卡介菌多糖核酸對(duì)尋常型白癜風(fēng)患者外周血Treg細(xì)胞的影響

郭利平 牛瑞兵 東曉仙 郭雋

摘要：目的 ?探討卡介菌多糖核酸BCG-PSN聯(lián)合308 nm準(zhǔn)分子光對(duì)尋常型白癜風(fēng)患者外周血Treg細(xì)胞的影響。方法 ?選取2013年9月～2017年5月我院收治的尋常型白癜風(fēng)患者120例設(shè)為治療組，采用隨機(jī)數(shù)字表法分成Ⅰ組和Ⅱ組，各60例。Ⅰ組采用308 nm準(zhǔn)分子光單獨(dú)治療，Ⅱ組聯(lián)合卡介菌多糖核酸肌注。另選取同期我院健康體檢者30例作為對(duì)照組，比較治療組與對(duì)照組外周血Treg細(xì)胞比值、治療組不同分期外周血Treg細(xì)胞比值、各組治療前后外周血Treg細(xì)胞比值以及Ⅰ組和Ⅱ組治療總有效率。結(jié)果 ?治療組外周血Treg細(xì)胞比值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;進(jìn)展期外周血Treg細(xì)胞比值低于穩(wěn)定期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與對(duì)照組比較，Treg細(xì)胞比值均降低，且進(jìn)展期下降更明顯;治療后Ⅰ組、Ⅱ組Treg細(xì)胞比值均較治療前升高，且Ⅱ組升高更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;治療后Ⅰ組Treg細(xì)胞比值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;Ⅱ組治療總有效率高于Ⅰ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 ?BCG-PSN可以通過(guò)增加Treg細(xì)胞水平提高患者細(xì)胞免疫功能，臨床療效確切，安全性高，不良反應(yīng)少，值得臨床應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：尋常型白癜風(fēng);卡介菌多糖核酸;Treg細(xì)胞

中圖分類號(hào)：R758.41 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.20.022

文章編號(hào)：1006-1959（2019）20-0082-03

Effect of BCG-polysaccharide Nucleic Acid on Peripheral Blood Treg Cells

in Patients with Vitiligo Vulgaris

GUO Li-ping，NIU Rui-bing，DONG Xiao-xian，GUO Jun

Abstract：Objective ?To investigate the effect of BCG-PSN combined with 308 nm excimer light on peripheral blood Treg cells in patients with vitiligo vulgaris.Methods ?120 patients with vitiligo vulgaris admitted to our hospital from September 2013 to May 2017 were enrolled in the treatment group. They were divided into group I and group II by random number table， 60 cases each. Group I was treated with 308 nm excimer light alone， and group II was combined with BCG polysaccharide nucleic acid. In addition， 30 healthy subjects in our hospital were selected as the control group. The ratio of peripheral blood Treg cells in the treatment group and the control group， the ratio of Treg cells in the peripheral blood of the different treatment groups， the ratio of Treg cells in the peripheral blood of each group before and after treatment， and the groups I and II. The total effective rate of treatment in the group.Results ?The ratio of Treg cells in the peripheral blood of the treatment group was lower than that of the control group ， the difference was statistically significant（P<0.05）. The ratio of Treg cells in the peripheral blood was lower than that in the stable phase， the difference was statistically significant（P<0.05）. Compared with the control group， the ratio of Treg cells decreased， and the progression decreased. Obviously， the ratio of Treg cells in group I and group II increased after treatment， and the increase in group II was more significant ， the difference was statistically significant（P<0.05）. The ratio of Treg cells in group I after treatment was compared with the control group， the difference was statistically significant（P<0.05）. The total effective rate of group II was higher than that of group I ， the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion ?BCG-PSN can improve the cellular immune function of patients by increasing the level of Treg cells. The clinical efficacy is clear， the safety is high， and the adverse reactions are few， which is worthy of clinical application.

