桑葉對(duì)絨山羊血脂及脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

劉功煒，侯海瑞，王堯悅，賈亞洲，陳玉林，楊雨鑫(西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

桑屬于?？粕俾淙~喬木，在我國(guó)的種植面積約100萬(wàn)hm2[1]。目前桑葉主要用于養(yǎng)蠶業(yè)，利用率只能達(dá)到50%左右，存在嚴(yán)重的資源浪費(fèi)問題。對(duì)桑葉的營(yíng)養(yǎng)成分和降解特性進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，其中動(dòng)物必需氨基酸含量高達(dá)43%[2]，且蛋白含量高、纖維含量低、干物質(zhì)可降解率高、可利用能值高[3]。與苜蓿粉相比，桑葉粗蛋白含量高11%，粗纖維含量低50%，總能值相當(dāng)[2]。同時(shí)，適口性好、可消化率高等[4]也是桑葉飼料的一大特點(diǎn)。因此，桑葉作為飼料資源具有很大的利用空間。

在動(dòng)物飼料中的應(yīng)用表明，飼喂桑葉能有效提高日增重、產(chǎn)蛋、產(chǎn)肉等生長(zhǎng)和生產(chǎn)性能[1,5-6]。近年來(lái)，隨著對(duì)桑葉功能性有效成分研究的深入，發(fā)現(xiàn)桑葉中富含的多羥基生物堿、多糖、黃酮類等生物活性物質(zhì)具有降血脂、降膽固醇作用，能顯著降低動(dòng)物肝臟中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量，控制脂肪細(xì)胞中甘油三酯分解為游離脂肪酸，并對(duì)機(jī)體脂肪代謝相關(guān)基因的表達(dá)有一定調(diào)控作用[7-9]。脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)是一種蛋白水解酶，在脂肪組織和肌肉組織中高度表達(dá)，并且能夠以脂肪酸的形式為其他組織提供能量，對(duì)脂肪代謝過程有重要的調(diào)控作用[10]。脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)是脂肪酸合成過程中的關(guān)鍵多功能聚合酶，對(duì)平衡機(jī)體脂肪生成和分解代謝有重要作用[11]。瘦素(Leptin)是肥胖基因(Obese,OB)的表達(dá)產(chǎn)物，主要由白色脂肪組織合成分泌，能夠增加能量消耗，減少脂肪沉積，在調(diào)節(jié)機(jī)體脂肪代謝方面有重要作用[12]。

目前對(duì)桑葉作為飼料資源的研究多局限于日糧中添加桑葉對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)、生產(chǎn)性能的影響，而關(guān)于桑葉對(duì)動(dòng)物脂肪沉積規(guī)律以及脂肪沉積相關(guān)基因表達(dá)的影響少有報(bào)道。因此，本試驗(yàn)以陜北白絨山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，探討日糧中桑葉不同添加方式和添加量對(duì)絨山羊血脂代謝及脂肪代謝基因LPL、FASN、Leptin表達(dá)量的影響，以期為桑葉在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在陜北延安市子長(zhǎng)縣(地理坐標(biāo)：N36.6，E109.2；海拔1 200 m)順天養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行，根據(jù)桑葉添加方式不同試驗(yàn)組分為干桑葉組(dry mulberry group,DMG)和青貯桑葉組(silage mulberry group,SMG)。鮮桑葉采收時(shí)間為8月初，由陜西省蠶桑絲綢研究所加工，以自然曬干法獲得干桑葉；運(yùn)用塑料袋裝簡(jiǎn)易青貯技術(shù)進(jìn)行桑葉青貯發(fā)酵[13]，發(fā)酵過程持續(xù)60 d。

選用體況良好的8～9月齡(平均體質(zhì)量(28±1.05) kg/只)陜北白絨山羊羯羊共60只，隨機(jī)均分為對(duì)照組和干桑葉組Ⅰ、干桑葉組Ⅱ、青貯桑葉組Ⅰ、青貯桑葉組Ⅱ、青貯桑葉組Ⅲ6組，每組10只。對(duì)照組日糧中不添加桑葉，干桑葉組Ⅰ、Ⅱ日糧中分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%和15%的自然風(fēng)干桑葉，青貯桑葉組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組日糧中分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%，15%和20%的青貯桑葉，每天飼喂2次。日糧配方參照NRC飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(2007)及前期研究成果[14]進(jìn)行配制，日糧營(yíng)養(yǎng)成分組成見表1。飼養(yǎng)試驗(yàn)于2015-11-17-2016-01-27進(jìn)行，持續(xù)70 d(其中預(yù)飼10 d)，期間防疫工作按照羊場(chǎng)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

