浙貝母提取物外用對大鼠口腔潰瘍模型的影響

張維瓊，徐婷，汪國華

浙貝母是百合科植物浙貝母的干燥鱗莖，道地藥材“浙八味”之首，寧波市海曙區(qū)（因行政區(qū)劃調整，之前劃歸鄞州區(qū)）是其原產(chǎn)保護區(qū)[1]。2015版《中國藥典》記載其味苦、寒、歸肺、心經(jīng)，具有清熱化痰止咳，解毒散結消癰功效[2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，浙貝母具有鎮(zhèn)咳、祛痰、松弛平滑肌、鎮(zhèn)痛抗炎、降壓、活血化瘀、溶石、止瀉、抗菌及抗腫瘤等多種活性[3]。根據(jù)文獻及筆者臨床經(jīng)驗[4]，浙貝母外用可治療口腔潰瘍。本文對浙貝母提取物進行了大鼠口腔潰瘍的藥理研究，以期為臨床用藥提供參考和依據(jù)。現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1實驗動物 SD大鼠，體質量（180±40）g，由浙江大學實驗動物中心提供，實驗動物許可證號：SYXK（浙）2012-0178。

1.2儀器 ME104型電子分析天平，梅特勒-托利多國際貿(mào)易（上海）有限公司；游標卡尺，三豐精密量儀（上海）有限公司。

1.3藥材和試劑 浙貝母，寧波迦葉堂農(nóng)業(yè)科技有限公司，批號：160623；浙貝母提取物，取浙貝母粗粉，加4倍量80%乙醇回流2 h，重復一次，合并濾液，減壓濃縮，即得；桂林西瓜霜，桂林三金藥業(yè)股份有限公司，批號：160824；所用試劑均為分析純或化學純。

1.4方法

1.4.1造模 大鼠90只，根據(jù)大鼠體質量10%水合氯醛溶液3 ml/kg經(jīng)腹腔注射進行麻醉。麻醉大鼠后取6 cm長的雙端開口的玻璃管，其內(nèi)徑為60 mm。玻璃管內(nèi)放置一小棉球于一端，且棉球的底部齊平于玻璃管開口。在管內(nèi)滴入90%冰乙酸溶液使小棉球浸透，然后將內(nèi)置棉球的玻璃管開口平貼于大鼠右側頰黏膜上，燒灼90s后，見該區(qū)域頰黏膜出現(xiàn)大面積不規(guī)則的白色損害，24 h后大鼠右頰實驗區(qū)形成直徑60～100 mm 的圓形或橢圓形潰瘍面，表面覆蓋灰白色假膜，部分腐爛嚴重，大鼠口腔潰瘍模型制成。

1.4.2分組及給藥 第2天，取造模成功的75只大鼠，每組15只，隨機分為空白組（0.9%氯化鈉注射液），浙貝母提取物高劑量組（相當于生藥4.0 g/kg）、中劑量組（相當于生藥2.0 g/kg）、低劑量組（相當于生藥1.0 g/kg）和桂林西瓜霜對照組（1.0 g/kg）。每天給藥4次，涂抹于大鼠口腔潰瘍處，每次間隔3h，連續(xù)6d。記錄潰瘍大小[以潰瘍面直徑（cm）表示]及潰瘍表面感染情況。潰瘍表面感染情況分級，0級：肉眼觀察潰瘍恢復至正常狀態(tài)；Ⅰ級：表面無明顯假膜；Ⅱ級：潰瘍表面有薄層黃白色假膜，周圍無水腫；Ⅲ級：潰瘍表面假膜較厚，且周圍伴有炎性水腫。

1.5統(tǒng)計方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，多組比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-法；計數(shù)資料以率表示，采用2檢驗；等級計數(shù)資料采用 Mann-WhitneyU秩和檢驗。＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

涂抹在大鼠口腔潰瘍處連續(xù)6 d，第7天觀察，浙貝母提取物高、中劑量組及西瓜霜組潰瘍愈合率與空白組差異均有統(tǒng)計學意義（2=5.400、3.968、5.400，均＜0.05）。高、中劑量組及西瓜霜組潰瘍愈合級數(shù)與空白組差異均有統(tǒng)計學意義（=2.210、2.039、2.438，均＜ 0.05）。高、中劑量組在4～6天潰瘍愈合直徑與空白組差異均有統(tǒng)計學意義（均＜0.05），低劑量組各時間點與空白組差異均無統(tǒng)計學意義（均＞ 0.05），但潰瘍愈合直徑都變小，顯示加快愈合作用。除治療后3 d的愈合直徑外，浙貝母高、中劑量組與桂林西瓜霜組潰瘍愈合率、愈合級數(shù)及愈合直徑差異均無統(tǒng)計學意義（均＞0.05）。見表1～3。