Key words：Vitiligo vulgaris;BCG polysaccharide nucleic acid;Treg cells

白癜風(fēng)（vitiligo，Vt）是一種常見(jiàn)的獲得性色素脫失癥，治療難度較高，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，近年來(lái)，隨著免疫學(xué)的發(fā)展和實(shí)驗(yàn)技術(shù)水平的不斷提高，對(duì)白癜風(fēng)尤其是尋常型白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制的研究逐漸深入。Treg細(xì)胞參與白癜風(fēng)的自身免疫機(jī)制的探索是近年來(lái)臨床研究的熱點(diǎn)之一[1-3]?？ń榫嗵呛怂幔˙CG-PSN）是一種具有多種調(diào)節(jié)免疫功效的物質(zhì)，其作用機(jī)制主要是誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖活化，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的活性等[4]，本研究采用BCG-PSN聯(lián)合308 nm準(zhǔn)分子激光治療白癜風(fēng)，測(cè)定治療前后Treg細(xì)胞等因子的變化，進(jìn)一步觀察BCG-PSN對(duì)白癜風(fēng)的自身免疫功能的調(diào)節(jié)作用及治療效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 ?選取2013年9月～2017年5月鄂爾多斯市中心醫(yī)院收治的尋常型白癜風(fēng)患者120例設(shè)為治療組，其中女66例，男54例;病程：15 d～30年;年齡5～64歲;臨床分型：局限性38例，散發(fā)性26例，泛發(fā)性25例，肢端性31例;皮損分布于頭皮、面、耳后、前胸、腰、背、腿、手足等部位。臨床分期：進(jìn)展期71例，穩(wěn)定期49例。采用隨機(jī)數(shù)字表法分為308 nm準(zhǔn)分子光組（Ⅰ組）和聯(lián)合治療組（Ⅱ組），各60例。Ⅰ組男性27例，女性33例;年齡5～60歲，平均年齡（29.01±0.50）歲。Ⅱ組男性27例，女性33例;年齡6～64歲，平均年齡（29.02±0.31）歲。另外選取健康體檢者30例作為對(duì)照組，男性15例，女性15例;年齡5～60歲，平均年齡（30.01±0.20）歲。各組年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn) ?診斷為尋常型白癜風(fēng)的患者且愿意配合治療及化驗(yàn)者。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn) ?①患有免疫系統(tǒng)疾病、嚴(yán)重心肝腎功能障礙、器官衰竭、惡性腫瘤;②近1個(gè)月內(nèi)接受過(guò)紫外線、皮質(zhì)類固醇激素、免疫抑制劑、光感藥物等治療者。

1.3試劑及儀器 ?熒光標(biāo)記單克隆抗體CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE及同型對(duì)照小鼠IgGl-FITC、IgGl-APC、IgGl-PE、破膜固定液、淋巴細(xì)胞分離液及熒光標(biāo)準(zhǔn)微球均購(gòu)自美國(guó)BD公司。流式細(xì)胞儀FACSCalibur為美國(guó)BD公司所生產(chǎn)。

1.4標(biāo)本采集和檢測(cè) ?所有對(duì)象于清晨空腹抽取肘靜脈血2 ml，用枸櫞酸鈉抗凝劑抗凝，2 h內(nèi)送檢。采用Ficoll密度梯度離心法分離單一核細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為10×l06/ml，檢測(cè)時(shí)每個(gè)標(biāo)本取兩管，一管為同型對(duì)照，一管做檢測(cè)。向這兩管中分別加入100 μl細(xì)胞懸液，然后檢測(cè)管加CD4-FITC及CD25-APC各10 μl熒光標(biāo)記單抗，同型對(duì)照管加小鼠IgGl-FITC及IgGl-APC各10 μl，混勻后室溫避光孵育15 min;PBS洗滌后，固定破膜，然后同型對(duì)照管加IgGl-PE、檢測(cè)管加Foxp3-PE抗體各 ? 10 μl，混勻后室溫避光孵育15 min。PBS洗滌后，重懸細(xì)胞，立即上流式細(xì)胞儀進(jìn)行測(cè)定。對(duì)淋巴細(xì)胞群設(shè)門(mén)，每次獲取設(shè)門(mén)內(nèi)10000個(gè)細(xì)胞，并用CellQuest軟件分析數(shù)據(jù)。Treg細(xì)胞以CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞/CD4+T細(xì)胞比值表示。

1.5治療方法 ?治療組于初次就診時(shí)檢測(cè)Treg細(xì) 胞比值，Ⅰ組給予308 nm準(zhǔn)分子光局部治療， 2次/周。Ⅱ組在Ⅰ組基礎(chǔ)上給予卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）（湖南斯奇生物制藥有限公司，批號(hào)：S20020019）肌肉注射，0.35 mg/次，隔日1次，均連續(xù)治療3個(gè)月，每2周復(fù)查1次，記錄觀察皮損變化和不良反應(yīng)。治療結(jié)束后再次檢測(cè)Treg細(xì)胞比值，對(duì)照組體檢時(shí)行Treg細(xì)胞的檢測(cè)。

1.6療效判定標(biāo)準(zhǔn) ?①痊愈：白斑全部消退;②顯效：白斑消退面積≥50%;③有效：白斑部分消退，消退面積10%～50%;④無(wú)效：白斑消退面積<10%。總有效率=（痊愈+顯效）/總例數(shù)×100.00%[4]。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 ?采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，組間比較采用？字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1治療組與對(duì)照組外周血Treg細(xì)胞比值比較 ?治療組外周血Treg細(xì)胞比值低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2治療組不同分期外周血Treg細(xì)胞比值比較 ?進(jìn)展期外周血Treg細(xì)胞比值低于穩(wěn)定期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與正常對(duì)照組比較，Treg細(xì)胞比值均降低，且進(jìn)展期下降更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3各組治療前后外周血Treg細(xì)胞比值比較 ?治療后Ⅰ組、Ⅱ組Treg細(xì)胞比值均較治療前升高，且Ⅱ組升高更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;治療后Ⅰ組Treg細(xì)胞比值與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），治療后Ⅱ組與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表3。