表1 試驗(yàn)日糧營(yíng)養(yǎng)成分的組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (dry matter basis)

注：每千克5%預(yù)混料含有：VA7 500 IU,VD31 050 IU,VE10 IU,Fe 5 500 mg,Cu 500 mg,Mn 5 000 mg,Zn 4 000 mg,Se 32.5 mg,I 100 mg,Co 32.5 mg。消化能為實(shí)測(cè)值，其他為計(jì)算值。

Notes:Premix contains the following per kg:VA7 500 IU,VD31 050 IU,VE10 IU,Fe 5 500 mg,Cu 500 mg,Mn 5 000 mg,Zn 4 000 mg,Se 32.5 mg,1 100 mg,Co 32.5 mg.The contents of DE were measured values,while the others were calculated values.

1.2 樣品采集

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每組隨機(jī)挑選3只羊進(jìn)行屠宰，宰前禁食、禁水12 h，頸部靜脈采血4 mL/只，迅速以4 000 r/min離心10 min取血清，低溫保存；宰后分別采集腹部皮下脂肪、腎周脂肪、尾部脂肪、肝臟、背最長(zhǎng)肌5個(gè)部位的樣品，迅速放入液氮中，于-80 ℃保存。

1.3 血清生化指標(biāo)測(cè)定

血清生化指標(biāo)測(cè)定由北京華英生物技術(shù)研究所完成。采用全自動(dòng)生化儀(BS-420，深圳邁瑞)測(cè)定血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)濃度；采用半自動(dòng)生化儀(A6，北京松上)測(cè)定血清中脂肪酶(LPS)和LPL活性；采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀(STAT FAX 2100，Awareness Technology Inc.USA)測(cè)定血清中FASN和Leptin質(zhì)量濃度。

1.4 組織脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)水平的檢測(cè)

1.4.1 引物設(shè)計(jì)與合成 根據(jù)GenBank上公布的山羊甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)、肽酰脯氨基順反異構(gòu)酶B(PPIB)、LPL、FASN、Leptin基因序列(GenBank登錄號(hào)分別為XM_005680968.2、XM_005685667.2、NM_001285607.1、XM_013975079.1、XM_005679433.2)，由上海生工生物股份有限公司設(shè)計(jì)合成實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)引物，引物序列及擴(kuò)增片段長(zhǎng)度見表2。

表2 RT-PCR引物序列及擴(kuò)增片段長(zhǎng)度Table 2 Primer sequences designed for RT-PCR and product lengths

1.4.2 組織總RNA的提取及cDNA第一鏈的合成 參照Eastep?Super總RNA提取試劑盒(Promega,上海)說(shuō)明書提取腹部皮下脂肪、腎周脂肪、尾部脂肪、肝臟和背最長(zhǎng)肌組織的總RNA。用核酸定量?jī)x(Micro-Spectrophotometer,K5800,上海DRAWELL科學(xué)儀器有限公司)測(cè)定RNA純度和濃度，以1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性。cDNA第一鏈合成參照Thermo反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Thermo Scientific,USA)說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)在LightCycle?96(Roche，Switzerland)實(shí)時(shí)熒光定量?jī)x上進(jìn)行，反應(yīng)體系為：SYBR Premix Ex TaqTMⅡ(TaKaRa)12.5 μL，上游引物F(10 μmol/L)1 μL，下游引物R(10 μmol/L)1 μL，模板cDNA 2 μL，ddH2O 8.5 μL，總體積25 μL。PCR反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共45個(gè)循環(huán)。熔解曲線分析程序：95 ℃ 60 s，40 ℃ 60 s，65 ℃ 1 s，97 ℃ 1 s。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

