各基因型乳腺癌C—kit的表達及其臨床意義

徐斌 余英豪 鄭曦 吳欽穗

[摘要] 目的 觀察各基因型乳腺癌C-kit的表達情況，探討C-kit檢驗的臨床意義。方法 隨機選取福州市第一醫(yī)院2014年1月—2016年2月間收治的乳腺浸潤癌患者200例作為樣本，對具有完整資料乳腺浸潤癌患者標本進行ER、PR、HER-2、CK5/6、EGFR檢測，并選取100例患者給予Gleevec靶向治療。觀察各基因型乳腺癌C-kit的表達情況，觀察Gleevec靶向治療的臨床療效。結果 腫瘤直徑≤2 cm、無淋巴結轉移、乳腺癌分期為1期與2期、乳腺癌分級為1級者，C-kit的陽性表達率更高。給予Gleevec靶向治療，有效率為67.0%。結論 臨床可采用C-kit檢驗的方法，對患者的病情加以評估，以為疾病治療方案的制定提供參考，使疾病治療的有效率得以提升，使乳腺癌患者的壽命得以延長。

[關鍵詞] 乳腺癌；酪氨酸激酶C-kit；Gleevec靶向治療

[中圖分類號] R5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2018）01（a）-0031-03

Expression and Clinical Significance of C-kit in Breast Cancer of Different Genotypes

XU Bin1， YU Ying-hao2， ZHENG Xi1， WU Qin-sui1

1.Department of Pathology， the First Hospital of Fujian， Fuzhou， Fujian Province， 350009 China； 2.Department of pathology Fuzhou General Hospital， Fuzhou， Fujian Province， 350025 China

[Abstract] Objective This paper tries to observe the expression of C-kit in breast cancer of different genotypes and to explore the clinical significance of C-kit test. Methods 200 patients with invasive breast cancer treated in the First Hospital of Fujian from January 2014 to February 2016 were selected as the samples. ER， PR， HER-2， CK5/6 and EGFR were detected in patients with invasive breast cancer with complete data， and 100 patients were treated with Gleevec targeted therapy to observe the expression of C-kit in various genotypes of breast cancer and to observe the clinical efficacy of Gleevec targeted therapy. Results The tumor diameter less than 2 cm， lymph node metastasis， staging of breast cancer was stage 1 and 2， grade 1 of breast cancer， the positive expression rate of C-kit was higher. The effective rate of Gleevec targeted therapy was 67.0%. Conclusion Clinical C-kit test can be used to evaluate the patients condition， and to provide reference for the formulation of disease treatment program， so that the effective rate of disease treatment can be improved， and the life span of breast cancer patients can be prolonged.

[Key words] Breast cancer； Tyrosine kinase C-kit； Gleevec targeted therapy

乳腺癌為女性常見的惡性腫瘤，是影響女性健康水平及生活質(zhì)量的主要疾病。受特異性初篩指標缺乏的影響，患者早期癥狀多不明顯。確診時，疾病往往已進入進展期。有研究指出[1]，酪氨酸激酶C-kit是參與到腫瘤生長中的主要物質(zhì)，將吉非替尼等酪氨酸激酶抑制劑應用到乳腺癌的治療中，效果顯著。該院2014年1月—2016年2月間收治的乳腺浸潤癌患者中，隨機選取200例作為樣本，觀察了各基因型乳腺癌C-kit的表達情況，并對其臨床意義進行了分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

于該院收治的乳腺浸潤癌患者中，隨機選取200例作為樣本?；颊哔Y料如下：性別均為女性。年齡36～60歲，平均（50.00±3.01）歲?；颊咝g前均未做化療、免疫或放射治療。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化方法檢測HER-2 免疫組化采用EliVisionTMplus免疫組化染色方法。主要步驟如下：石蠟切片脫蠟、水化，PBS沖洗3×3 min；高溫高壓抗原修復；加3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；PBS沖洗3×3 min；加第一抗體，室溫下孵育60 min；PBS沖洗3×5 min；加聚合物增強劑（試劑A），室溫下孵育20 min；PBS沖洗3×3 min；加酶標抗鼠聚合物（試劑B），室溫下孵育30 min；PBS沖洗3×3 min；加新配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察3～10 min，陽性顯色為棕色；自來水沖洗，蘇木素復染，0.1%鹽酸分化，自來水沖洗，PBS沖洗返藍；梯度酒精脫水干燥，中性樹脂封片。

