不同稀釋液配方對(duì)種豬精子活力的影響

譚曉山，李 俊，李 平，尹楊莎，陳光候，李鵬程，陳大芳，龍清孟

（貴州省種畜禽種質(zhì)測(cè)定中心，貴州 貴陽(yáng) 550001）

在養(yǎng)豬生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用豬人工授精技術(shù)可有效地提高良種利用率，充分利用雜種優(yōu)勢(shì)，減少疾病的傳播，克服時(shí)間和區(qū)域的差異，節(jié)省人力、物力、財(cái)力，提高經(jīng)濟(jì)效益[1]。影響精液保存效果的因素有很多，除了公豬精液本身的品質(zhì)這個(gè)最直接的原因外，稀釋液的品質(zhì)也是影響精液保存效果的直接原因[2-3]。為研究不同稀釋液配方對(duì)不同種豬精液保存效果的影響，本試驗(yàn)選擇了《豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)范》（GB/T 25172—2010）中的 4種稀釋液配方，以便篩選出對(duì)杜洛克種豬和大約克種豬精液保存效果最佳的配方。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇體況良好、無(wú)繁殖疾病的杜洛克種公豬與大約克種公豬各3頭作為試驗(yàn)動(dòng)物。

1.2 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

試驗(yàn)時(shí)間2017年11月，試驗(yàn)地點(diǎn)位于貴州省納雍縣骔嶺鎮(zhèn)貴州霧翠茗香生態(tài)農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，平均海撥1 970.9 m，采樣時(shí)氣溫約為8℃。

1.3 儀器設(shè)備

全自動(dòng)精液質(zhì)量分析系統(tǒng)（德國(guó)Minitube）、移液器（Eppendorf）、正置顯微鏡（奧林巴斯）、水浴鍋、17℃恒溫箱、高壓滅菌鍋等。

1.4 稀釋液配方

4種不同稀釋液配方組成詳見表1。

表1 不同稀釋液配方組成 g/L

1.5 試驗(yàn)方法

于當(dāng)?shù)貢r(shí)間上午11：00左右，待氣溫上升后通過人工采精方法收集2個(gè)品種種公豬精液，并立即進(jìn)行活力等檢測(cè)，然后按照1∶2的比例進(jìn)行3倍稀釋，稀釋液提前置于37℃水浴鍋中預(yù)熱，以減少對(duì)精子的刺激。精液樣品稀釋完畢后，立即置于17℃樣品運(yùn)輸箱（車載冰箱）中運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室。

分別于17℃保存后的24 h、48 h、96 h，通過全自動(dòng)精子質(zhì)量分析系統(tǒng)對(duì)種豬精液進(jìn)行活力檢測(cè)，載玻片、移液器吸頭等提前置于37℃恒溫加熱板上預(yù)熱。精子活力（前進(jìn)式活力）以呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子所占的百分率表示[4]。

為檢測(cè)稀釋液滅菌處理對(duì)種豬精液保存效果的影響，于采精后分別用滅菌與未滅菌的稀釋液稀釋保存種豬精液，并在17℃保存24 h后進(jìn)行活力檢測(cè)。稀釋液滅菌條件為120℃、高壓（1.2 Mpa）條件下20 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 種豬原精液質(zhì)量

杜洛克、大約克種豬精液質(zhì)量，檢測(cè)結(jié)果詳見表2。

表2 種豬原精液質(zhì)量

2.2 不同稀釋液對(duì)杜洛克種豬精子活力的影響

2.2.1 杜洛克種豬24 h精子活力 精液保存24 h后，在37℃下對(duì)杜洛克種豬精子活力進(jìn)行檢測(cè)，4種配方對(duì)精子活力（前進(jìn)式活力）的影響均差異不顯著。其中，配方4的精子前進(jìn)式活力和快速前進(jìn)活力最高，分別為（70.60±5.94）%、（27.70±3.64）%；配方 2 的最低，分別為（63.91±1.92）%、（15.18±0.35）%，詳見表3。

