它可以檢測(cè)人畜血清中三類免疫球蛋白：IgG、IgM 和 IgA，IgG2、IgM 是其主要檢測(cè)的抗體，而且此診斷方法檢測(cè)IgM的敏感性明顯高于IgG2，因此試管凝集試驗(yàn)可作為人畜間布魯菌病的早期診斷[5]。此診斷方法簡(jiǎn)便，判定容易，特異性較強(qiáng)，具有很高的診斷價(jià)值，是我國(guó)診斷布魯菌病法定的診斷方法。但是此診斷方法因受各種因素影響，可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果，而且有些感染動(dòng)物的抗體滴度未必都能達(dá)到檢測(cè)水平，所以單獨(dú)使用此診斷方法容易造成漏診和誤診，因此應(yīng)采取綜合診斷為妥。

③瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。此項(xiàng)試驗(yàn)技術(shù)已成功用于檢測(cè)綿羊附睪種布魯菌病沉淀抗體，被列為檢測(cè)綿羊布魯菌病的常規(guī)方法，但是不能區(qū)別綿羊附睪種還是羊種布魯菌感染。另外，此試驗(yàn)與補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)相同，主要檢測(cè)的是IgG型抗體，所以兩者的檢測(cè)結(jié)果比較一致。該試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單易行，特異性較高，但敏感性較低，因此對(duì)陽(yáng)性病畜有診斷意義。但是陰性病畜不能排除無(wú)布魯菌病，使之在臨床應(yīng)用上受到了限制。

檢疫和診斷布魯菌病主要采用血清學(xué)和細(xì)菌學(xué)方法。細(xì)菌培養(yǎng)耗時(shí)，而易污染周圍環(huán)境，存在實(shí)驗(yàn)室人員感染的風(fēng)險(xiǎn)。培養(yǎng)布魯菌要求在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，細(xì)菌培養(yǎng)方法當(dāng)前很少采用。血清學(xué)檢測(cè)方法種類繁多，是布魯菌病流行病學(xué)監(jiān)測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法。

4 防治措施

（1）防止外來(lái)牛羊布病感染者?？刂圃摬魅胱詈玫霓k法是自繁自養(yǎng)。必須引進(jìn)種畜或補(bǔ)充畜群時(shí)，要嚴(yán)格執(zhí)行檢疫，將引進(jìn)種畜隔離飼養(yǎng)2個(gè)月，然后進(jìn)行布病檢測(cè)，全群2次免疫生物學(xué)檢查為陰性者才可以與原有牲畜混群飼養(yǎng)。

（2）做好感病牛羊的凈化工作。定期檢疫，每年至少檢疫1次，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)帶菌者立即淘汰處理。對(duì)已經(jīng)感染的牛羊做好無(wú)害化處理，同時(shí)將圈養(yǎng)感染布病牛羊的圈舍、產(chǎn)生的垃圾、用具、運(yùn)輸工具以及周圍的建筑物進(jìn)行嚴(yán)格消毒。同時(shí)工作人員也要做好自身的防護(hù)，消毒時(shí)要著防護(hù)服、口罩等。

（3）做好牛羊布病的預(yù)防與檢疫。由于牛羊布病的感染率的逐年遞增，這嚴(yán)重威脅到牛羊養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和當(dāng)?shù)厝藗兊慕】禒顩r。因此必須提前預(yù)防，做好牛羊的免疫接種工作。目前國(guó)內(nèi)布病主要疫苗有A19、M5、S2，由于抗體活性較強(qiáng)，A19、M5 不能用于懷孕動(dòng)物。另外還要對(duì)牛羊進(jìn)行定期的檢疫工作，防止后期由于其他原因造成的布病感染。

（4）做好人員預(yù)防并加大宣傳力度。人類布病的預(yù)防，特別要注意職業(yè)性感染，凡在動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、動(dòng)物產(chǎn)品加工廠的工作者以及獸醫(yī)、實(shí)驗(yàn)室工作人員，必須嚴(yán)守防護(hù)制度，尤其在子畜大批生產(chǎn)季節(jié)，更要特別注意，做好相應(yīng)的防護(hù)措施；患病動(dòng)物乳肉食品必須滅菌后食用；必要時(shí)可用疫苗（如104M苗）皮上劃痕接種，接種前應(yīng)進(jìn)行變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，陰性反應(yīng)者才能接種。同時(shí)各級(jí)地方政府要加強(qiáng)布病對(duì)牛羊養(yǎng)殖、人類健康危害以及防治措施的宣傳力度，提高人們對(duì)布病危害與防治的認(rèn)識(shí)。另外還要提高防疫工作人員的防治水平，增強(qiáng)工作人員自身的防范能力，避免工作人員感染布病。切斷動(dòng)物源布魯氏菌病，便可減少人間布魯氏菌病的發(fā)生率。因此，防治和根除動(dòng)物布魯氏菌病是控制人間布魯氏菌病的關(guān)鍵。

參考文獻(xiàn)：

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［2］尚德秋,于恩庶,趙恒云,等.布魯氏菌病實(shí)驗(yàn)診斷的非特異性反應(yīng)及其鑒別[M].北京：海洋出版社,1995.

［3］李福興,尚德秋.實(shí)用臨床布魯菌病[M].哈爾濱:黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社,2010.

［4］黃建,李恪梅.布病防治工作中檢測(cè)制劑和技術(shù)的新動(dòng)向[J].中國(guó)地方病雜志，1999,14(2):80-82.

［5］齊景文.布魯氏菌病常用診斷方法應(yīng)用現(xiàn)狀及評(píng)價(jià)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2006,33(8):70-73.