1.2.2 FISH方法檢測HER-2基因擴增 將免疫組化結果中出現(xiàn)強陽性標本病例（+++）及部分中等陽性（++）病例采用FISH方法進行HER-2基因擴增檢測。①切片預處理：取3 μm 厚乳腺癌組織石蠟切片，分別置于涂多聚賴酸載玻片上，置于68℃下過夜烘烤。室溫下組織切片常規(guī)脫蠟至去離子水；50℃用30%[w/v] 酸性亞硫酸鈉處理組織切片30 min。2×SSC 溶液中（pH=7.0） 漂洗5 min×2；37℃下取0.40 mL蛋白酶K 儲存液（20 mg/mL） 溶于40 mL 2×SSC（pH=7.0）得到蛋白酶K工作液（200 μg/mL） ； 將組織切片浸泡在蛋白酶K 工作液中消化；2×SSC 溶液中漂洗5 min×2； 依次置于-20℃預冷的70%乙醇、85%乙醇和100%乙醇中各2 min 脫水； 室溫浸入丙酮溶液中2 min，自然干燥玻片；加熱玻片至56℃。②探針與樣本雜交及洗脫暗處將變性后的探針混合物滴于玻片上組織中央，立即加蓋蓋玻片，避免蓋玻片與組織之間產(chǎn)生氣泡；用橡皮膠封邊；將玻片置于自動雜交儀，83℃6 min，37℃中雜交16～20 h。移去蓋玻片，在46℃水浴箱中依次置于50%甲酰胺/2×SSC 溶液10 min×3，2×SSC 溶液10 min，2×SSC/0.1%NP40 溶液5 min，70%乙醇5 min。③結果觀察玻片自然干燥后滴加10 μL二脒基苯基吲哚（DAPI） 復染液封片20 min 后在熒光顯微鏡下選用特異的單通道濾波片觀察癌細胞核的FISH 結果。綠色熒光為17 號染色體著絲粒，橙紅色熒光為HER2 基因，細胞核由DAPI 復染成藍色。

1.3 觀察指標

①觀察200例患者的乳腺癌基因分型情況，采用Nielsen標準進行判定；②評價各基因型乳腺癌組織C-kit的表達情況；③隨訪分析部分乳腺癌患者（100例）Gleevec靶向治療的療效。

1.4 判定標準

1.4.1 免疫組化法HER-2判讀標準 全部瘤細胞中細胞膜均無染色或<30%瘤細胞膜染色者結果為（-）；瘤細胞>30%細胞膜不完整弱染色者結果為（+）；瘤細胞>30%細胞膜輕至中度完整染色者為（++）；瘤細胞>30%細胞膜完整強染色者為（+++）。

1.4.2 HER-2基因擴增判定標準 紅色信號代表檢測的靶基因，綠色信號代表靶基因所在的染色體著絲粒。檢測EGFR基因計數(shù)30個細胞，統(tǒng)計Ratio值（30個細胞核中紅色信號數(shù)/30個細胞核中綠色信號數(shù)）Ratio<1.8為陰性結果，提示該標本無HER-2基因擴增；Ratio>2.2為陽性結果，提示該標本HER-2基因擴增；Ratio在1.8～2.2之間時，可以選擇增加計數(shù)或重做。

1.4.3 療效判定依據(jù) 患者臨床癥狀有所緩解，病理檢驗結果提示腫瘤無進展時，視為治療有效。

1.5 統(tǒng)計方法

應用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料[n（%）]，進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 200例患者的乳腺癌基因分型情況

200例患者的乳腺癌基因分型情況，見表1。

2.2 各基因型乳腺癌組織C-kit的表達情況

通過對研究結果的觀察發(fā)現(xiàn)，以ER（-）、PR（-）、HER-2（-）為主要特征的三陰型乳腺癌患者共80例，C-kit的表達情況如下：①腫瘤大?。耗[瘤最大直徑≤2 cm者共48例，C-kit陽性表達者共29例，陽性表達率60.4%。與腫瘤直徑>2 cm者相比，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。②淋巴結轉移：該組樣本無淋巴結轉移者共64例，C-kit陽性表達者共43例，陽性表達率67.2%。與伴隨淋巴結轉移者相比，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。③乳腺癌分期：該組樣本乳腺癌1期與2期者共50例，C-kit陽性表達者共35例，陽性表達率70.0%。與3期及4期患者相比，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。④腫瘤分化情況：該組樣本中，1級乳腺癌患者共95例、C-kit陽性表達者共60例，陽性表達率63.2%。2級乳腺癌患者共83例、C-kit陽性表達者共29例，陽性表達率34.9%。3級乳腺癌患者共22例、C-kit陽性表達者共14例，陽性表達率63.6%。

2.3 部分乳腺癌患者（100例）Gleevec靶向治療的療效

采用Gleevec靶向治療方法治療后，100例患者中，共67例治療有效，有效率67.0%。表明Gleevec對有C-kit蛋白表達的乳腺癌細胞具有調(diào)控作用，在治療乳腺癌方面，臨床療效值得肯定。

