KCNE1基因rs1805127多態(tài)性與心房顫動(dòng)的關(guān)聯(lián)性

陸滔滔，王琪瑤，談 穎，胡 喆，尹 敏,何 炬，全智華，唐惠芳

目前普遍認(rèn)為多種機(jī)制與危險(xiǎn)因素之間相互作用是房顫的發(fā)生基礎(chǔ)，同時(shí)基因遺傳因素在房顫發(fā)病機(jī)制中的作用已得到了許多研究的證實(shí)。已經(jīng)有許多與房顫存在相關(guān)性的單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)被定位了出來，rs1805127就是其中一個(gè)重要的多態(tài)位點(diǎn)。rs1805127位于21號(hào)染色體長臂2區(qū)2帶上，它參與了心肌緩慢激活鉀通道β亞單位的編碼。該研究旨在探討rs1805127多態(tài)性與房顫之間的關(guān)聯(lián)性。

1 材料與方法

1.1臨床資料選取2012年6～12月在南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科住院的98例持續(xù)性房顫患者作為房顫組，男55例，女43例；年齡45～79(64.48±11.44)歲，均符合《內(nèi)科學(xué)》第八版中持續(xù)性房顫的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重肝腎疾病、心功能Ⅳ級(jí)、心臟瓣膜病、心肌病、先天性心臟病、肺源性心臟病、甲狀腺功能亢進(jìn)癥、起搏器術(shù)后或30 d內(nèi)心臟手術(shù)后患者。選取102例同期住院的竇性心律患者作為對(duì)照組，男57例，女45例；年齡41～76(62.93±10.68)歲。兩組間性別、年齡不具有可比性。

1.2rs1805127基因型、等位基因檢測(cè)使用美國Omega公司血樣DNA提取試劑盒(D3471)對(duì)患者的血液基因組DNA進(jìn)行提取。在NCBI及Ensembl基因數(shù)據(jù)庫查詢KCNE1的全基因組序列，找出rs1805127位點(diǎn)所在的基因片段位置。

引物由華大基因公司合成，上游引物為：AGGAGACAGTTCAGCAGG，下游引物為：TTCAACGACATAGCACGAC，使用PCR儀對(duì)目標(biāo)片段進(jìn)行擴(kuò)增?？偡磻?yīng)體積為25 μl，反應(yīng)體系包括：PCR預(yù)混試劑2.5 μl，25 mmol/L 氯化鎂0.5 μl，dNTP 2 μl，上游引物、下游引物各1 μl，DNA 模板2 μl，Taq DNA Polymerase 0.5 μl，加去離子水至25 μl，反應(yīng)條件為：94 ℃預(yù)變性4 min，94 ℃變性30 s；56 ℃復(fù)性30 s；72 ℃延伸30 s；上述步驟一共35個(gè)循環(huán)；最后在72 ℃延伸5 min；產(chǎn)物放置在4 ℃低溫保存。酶切產(chǎn)物采用凝膠電泳檢測(cè)，在檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)目的條帶后，將產(chǎn)物進(jìn)行低溫保存。純化后使用測(cè)序儀對(duì)其進(jìn)行直接測(cè)序，測(cè)序結(jié)果使用lasergene軟件進(jìn)行分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，Logistic回歸分析基因多態(tài)性對(duì)房顫的影響程度。

2 結(jié)果

2.1KCNE1基因rs1805127基因型頻率分布房顫組和對(duì)照組中AA、AG、GG基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2.2KCNE1基因rs1805127等位基因頻率分布兩組中等位基因頻率均以G為主，且房顫組的G等位基因頻率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 KCNE1基因rs1805127基因型分布

2.3KCNE1基因rs1805127多態(tài)性與房顫Logistic回歸分析將房顫作為因變量(0為無房顫，1為房顫)，將性別、年齡、吸煙史、飲酒史、高血壓病、冠心病、左房內(nèi)徑、KCNE1基因rs1805127基因型作為自變量(基因型AA、AG、GG分別賦值為1、2、 3，且對(duì)其進(jìn)行啞變量處理)，進(jìn)行多因素非條件Logistic回歸分析，結(jié)果顯示：基因型AAOR值為0.05，95%CI為0.01～0.20。這提示當(dāng)以房顫作為因變量時(shí)，基因型AA為有意義的自變量，它是房顫的保護(hù)性因子。見表3。

