腎型谷氨酰胺酶在小兒鼻咽癌中表達(dá)的臨床意義

劉志建

【摘要】 目的 探討腎型谷氨酰胺酶（GLS1）在小兒鼻咽癌中的臨床意義。方法 66例原發(fā)性鼻咽癌患兒， 采用免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織中GLS1的表達(dá)， 分析其表達(dá)情況與小兒鼻咽癌患兒的各臨床病理特征之間的關(guān)系及預(yù)后。結(jié)果 GLS1表達(dá)與鼻咽癌的TNM分期密切相關(guān)（χ2=7.547， P<0.05）；GLS1高表達(dá)組患兒的總體生存率和無(wú)病生存率均明顯低于GLS1低表達(dá)患兒（P<0.05）。結(jié)論 GLS1的高表達(dá)在小兒鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用， 且與患兒的預(yù)后密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 腎型谷氨酰胺酶；鼻咽癌；預(yù)后；小兒

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.08.020

腫瘤細(xì)胞代謝具有特異性， 表現(xiàn)為對(duì)谷氨酰胺的明顯依賴， 即“噬谷氨酰胺性”。谷氨酰胺酶（GA）是谷氨酰胺代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶， 在調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝中起著關(guān)鍵作用[1]。在人體內(nèi)存在兩種GA， 即GLS1和谷氨酰胺酶2型（GLS2）。GLS1在各組織器官普遍存在， 而GLS2僅在肝臟中表達(dá)；并且GLS1已經(jīng)被證實(shí)在多種惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)[2]。因此， GLS1很有可能是多種腫瘤相關(guān)的共同蛋白。本文主要探討GLS1與鼻咽癌患兒的臨床病理特征和預(yù)后之間的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集本院耳鼻咽喉科2014年5月～2017年8月收治的66例原發(fā)性鼻咽癌患兒， 行鼻咽癌切除且經(jīng)術(shù)后病理診斷為原發(fā)性小兒鼻咽癌的標(biāo)本70例（失訪4例）。年齡5～15歲， 平均年齡（8.5±3.2）歲。所有患兒手術(shù)前均未接受放、化療等抗腫瘤治療。病理學(xué)分級(jí)根據(jù)Edmondson方法， TNM臨床分期按照2010年國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）制定標(biāo)準(zhǔn)。

1. 2 主要試劑 谷氨酰胺酶抑制劑968（美國(guó)Sigma公司）、兔單克隆抗體GLS1（美國(guó)Epitomics公司）、通用型免疫組化試劑盒（中國(guó)中杉金橋公司）、DAB顯色試劑盒（中國(guó)中杉金橋公司）。

1. 3 免疫組織化學(xué)檢測(cè) GLS1檢測(cè)采用免疫組織化學(xué)SP兩步法， 二甲苯、酒精梯度脫臘， 高溫高壓熱修復(fù)抗原。3%過(guò)氧化氫滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶， 加入一抗兔單克隆抗體， 4℃過(guò)夜。通用型二抗37 ℃孵育30 min， 然后DBA和蘇木精染色。

1. 4 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果評(píng)價(jià) 組織切片由病理科醫(yī)生盲法閱片。其評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)基于染色的強(qiáng)度和比例。染色強(qiáng)度評(píng)分如下：0分（陰性）， 1分（弱）， 2分（中）， 3分（強(qiáng)）；染色比例評(píng)分如下：1分（≤5%）， 2分（5%～50%）， 3分（≥50%）。綜合評(píng)分為強(qiáng)度和比例分?jǐn)?shù)的乘積。<5分為低表達(dá)， >5分為高表達(dá)。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。生存分析采用Kaplan-Meier曲線， 生存預(yù)后影響因素采用單因素COX和多因素COX回歸模型進(jìn)行分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 GLS1在鼻咽癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

GLS1在鼻咽癌中的表達(dá)見圖1。GLS1表達(dá)與TNM分期具有相關(guān)性（χ2=7.273， P<0.01）， 與性別、年齡、甲胎蛋白等其他指標(biāo)無(wú)關(guān)。

