仔豬傳染性胸膜肺炎母源抗體消長規(guī)律的研究

張　艷， 劉海隆， 林哲敏， 曹宗喜， 譚樹義

(1.海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，海南?？?571100；2.海南省熱帶動物繁育與疫病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南海口 571100)

豬傳染性胸膜肺炎(porcie contagious pleuropneum，簡稱PCP)是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacilluspleuropneumoniae，APP)引起的一種以肺臟出血、壞死及胸膜纖維素性粘連為特征的呼吸道疾病，在世界各地廣泛流行，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失，是國際公認(rèn)的危害現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)的5大疾病之一[1-2]。近些年來，隨著規(guī)?；?、集約化養(yǎng)豬業(yè)的興起，該病的流行呈迅速上升趨勢。筆者經(jīng)血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，海南省規(guī)模豬場豬傳染性胸膜肺炎的抗體陽性率達(dá)到37.65%(436/1 286)[3]。因此，該疾病需要引起養(yǎng)豬業(yè)的高度關(guān)注。

合理接種疫苗是控制該病的有效措施之一，然而仔豬如何才能獲得有效的免疫，關(guān)鍵在于排除母源抗體干擾，確定合適的首免日齡?？偹苤?，如果仔豬的母源抗體水平過高，接種豬傳染性胸膜肺炎疫苗后疫苗會被母源抗體中和，使仔豬產(chǎn)生不了抗體，得不到應(yīng)有的保護(hù)；母源抗體過低接種疫苗，仔豬在免疫空白期則易受環(huán)境中胸膜肺炎放線桿菌的侵襲。因此，本研究于2015年2月檢測了產(chǎn)前接種豬傳染性胸膜肺炎疫苗的母豬所產(chǎn)仔豬在不同日齡的豬傳染性胸膜肺炎母源抗體水平，旨在為豬場豬傳染性胸膜肺炎免疫程序的制定，特別是首免日齡的確定提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　試驗(yàn)動物

以經(jīng)ApxlV ELISA試劑盒檢測為陰性的18頭健康經(jīng)產(chǎn)杜長大三元雜交母豬及其所產(chǎn)18窩仔豬(每窩用4頭，共計(jì)72頭)作為試驗(yàn)動物，由海南澄邁新華達(dá)豬場提供。

1.2　疫苗

豬傳染性胸膜肺炎三價(jià)滅活疫苗(Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型)(批號140704，武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司)，豬傳染性胸膜肺炎三價(jià)滅活疫苗(Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型)(批號1410005，中牧實(shí)業(yè)股份有限公司)。

1.3　主要試劑

豬胸膜肺炎放線桿菌ApxIV-ELISA抗體檢測試劑盒，購自武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司，批號為141004；豬胸膜肺炎放線桿菌(1-9-11型)抗體檢測試劑盒，豬胸膜肺炎放線桿菌(4-7型)抗體檢測試劑盒，豬胸膜肺炎放線桿菌(Ⅱ型)抗體檢測試劑盒，購自法國ID-VET公司。

1.4　試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.4.1試驗(yàn)分組選取健康經(jīng)產(chǎn)母豬隨機(jī)分為3組進(jìn)行雙盲試驗(yàn)，A組(武漢科前豬傳染性胸膜肺炎三價(jià)滅活疫苗組)、B組(中牧豬傳染性胸膜肺炎三價(jià)滅活疫苗組)、C組(非免疫對照組)，每組6頭。母豬所產(chǎn)仔豬的組別同母豬，即A組母豬所產(chǎn)的仔豬歸為A組，B組母豬所產(chǎn)的仔豬歸為B組，以此類推。

1.4.2試驗(yàn)?zāi)肛i免疫A、B 2個試驗(yàn)組的母豬，分別于產(chǎn)前6周和產(chǎn)前2周按照疫苗廠商提供的免疫途徑和劑量免疫接種，C組母豬在產(chǎn)前6周和產(chǎn)前2周頸部肌肉注射2.0 mL生理鹽水。

1.4.3試驗(yàn)仔豬采血及抗體檢測試驗(yàn)?zāi)肛i于二免后14 d耳靜脈采血分離血清；試驗(yàn)仔豬分別于10、20、28、35、42、50、60和70日齡通過前腔靜脈采血并分離血清。

按照ApxIV-ELISA抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行檢測，在630 nm處測量和記錄樣品和對照的吸光度。檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)：S(樣品孔D630 nm)≥P(陽性對照孔D630 nm)×0.25，判為陽性；如果S

棄去經(jīng)ApxIV-ELISA抗體檢測為陽性的血清，陰性血清按照豬胸膜肺炎放線桿菌ELISA抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行檢測，在450 nm 測量和記錄樣品和對照的吸光度。檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)為：S/P<0.3為陰性；S/P≥0.4為陽性；0.3≤S/P<0.4為可疑。