2.4Ⅰ組和Ⅱ組治療總有效率比較 Ⅱ組總有效率高于Ⅰ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表4。

3討論

白癜風(fēng)是世界公認(rèn)的三大皮膚頑癥之一，困擾全世界5000萬(wàn)以上的患者。由于病因不明，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚無(wú)十分有效的根治方案。根據(jù)白斑分布特點(diǎn)不同可將白癜風(fēng)分為節(jié)段型和尋常型，節(jié)段型白癜風(fēng)的白斑常沿單側(cè)皮神經(jīng)節(jié)段支配的皮膚區(qū)域分布，其發(fā)病率較低，約占10%;尋常型白癜風(fēng)根據(jù)白斑分布部位及面積不同又可再分為局限性、散發(fā)性、泛發(fā)性和肢端性[5]。目前認(rèn)為節(jié)段型白癜風(fēng)和尋常型的發(fā)病機(jī)制并不相同，節(jié)段型白癜風(fēng)的發(fā)生主要與神經(jīng)因素相關(guān)，而尋常型的發(fā)病機(jī)制尚未明確，但多項(xiàng)證據(jù)支持自身免疫因素參與該型的發(fā)病[6]。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells，Treg）是一類具有負(fù)調(diào)節(jié)作用的T細(xì)胞亞群，包括在胸腺內(nèi)分化成熟后直接遷移到外周的自然調(diào)節(jié)T細(xì)胞（nTreg）和外周初始T細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）等細(xì)胞因子誘導(dǎo)分化的適應(yīng)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞（iTreg）。Treg的表型為CD4+CD25+Foxp3+。Treg細(xì)胞可以抑制CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的活化與增殖，達(dá)到負(fù)調(diào)節(jié)作用，同時(shí)Treg還可以分泌具有抑制作用的細(xì)胞因子TGF-β、IL-10等，抑制多種免疫細(xì)胞達(dá)到免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用[7]。Treg及其分泌的細(xì)胞因子的減少，可增加自身反應(yīng)性T細(xì)胞的應(yīng)答。白癜風(fēng)患者的血清TGF-β水平比健康組有明顯下降，TGF-β水平的下降導(dǎo)致Treg細(xì)胞成熟減少，從而抑制炎癥的作用受損，有利于白癜風(fēng)的發(fā)生，TGF-β水平的下降可能是CD8+T細(xì)胞反應(yīng)引起的[8]。本研究結(jié)果顯示，進(jìn)展期的尋常型白癜風(fēng)患者體內(nèi)Treg細(xì)胞比值低于對(duì)照者（P<0.01），與多數(shù)研究[9，10]結(jié)果相似。另有研究顯示[11]，患者體內(nèi)Treg細(xì)胞比值高于正常人，這可能與研究對(duì)象、實(shí)驗(yàn)方法及淋巴細(xì)胞的時(shí)間生物學(xué)效應(yīng)不同有關(guān)。另外，處于不同病程、分期、分型、皮損部位的患者T淋巴細(xì)胞變化亦不同。

BCG-PSN是新一代卡介菌提取物，由多糖及核酸等多種免疫活性物質(zhì)制成，其主要作用機(jī)制是通過(guò)增強(qiáng)多種免疫細(xì)胞的免疫功能及其合成分泌的免疫分子發(fā)揮雙向調(diào)節(jié)作用[12]。通過(guò)激活并增強(qiáng)單核-巨噬細(xì)胞功能、穩(wěn)定肥大細(xì)胞減少其釋放的活性物質(zhì)、增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞（NK）的活性、刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、提高血清C3含量等，從而增強(qiáng)體內(nèi)的細(xì)胞免疫、調(diào)節(jié)體液免疫、增強(qiáng)機(jī)體抗病能力[4]。本研究中發(fā)現(xiàn)，在308 nm準(zhǔn)分子激光治療的基礎(chǔ)上加用卡介菌多糖核酸肌注可以收到良好的效果，總有效率明顯提高（？字2=3.34，P<0.05）。與單獨(dú)308 nm準(zhǔn)分子激光照射組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示卡介菌多糖核酸治療尋常型白癜風(fēng)可以通過(guò)上調(diào)Treg細(xì)胞水平，使其恢復(fù)免疫的負(fù)調(diào)節(jié)作用，從而使體內(nèi)的細(xì)胞免疫達(dá)到新的平衡狀態(tài)，恢復(fù)免疫調(diào)節(jié)功能，最終使黑色素細(xì)胞免于T淋巴細(xì)胞的攻擊。

綜上所述，尋常型白癜風(fēng)與自身免疫，尤其是細(xì)胞免疫功能紊亂密切相關(guān)，而B(niǎo)CG-PSN可以通過(guò)增加Treg細(xì)胞水平提高患者細(xì)胞免疫功能，臨床療效確切，安全性高，不良反應(yīng)少，值得在臨床 應(yīng)用。

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收稿日期：2019-7-31;修回日期：2019-8-10

編輯/宋偉