3 討論

C-kit、PDGF-R、EGFR、VEGFR以及BCR-ABL融合蛋白等，為參與乳腺癌腫瘤生長的主要酪氨酸激酶，其中C-kit是由C-kit原癌基因編碼的受體型跨膜蛋白酪氨酸激酶生長因子受體蛋白[2]。國外研究發(fā)現(xiàn)[3]，該基因表達異常，與乳腺癌的發(fā)病密切相關。各學者的研究成果雖不一致，但均證實了C-kit與乳腺癌之間的關系[4-5]。該文研究發(fā)現(xiàn)，200例乳腺癌患者，乳腺腔內(nèi)A型者占比75.5%，在各乳腺癌基因型中占比最高?；讟有突颊哒急?4.5%，患者數(shù)量僅次于乳腺腔內(nèi)A型。根據(jù)乳腺癌患者腫瘤直徑、腫瘤分期及淋巴結轉移情況的不同，C-kit的表達情況同樣有所不同[6]。腫瘤最大直徑≤2 cm的48例患者，C-kit陽性表達者共29例，陽性表達率60.4%。表明，乳腺癌患者的腫瘤直徑，與之C-kit陽性表達率存在顯著聯(lián)系。隨著腫瘤最大直徑的增大，C-kit的陽性表達率呈下降趨勢。無淋巴結轉移者的64例患者，C-kit陽性表達者共43例，陽性表達率67.2%。C-kit陽性表達率的高低，與乳腺癌患者腫瘤細胞的轉移情況有關，無淋巴結轉移者，C-kit的陽性表達率更高[7-8]。乳腺癌1期與2期的50例患者，C-kit陽性表達率70.0%。表明，隨乳腺癌的進展，C-kit陽性表達率會有所降低。除此之外，乳腺癌分級為1級及3級者，C-kit的陽性表達率均處于60%以上，陽性表達率更高。徐雪瑤[9]指出，腫瘤直徑≤5 cm者，C-kit陽性表達率為51.82%，與該課題研究成果存在一定的差異，判斷由劃分依據(jù)缺乏一致性所導致。該學者同樣指出，無淋巴結轉移者，C-kit陽性表達陽性率64%，臨床分期為1期及2期者，C-kit陽性表達率66%，與該課題研究成果一致。表明該課題所用研究方法，具有一定的有效性。為評估Gleevec靶向治療乳腺癌的臨床療效，該課題選取100例乳腺癌患者，給予Gleevec靶向治療現(xiàn)，結果顯示，患者疾病治療的有效率為67.0%。以C-kit檢驗結果為依據(jù)，給予Gleevec靶向治療，可起到一定的療效。

綜上所述，乳腺癌患者C-kit的陽性表達率，與之腫瘤分期、腫瘤直徑及淋巴結轉移情況顯著相關。臨床可采用C-kit檢驗的方法，對患者的病情加以評估，以為疾病治療方案的制定提供參考，使疾病治療的有效率得以提升，使乳腺癌患者的壽命得以延長。

[參考文獻]

[1] 李偉，姜永冬，龐達.FGFR3基因單核苷酸多態(tài)與絕經(jīng)前乳腺癌易感性的關聯(lián)研究[J].實用腫瘤學雜志，2017，31（5）：417-424.

[2] 劉桂紅.核轉錄因子7類似物2基因rs7903146多態(tài)性與漢族女性乳腺癌的關系研究[J].中國全科醫(yī)學，2016，19（33）：4051-4055.

[3] Ruhollah Dorostkar. Immunotherapeutic efficacy of a Lactobacillus casei lysate as an adjuvant combined with a heated-4T1 mammary carcinoma cell lysate in a murine model of breast cancer[J]. Asian Biomedicine，2016，10（4）.

[4] 宋魏，于慶凱.三陰乳腺癌組織中Ki67、KAI-1、c-kit的表達及臨床病理意義[J].中國衛(wèi)生標準管理，2016，7（7）：182-183.

[5] 李文姍，梁玉梅.C-KIT、EGFR及IGF-1R在胸腺瘤及其他腫瘤中的研究進展[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2016，24（7）：1154-1157.

[6] 袁禮.三陰乳腺癌與非三陰乳腺癌臨床病理特征差異及與雌激素受體β和表皮生長因子受體表達的關系[J].協(xié)和醫(yī)學雜志，2015，6（1）：1-8.

[7] 王佩倍，龐俊霞，賴宜生.c-Kit激酶抑制劑的研究與開發(fā)[J]. 藥學進展，2014，38（7）：497-506.

[8] 江昊，王甜甜，周濤.PIK3CA和C-KIT基因突變與伴腋窩淋巴結轉移乳腺癌臨床病理特征及預后的關系[J].臨床腫瘤學雜志，2014，19（2）：112-116.

[9] 徐雪瑤.三陰乳腺癌組織VEGF、KAI-1、c-kit表達及臨床病理意義[D].烏魯木齊：新疆醫(yī)科大學，2011.

（收稿日期：2017-10-09）