3 討論

從全球范圍來看，房顫的流行病學(xué)現(xiàn)狀均不容樂觀——2010年全世界的房顫患者達(dá)到了3 350萬，同時(shí)約1/4的歐洲及美國中年人有發(fā)展成為房顫的可能[1]。一項(xiàng)針對(duì)中國14個(gè)自然人群的整體抽樣調(diào)查研究[2]顯示我國房顫的總體發(fā)病率為0.77%。房顫患者因?yàn)樾姆渴チ苏５挠行湛s，因而容易并發(fā)各類循環(huán)栓塞事件，而缺血性腦卒中是其最嚴(yán)重的并發(fā)癥。非瓣膜性房顫發(fā)生缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)是健康人群的5倍，瓣膜性房顫則更是高達(dá)17倍[3]。然而，目前對(duì)于房顫的預(yù)防和治療效果均欠佳，房顫的心室率及節(jié)律控制仍然是臨床上困擾醫(yī)師的棘手問題，因?yàn)榉款澋陌l(fā)病機(jī)制還沒有完全闡述清楚。

心肌細(xì)胞上存在著許多縫隙連接和離子通道，編碼這些縫隙連接和離子通道的基因如果發(fā)生突變將會(huì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞的電生理活動(dòng)發(fā)生紊亂，嚴(yán)重的電生理活動(dòng)紊亂則有可能觸發(fā)心律失常。在這其中就有許多被發(fā)現(xiàn)與房顫的發(fā)生相關(guān)，如KCNQ1基因S140G[4]、KCNE1基因G38S[5]等位點(diǎn)的多態(tài)性。Lundquist et al[6]研究發(fā)現(xiàn)人類基因組中KCNE家族有KCNE1、KCNE2、KCNE3、KCNE4、KCNE5五個(gè)成員，其中KCNE1在心肌中表達(dá)最為豐富。KCNE1基因編碼心肌緩慢激活鉀通道(IKs)的β亞單位，參與了心肌細(xì)胞的復(fù)極化過程[7]。KCNE1基因G38S發(fā)生突變會(huì)增加房顫的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)這一結(jié)論已經(jīng)得到了證實(shí)[8]。KCNE1基因突變除了可以觸發(fā)房顫外，還會(huì)導(dǎo)致長QT綜合征[9]。單核甘酸多態(tài)性是研究基因遺傳因素和疾病發(fā)病之間相關(guān)性的一種遺傳標(biāo)記方法。當(dāng)一個(gè)基因位點(diǎn)在群體中存在兩種以上等位基因，并且最低基因頻率不低于1%，即認(rèn)為該位點(diǎn)具有單核甘酸多態(tài)性[10]。rs1805127位點(diǎn)的位置被定位在KCNE1基因的第3外顯子，它與房顫發(fā)生的關(guān)聯(lián)性目前尚不明確。

本研究結(jié)果顯示，房顫組和對(duì)照組的rs1805127基因型分布沒有顯著差異，但是將可能的混雜因素平衡后進(jìn)行Logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)AA基因型為房顫的保護(hù)性因子。本研究還顯示，房顫組G等位基因分布頻率明顯高于對(duì)照組，表明G等位基因可能會(huì)增加房顫的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。這與Ehrlich et al[8]、Li et al[11]的研究結(jié)果相同，他們通過各自的研究也都發(fā)現(xiàn)G等位基因是房顫的遺傳易感因素，并且Li et al[12]選取來自6項(xiàng)研究中的856名病例和1015名對(duì)照的資料進(jìn)行Meta分析也驗(yàn)證了這一結(jié)論。值得一提的是，苗海軍 等[13]在新疆維吾爾族人群中發(fā)現(xiàn)房顫組G等位基因分布頻率明顯高于竇律組，但在漢族人群中卻未發(fā)現(xiàn)這一差異；此外，Zeng et al[14]選取了北京地區(qū)漢族人群進(jìn)行病例對(duì)照研究，他們?nèi)虢M了142例房顫住院患者、118例竇律住院患者、120例竇律社區(qū)受試者，結(jié)果顯示rs1805127基因多態(tài)性與房顫的發(fā)生之間無關(guān)聯(lián)性。這說明不同地區(qū)、不同種族間該位點(diǎn)多態(tài)性與房顫的相關(guān)性存在一定的差異，人群種族可能是其影響因素。G等位基因引發(fā)房顫的機(jī)制主要包括兩點(diǎn)：一是降低心肌細(xì)胞復(fù)極化過程中的電交替頻率，二是影響早期后除極過程[15]。

綜上所述，本研究顯示KCNE1基因rs1805127位點(diǎn)的G等位基因是房顫的遺傳易感因素，AA基因型者發(fā)生房顫的危險(xiǎn)度降低。由于本研究為地區(qū)內(nèi)單一種族的小樣本臨床研究，且為回顧性研究，因此上述結(jié)論還有待大規(guī)模臨床試驗(yàn)、前瞻性研究及生物信息學(xué)進(jìn)行深入探討。

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