2. 2 GLS1表達(dá)與鼻咽癌患兒預(yù)后的關(guān)系 總體生存率Kaplan-Meier曲線顯示兩組患兒的總體生存率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（log-rank 檢驗(yàn)χ2=12.646， P<0.05）， GLS1高表達(dá)總體生存率低于GLS1低表達(dá)患兒；無(wú)病生存率Kaplan-Meier曲線顯示兩組患兒的無(wú)病生存率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（log-rank 檢驗(yàn)χ2=11.2， P<0.01）， GLS1高表達(dá)患兒無(wú)病生存率低于GLS1低表達(dá)患兒（P<0.05）。

2. 3 Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析 對(duì)GLS1及相關(guān)臨床病理特征進(jìn)行單因素分析顯示腫瘤分化、TNM分期和GLS1表達(dá)是影響鼻咽癌患兒總體生存率的危險(xiǎn)因素；將三者納入多因素回歸模型， 結(jié)果顯示腫瘤分化、TNM分期和GLS1表達(dá)是影響患兒總體生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

3 討論

鼻咽癌是世界上常見的惡性腫瘤之一， 尤其多見于我國(guó)南方地區(qū)， 目前， 每10萬(wàn)人中發(fā)病人口可高達(dá)50例。近20年來(lái)， 鼻咽癌的發(fā)病率及死亡率正逐年上升， 有關(guān)流行病學(xué)調(diào)查顯示， 僅在2008年全球新發(fā)病例已達(dá)至8萬(wàn)余例， 死亡率達(dá)61.1%。盡管近年診斷及治療手段發(fā)展迅速， 鼻咽癌術(shù)后5年生存率仍然較低。由于鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多因素參與的復(fù)雜過(guò)程， 因此影響其上述過(guò)程和預(yù)后的因素尚未完全明確。研究發(fā)現(xiàn)， 代謝在腫瘤的增殖、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移等過(guò)程起到舉足輕重的作用[3]。腫瘤代謝表現(xiàn)為對(duì)谷氨酰胺的明顯依賴， 由于對(duì)谷氨酰胺的大量消耗， 有學(xué)者將其稱之為“氮陷阱”[4]。而GLS1是其代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶， 本文即研究了GLS1對(duì)小兒鼻咽癌患兒的預(yù)后。

GLS1已經(jīng)被證明在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)， 例如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、鼻咽癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等[5]。GLS1在多種腫瘤中上調(diào)， 因此其可能是一種致癌基因的蛋白產(chǎn)物。有學(xué)者[3]發(fā)現(xiàn)GLS1在正常肝組織、肝不典型增生結(jié)節(jié)、鼻咽癌中GLS1表達(dá)水平逐步上升， 認(rèn)為GLS1的表達(dá)水平上調(diào)有可能是鼻咽癌進(jìn)展的原因之一。

本研究GLS1表達(dá)與鼻咽癌臨床病理特征的相關(guān)性及患兒預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示GLS1表達(dá)與鼻咽癌的TNM 分期密切相關(guān)；總體生存率和無(wú)病生存率的預(yù)后分析結(jié)果顯示GLS1高表達(dá)患兒預(yù)后明顯差于低表達(dá)患兒（P<0.05）。COX回歸單因素和多因素模型結(jié)果顯示腫瘤分化、TNM分期和GLS1表達(dá)是影響小兒鼻咽癌患兒總體生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

GLS1高表達(dá)與在小兒鼻咽癌的發(fā)展過(guò)程中起到重要作用。其影響患兒預(yù)后的原因可能與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的遷移、增殖、凋亡等生物學(xué)行為有關(guān)[6]；但其表達(dá)上調(diào)的原因以及具體的調(diào)節(jié)機(jī)制仍待明確， 進(jìn)一步探索其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制將對(duì)腫瘤的研究起到一定的推動(dòng)作用， 為抗腫瘤治療和臨床轉(zhuǎn)化提供理論依據(jù)[7-10]。

總之， GLS1的高表達(dá)在小兒鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用， 且與患兒的預(yù)后密切相關(guān)。

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[收稿日期：2017-11-24]