表3 杜洛克種豬24 h精子活力

2.2.2 杜洛克種豬48 h精子活力 對(duì)保存48 h后的杜洛克種豬精子活力檢測(cè)，除環(huán)狀移動(dòng)活力外，其余指標(biāo)均差異不顯著。其中，配方4的精子前進(jìn)式活力和快速前進(jìn)活力最高，分別為（64.99±20.68）%、（27.83±19.08）%；配方2的最低，分別為（37.95±1.84）%、（4.56±3.71）%；與24 h檢測(cè)結(jié)果一致，詳見表 4。

表4 杜洛克種豬48 h精子活力

2.2.3 杜洛克種豬96 h精子活力 在96 h檢測(cè)時(shí)，4種配方對(duì)杜洛克種豬精子各指標(biāo)差異均不顯著，但配方4保存效果最好，前進(jìn)式活力和快速前進(jìn)活力分別達(dá)（53.44±24.00）%、（18.88±19.75）%；配方 2效果最差，分別只有（17.00±11.77）%、（4.56±4.35）%；這與24 h、48 h檢測(cè)結(jié)果一致，詳見表5。

表5 杜洛克種豬96 h精子活力

2.3 不同稀釋液對(duì)大約克種豬精子活力的影響

2.3.1 大約克種豬24 h精子活力 精液保存24 h后，在37℃下對(duì)大約克種豬精子活力進(jìn)行檢測(cè)，4種配方對(duì)精子前進(jìn)式活力和快速前進(jìn)活力的影響均差異不顯著。其中，配方2的精子前進(jìn)式活力最高，為（76.82±4.95）%；配方 4的最低，為（62.26±17.43）%；這與杜洛克種豬相反。配方3的精子快速前進(jìn)活力最高，為（39.13±14.32）%；配方 1的最低，為（19.50±4.67）%；這與杜洛克種豬結(jié)果不一致，詳見表6。

表6 大約克種豬24 h精子活力

2.3.2 大約克種豬48 h精子活力 對(duì)保存48 h后的大約克種豬精子活力檢測(cè)，4種配方對(duì)精子活力的影響均差異不顯著。但配方4的精子前進(jìn)式活力和快速前進(jìn)活力最高，分別為（56.84±14.99）%、（22.52±6.26）%，與杜洛克種豬一致。配方3的精子前進(jìn)式活力最低，為（47.12±37.70）%；配方 1的精子快速前進(jìn)活力最低，為（11.09±5.51）%，與 24 h檢測(cè)結(jié)果一致，詳見表7。

表7 大約克種豬48 h精子活力

2.3.3 大約克種豬96 h精子活力 96 h檢測(cè)精子活力發(fā)現(xiàn)，4種配方對(duì)大約克種豬精子前進(jìn)式活力和快速前進(jìn)活力的影響均差異均不顯著。但配方2的精子前進(jìn)式活力和快速前進(jìn)活力最高，分別為（45.90±38.67）%、（17.29±15.61）%；配方 4的最低，分別只有（19.42±8.42）%、（4.94±0.15）%，詳見表 8。

表8 大約克種豬96 h精子活力

2.4 稀釋液滅菌處理對(duì)精子活力的影響

從表9中可以看出，4種配方經(jīng)高溫滅菌處理后，在鮮精的稀釋倍數(shù)、保存環(huán)境及條件一致的情況下，其精子前進(jìn)活力和快速前進(jìn)活力均顯著低于未滅菌的4種配方。4種配方滅菌處理后，配方3的精子前進(jìn)活力和快速前進(jìn)活力最高，分別為（16.19±0.96）%、（6.19±1.44）%，這一點(diǎn)與未滅菌處理的檢測(cè)結(jié)果基本一致。