1.5　試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。

2　結(jié)果與分析

2.1　試驗(yàn)?zāi)肛i的豬傳染性胸膜肺炎抗體水平

經(jīng)豬胸膜肺炎放線桿菌抗體檢測試劑盒檢測后，不同廠家生產(chǎn)的豬傳染性胸膜肺炎疫苗在二次免疫后14 d均能產(chǎn)生合格的免疫抗體。

2.2　試驗(yàn)仔豬傳染性胸膜肺炎感染情況

經(jīng)ApxIV-ELISA抗體檢測，對照組有3頭仔豬血清呈陽性，其余試驗(yàn)豬均呈陰性(表1)。

2.3　試驗(yàn)仔豬傳染性胸膜肺炎母源抗體檢測結(jié)果

由表2、表3可知，試驗(yàn)仔豬在10日齡時(shí)均可獲得Ⅰ型胸膜肺炎放線桿菌抗體(抗體陽性率均為100.00%)，大部分仔豬可獲得Ⅶ型胸膜肺炎放線桿菌抗體(抗體陽性率為91.67%、83.33%)，且抗體均維持在較高水平。但是，隨著仔豬日齡的增長，抗體水平和陽性率整體上持續(xù)下降。其中，Ⅰ型胸膜肺炎放線桿菌抗體在A組仔豬42日齡、B組仔豬50日齡時(shí)，處于抗體保護(hù)臨界值(40%)，抗體陽性率低于合格率(70%)；至70日齡，所有仔豬的Ⅰ型胸膜肺炎放線桿菌抗體全部轉(zhuǎn)陰。Ⅶ型胸膜肺炎放線桿菌抗體在試驗(yàn)仔豬28日齡時(shí)已略低于抗體保護(hù)臨界值，抗體陽性率低于合格率；至60日齡，所有仔豬的Ⅶ型胸膜肺炎放線桿菌抗體全部轉(zhuǎn)陰。Ⅱ型胸膜肺炎放線桿菌抗體僅在B組的9頭10日齡仔豬體內(nèi)被檢測到，抗體陽性率為37.50%，且隨著仔豬日齡的增長呈下降趨勢，至35日齡所有仔豬的Ⅱ型胸膜肺炎放線桿菌抗體全部轉(zhuǎn)陰。

表1　試驗(yàn)豬PCP的情況統(tǒng)計(jì)

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

表2　不同日齡試驗(yàn)仔豬胸膜肺炎放線桿菌抗體水平

注：同日齡同型抗體不同組間標(biāo)有不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

表3　不同日齡試驗(yàn)仔豬胸膜肺炎放線桿菌抗體陽性率

3　討論與結(jié)論

由于豬傳染性胸膜肺炎的治療難度較大，多數(shù)情況難以完全治愈，目前最為有效的辦法就是進(jìn)行免疫預(yù)防[4]。研究發(fā)現(xiàn)，仔豬首次免疫時(shí)間的確定除了要考慮疫病的流行情況外，主要取決于仔豬的母源抗體水平[5-6]。母源抗體的被動免疫對新生動物十分重要，既能保護(hù)幼齡動物免受病原菌侵襲，又具有干擾疫苗免疫的副作用。當(dāng)母源抗體過高時(shí)進(jìn)行接種，中和疫苗抗原，使抗體上升不明顯，不能產(chǎn)生免疫效果，甚至?xí)鹈庖呤7-8]。因此，在首免前對仔豬進(jìn)行母源抗體檢測尤為重要。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，免疫合格的試驗(yàn)?zāi)肛i所產(chǎn)仔豬在10日齡時(shí)均可獲得較高水平的Ⅰ型胸膜肺炎放線桿菌抗體，絕大部分仔豬可獲得Ⅶ型胸膜肺炎放線桿菌抗體，少數(shù)仔豬可獲得Ⅱ型胸膜肺炎放線桿菌抗體。但是，試驗(yàn)仔豬所產(chǎn)生的各型胸膜肺炎放線桿菌母源抗體的水平和消長規(guī)律存在差異。如Ⅰ型豬胸膜肺炎放線桿菌抗體在42～50日齡時(shí)，處于抗體保護(hù)臨界值，抗體陽性率低于合格率，故仔豬的首免時(shí)間應(yīng)確定在42～50日齡。Ⅶ型胸膜肺炎放線桿菌抗體在試驗(yàn)仔豬28日齡時(shí)已略低于抗體保護(hù)臨界值，抗體陽性率低于合格率，故仔豬的首免時(shí)間應(yīng)確定在28日齡左右。雖然仔豬中有檢測到Ⅱ型胸膜肺炎放線桿菌抗體，但其水平較低，不能對仔豬起到較好的保護(hù)作用，還須深入研究以獲得免疫效果較好的Ⅱ型豬胸膜肺炎疫苗。

由于目前市場上常售的豬傳染性胸膜肺炎疫苗一般多為二價(jià)和三價(jià)疫苗(Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型或Ⅰ、Ⅶ型)，且豬場豬傳染性胸膜肺炎常為多血清型胸膜肺炎放線桿菌感染，故需針對性地同時(shí)免疫多價(jià)豬傳染性胸膜肺炎疫苗。但從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ型豬傳染性胸膜肺炎疫苗適宜的首免時(shí)間并不相同，且不同廠家的疫苗免疫母豬后，仔豬獲得的母源抗體水平和消長也存在差異。這就要求養(yǎng)豬者必須了解其豬場豬傳染性胸膜肺炎的血清型及仔豬的母源抗體水平，根據(jù)豬場的實(shí)際情況來選擇適宜的疫苗和免疫程序，才能減少免疫失敗，有效防控豬傳染性胸膜肺炎。而試驗(yàn)結(jié)果也提示我們現(xiàn)有疫苗還存在一些不足，如多價(jià)疫苗的首免時(shí)間如何統(tǒng)一以獲得最佳的免疫效果，有待進(jìn)一步研究。

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