硫化氫預(yù)處理對撲熱息痛引起肝損傷的保護作用

黃海進，施洋，仲艷陽，陳大六，焦峰

(1.江蘇淮安市洪澤區(qū)人民醫(yī)院 普外科，江蘇 淮安　223001；2.解放軍第八二醫(yī)院 普外科，江蘇 淮安　223001)

為此，本研究擬通過APAP構(gòu)建小鼠急性肝損傷模型，觀察NaHS是否對APAP造成的肝臟損傷起保護作用，并對其機制進行初步探究。

1　材料和方法

1.1　實驗動物

SPF級C57BL/6J小鼠20只，雄性，6～8周齡，體重20～25g,購置于上海斯萊克動物中心。

1.2　藥品和試劑

1.3　方法

1.3.1構(gòu)建實驗動物模型成年的雄性C57BL/6J小鼠20只被飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境中。將小鼠隨機分為4組：正常組、APAP損傷組、NaHS預(yù)處理組以及單純NaHS處理組。在APAP損傷前2 h，給NaHS預(yù)處理組以及單純NaHS處理組的小鼠經(jīng)腹腔注射NaHS(20 mg·kg-1)；2 h后，對APAP損傷組及NaHS預(yù)處理組的小鼠腹腔注射APAP(150 mg·kg-1)；APAP損傷8 h后處死小鼠，取血、取肝備用。

1.3.2肝臟組織勻漿的制備及總蛋白的提取取黃豆大小肝臟組織，加入1 ml裂解液(含1%PMSF)于研磨機中研磨制成組織勻漿。將制備好的組織勻漿置于冰上裂解30 min后，4 ℃ 12 000 rpm離心15 min。取上清。

1.4　統(tǒng)計學(xué)處理

統(tǒng)計采用SPSS 21.0軟件。計量結(jié)果數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，組間比較采用獨立樣本t檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1　NaSH對小鼠APAP損傷后血清ALT、AST的影響

相對于正常組小鼠，APAP損傷后小鼠ALT與AST的表達量明顯升高(P<0.001)；然而在APAP損傷前采用NaSH預(yù)處理，可見小鼠血清ALT及AST的水平明顯低于單純APAP損傷的小鼠(P<0.001)；與此同時單純采用NaSH處理的小鼠其血清ALT及AST的水平與正常小鼠之間不存在統(tǒng)計學(xué)上的差異(圖1)。

2.2　NaSH對小鼠APAP損傷后肝臟組織病理形態(tài)學(xué)的影響

結(jié)果顯示正常組及單純NaHS處理的小鼠肝臟結(jié)構(gòu)清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細胞索圍繞中央靜脈呈放射狀排列。而經(jīng)過APAP損傷后，可見小鼠肝臟圍繞中央靜脈大片狀的壞死灶；然而當(dāng)NaSH預(yù)處理以后，APAP所造成的大面積壞死灶明顯減輕，其組織結(jié)構(gòu)更加接近于正常組的小鼠(圖2)。

圖1NaSH對APAP損傷后ALT、AST的影響
Fig1EffectofNaSHonALTandASTinmiceafterAPAPinjury

A.對照組；B.APAP損傷組；C.NaHS預(yù)處理組；D.單純NaSH處理組
A.control group; B.APAP injury group;C.NaHS preconditioning group; D.simple NaSH treatment group
圖2NaSH對APAP損傷后對各組小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響(scale bar=200 μm)
Fig2EffectofNaSHonlivertissuestructureofmiceafterAPAPinjury

2.3　NaSH對小鼠APAP損傷肝臟勻漿中凋亡相關(guān)蛋白表達的影響

圖3NaSH對APAP損傷后對各組小鼠肝臟組織凋亡相關(guān)蛋白的表達的影響
Fig3EffectofNaSHontheexpressionofapoptosisrelatedproteininlivertissuesofmiceafterAPAPinjury

2.4　NaSH對小鼠APAP損傷肝臟勻漿中MAPK/JNK信號通路的影響

與正常組小鼠相比，在APAP作用下，小鼠肝內(nèi)MAPK/JNK信號通路的激活明顯增加；此外，相對于單純APAP損傷的小鼠而言，NaSH預(yù)處理的小鼠肝臟內(nèi)MAPK/JNK信號通路的激活情況要明顯較低。(圖4)。

圖4NaSH對APAP損傷后對各組小鼠肝臟組織MAPK/JNK通路激活的影響
Fig4EffectofNaSHonactivationofMAPK/JNKpathwayinlivertissuesofmiceafterAPAPinjury

3　討　　論

本文通過體外給予NaHS，證實了H2S對APAP肝損的保護作用以及可能的相關(guān)機制。為今后APAP肝損的治療提供新的思路。而氧化應(yīng)激、線粒體功能的異常、過氧化亞硝酸鹽的形成、GSH的耗竭同樣被報道在APAP損傷肝臟的過程中起到重要的作用。NaSH是否能夠通過清除或者抑制上述有害物質(zhì)的產(chǎn)生從而對肝臟起到保護作用？NaSH的應(yīng)用是否會對機體產(chǎn)生不良的影響？這些都有待進一步實驗加以研究。

[參考文獻]

[4] 唐小卿,楊春濤,馮鑒強.第三種氣體信號分子硫化氫的神經(jīng)保護作用研究進展[J].中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志,2012,40(1):1-5.