表9 稀釋液滅菌處理對(duì)大約克種豬精子活力的影響

3 討論

3.1 不同稀釋液的精液保存效果

96 h內(nèi)，4種配方保存精液對(duì)精子前進(jìn)式活力和快速前進(jìn)活力的影響均差異不顯著。不同配方對(duì)兩個(gè)品種精液保存效果各不同。

對(duì)杜洛克種豬，24 h內(nèi)、48 h內(nèi)和96 h內(nèi)的精子前進(jìn)式活力和快速前進(jìn)活力，配方4的保存效果均是最好，配方2的保存效果最差。在實(shí)際生產(chǎn)中，低溫保存的精液要求精子活力（呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子所占的百分率）不低于0.6[5]（百分制則為60%），因此，4種配方對(duì)杜洛克種豬精液保存效果在24 h時(shí)均是有效的，在48 h時(shí)只有配方4能滿足要求，96 h時(shí)則均達(dá)不到要求。對(duì)大約克種豬，24 h時(shí)和96 h時(shí)，配方2保存效果最佳；48 h時(shí)，配方4效果最好。本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)48 h、96 h時(shí)，4種配方保存的精子前進(jìn)式活力均達(dá)不到0.6。不同配方對(duì)不同品種豬的精液保存效果上存在差異的原因可能與品種有關(guān)，具體原因有待于進(jìn)一步研究。

3.2 稀釋液滅菌的精液保存效果

4種稀釋液配方高溫滅菌后保存的精子前進(jìn)式活力和快速前進(jìn)活力均顯著低于未滅菌的稀釋液，且稀釋液經(jīng)滅菌后由無(wú)色變?yōu)樽攸S色和棕紅色，可能是由于葡萄糖高溫滅菌時(shí)分解產(chǎn)生5-羥甲基糠醛（5-羥基呋喃甲醛）導(dǎo)致的，且溶液的色度與5-羥甲基糠醛含量成正比[6]；而精子是通過糖酵解過程將葡萄糖、果糖等六碳糖分解為乳酸而獲得能量的，且自身缺乏糖類物質(zhì)[4]，從而導(dǎo)致滅菌后的稀釋液保存效果顯著低于未滅菌的稀釋液保存效果。

因此，在實(shí)際生產(chǎn)過程中，添加有葡萄糖等糖類的稀釋液應(yīng)盡量避免高溫滅菌，或滅菌后再添加糖類等物質(zhì)，以免引起相關(guān)物質(zhì)變性而影響精液保存效果。

4 結(jié)論

依據(jù)GB/T 25172—2010《豬常溫精液生產(chǎn)與保存技術(shù)規(guī)范》中的4種稀釋液配方配制的稀釋液，在24 h內(nèi)均可以用于杜洛克和大約克種豬原精液的稀釋和配種。因此，建議在實(shí)際生產(chǎn)過程中杜洛克和大約克豬分別選擇配方4和配方2用于種豬精液稀釋和配種，且為了保證良好的輸配效果，低溫保存時(shí)間不宜超過24 h。同時(shí)，配制的稀釋液不用高溫高壓滅菌處理，以免引起相關(guān)物質(zhì)變性而影響保存效果。

[1]邵順寧，尹慶寧.影響豬人工授精效果的原因及對(duì)策[J].當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，2013（5）：34-36.

[2]王龍.不同稀釋液保存公豬精液的效果試驗(yàn)[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2016，41（4）：3-5.

[3]白永成.淺述影響豬人工授精效果的原因及技術(shù)要點(diǎn)[J].現(xiàn)代畜牧科技，2017（6）：71.

[4]楊利國(guó)主編.動(dòng)物繁殖學(xué)[M].第2版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2010：105.

[5]時(shí)洪君.豬的人工授精操作要點(diǎn)[J].現(xiàn)代畜牧科技，2015（4）：49.

[6]溫玉麟.葡萄糖溶液的穩(wěn)定性[J].藥學(xué)通報(bào)，1959（12）：642-644.