3　討論

口腔潰瘍，又稱“口瘡”，是常見的口腔黏膜疾病，主要表現(xiàn)為口腔黏膜出現(xiàn)圓形或橢圓形的潰瘍，潰瘍表淺，呈淡黃色或白色，中央凹陷，邊緣整齊，周圍繞以紅暈，可單發(fā)或多發(fā)，可發(fā)生于口腔黏膜的任何部位[5]。多由于飲食作息不規(guī)律、心里壓力大、緊張疲勞、體虛及免疫力低下等原因引起[6]。目前，建立口腔潰瘍模型方法主要有免疫誘導法、電灼燒法、機械方法、細菌感染誘導法、放射法和化學灼燒法[5,7-9]。本實驗選用經(jīng)典的醋酸復制模型，觀察潰瘍的愈合級數(shù)及愈合直徑。該模型操作簡單易行，適合大規(guī)模的動物實驗，可以作為某些促進口腔黏膜愈合的藥物及抗炎的藥物篩選模型。

中醫(yī)理論素有“咽喉口齒諸病皆屬于火”之說，咽喉口腔、嗓子、牙齒的主要病理變化－紅腫、疼痛、化膿等歸為“火”的表現(xiàn)。西瓜霜具有清熱瀉火、消腫止痛的優(yōu)良功效，被歷代醫(yī)家視之為咽喉、口腔良藥，清代名醫(yī)顧世澄將其正式載入《瘍醫(yī)大全》至今已有二百余年。王海珍[10]選取口腔潰瘍患者92例隨機分為觀察組（西瓜霜噴劑治療）和對照組（西地碘含片治療），各46例。結果示觀察組患者的治療有效率和治療后復發(fā)率均顯著優(yōu)于對照組。結論示西瓜霜噴劑治療口腔潰瘍的療效顯著且復發(fā)率低。因此，本文選擇西瓜霜治療作為對照組。

目前，對浙貝母地上部分研究還不是很多。崔明超等[11]采用LC-LTQ-Orbitrap MS對浙貝母植株各部位中生物堿和黃酮進行了分析，浙貝母植株各部位中鑒定37個生物堿，主要包括7個生物堿（浙貝寧苷、貝母辛、貝母素甲、貝母素乙、去氫鄂貝啶堿或浙貝丙素、鄂貝啶堿或蒲貝素A、貝母辛氮氧化物）及同分異構體；同時鑒定了16個黃酮類成分，主要包括槲皮素、山柰酚及其苷。王翰華等[12]分別采用小鼠氨水引咳法和豚鼠枸櫞酸引咳法研究浙貝母葉與浙貝母花醇提物的止咳活性，小鼠氣管酚紅排泌法研究化痰活性，豚鼠整體動物引喘法研究平喘活性。結果發(fā)現(xiàn)，浙貝母葉醇提物具有明顯的止咳、化痰及平喘活性；浙貝母花醇提物具有明顯的止咳及化痰活性?；谕恢参锊煌课怀：邢嗤蛳嘟幕瘜W成分，開發(fā)中藥非傳統(tǒng)藥用部位有利于中藥資源多途徑、多層次的科學合理利用。例如人參葉、當歸地上莖葉及丹參地上莖葉等[13-15]，均已進行了開發(fā)。浙貝母鱗莖在越冬時，地上部分任其自然枯萎，造成了一定浪費。

表1　對醋酸致大鼠口腔潰瘍愈合數(shù)的影響（ =15）

表2　對醋酸致大鼠口腔潰瘍愈合級數(shù)的影響（ =15）

本實驗在醋酸致大鼠口腔潰瘍的模型基礎上，進行口腔黏膜給藥實驗，發(fā)現(xiàn)浙貝母葉提取物有較強的改善紅腫發(fā)炎的癥狀，促進口腔潰瘍愈合的作用，其作用機制可能與其促進口腔黏膜血液循環(huán)、抗菌及消炎止痛的作用有關，其具體機制有待進一步研究。因口腔潰瘍的發(fā)病原因多樣，免疫法誘導口腔潰瘍動物模型與人類自然發(fā)作極其相似，但該法造模方法復雜，耗時長，口腔潰瘍部位不固定，潰瘍平均愈合面積不容易測量，不適合大規(guī)模動物實驗。本文選取化學燒灼制備口腔潰瘍動物模型，不能反應復發(fā)性口腔潰瘍的發(fā)病機制，所以浙貝母提取物在人體中的使用效果有待進一步研究；但本實驗為浙貝母地上部分的開發(fā)利用，提供了參考和有利的線索。

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表3　對醋酸致大鼠口腔潰瘍愈合直徑的影響（ =15）

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