各組織中基因相對(duì)表達(dá)量用2-ΔΔCt法計(jì)算，其中腹部皮下脂肪、腎周脂肪、尾部脂肪、肝臟4個(gè)部位組織以GAPDH為內(nèi)參基因，背最長(zhǎng)肌以PPIB為內(nèi)參基因。血清生化指標(biāo)濃度和基因相對(duì)表達(dá)量結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Means±SE)”表示，所得結(jié)果用SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVE)，采用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 桑葉對(duì)絨山羊脂質(zhì)代謝相關(guān)血液生化指標(biāo)的影響

日糧中添加桑葉對(duì)陜北白絨山羊血液生化指標(biāo)的影響結(jié)果如表3所示。

表3 日糧中添加桑葉對(duì)絨山羊血液生化指標(biāo)的影響Table 3 Effects of mulberry on serum biochemical indexes of Cashmere goat

注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，標(biāo)相同小寫字母或未標(biāo)字母表示差異不顯著(P>0.05)。

Notes:In the same column,different small letters mean significant difference (P<0.05),while with same letters or no letter mean insignificant difference (P>0.05).

由表3可知，飼喂桑葉對(duì)絨山羊血清中HDL-C、TC、TG、LPS、LPL影響均不顯著(P>0.05)；青貯桑葉組Ⅱ和干桑葉組Ⅱ的血清LDL-C濃度較對(duì)照組分別顯著降低30%和36.4%(P<0.05)；與對(duì)照組血清Leptin質(zhì)量濃度相比，干桑葉組均顯著降低(P<0.05)，青貯桑葉組無(wú)顯著變化(P>0.05)，但均顯著高于干桑葉組Ⅱ(P<0.05)；干桑葉組Ⅱ和青貯桑葉組Ⅲ血清中FASN質(zhì)量濃度顯著降低(P<0.05)。

2.2 LPL、FASN、Leptin在絨山羊不同組織中的基因表達(dá)量

利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，分別檢測(cè)LPL、FASN、Leptin在絨山羊腹部皮下脂肪、腎周脂肪、尾部脂肪、肝臟中的基因表達(dá)量，結(jié)果如圖1所示。

圖柱上標(biāo)不同小寫字母表示同一基因不同組織差異顯著(P<0.05)Compared with different tissues of same gene,lowercase letters indicate significant difference (P<0.05)圖1 LPL、FASN、Leptin基因在絨山羊不同組織中的表達(dá)量Fig.1 Expression of LPL,FASN and Leptin in different tissues of Cashmere goat

由圖1可知，各組織中LPL基因表達(dá)量由高到低依次為腹部皮下脂肪、尾部脂肪、腎周脂肪、肝臟；肝臟中LPL表達(dá)量顯著低于前3種組織(P<0.05)；各脂肪組織LPL基因表達(dá)量無(wú)顯著差異(P>0.05)。FASN基因在肝臟中表達(dá)量顯著高于其他3個(gè)脂肪組織(P<0.05)；且腹部皮下脂肪中FASN表達(dá)量顯著高于尾部脂肪、腎周脂肪(P<0.05)。肝臟中Leptin基因表達(dá)量顯著低于其他3種脂肪組織(P<0.05)；腹部皮下脂肪Leptin基因表達(dá)量顯著高于尾部脂肪(P<0.05)。LPL、FASN、Leptin在腎周脂肪和尾部分脂肪中的基因表達(dá)量差異均不顯著(P>0.05)。

2.3 桑葉對(duì)絨山羊各組織LPL、FASN、Leptin基因表達(dá)量的影響

飼喂干桑葉和青貯桑葉后絨山羊各組織的LPL、FASN、Leptin基因相對(duì)表達(dá)量分別如圖2,3,4所示。由圖2可知，在肝臟中LPL基因表達(dá)量極低，飼喂桑葉后并未發(fā)生顯著變化(P>0.05)。腹部皮下脂肪中青貯桑葉組Ⅲ的LPL基因相對(duì)表達(dá)量約為對(duì)照組的4.6倍，且差異顯著(P<0.05)。在腎周脂肪中，青貯桑葉組ⅡLPL基因表達(dá)量約為對(duì)照組的2.4倍，差異顯著(P<0.05)。在尾部脂肪中，青貯桑葉組ⅠLPL基因表達(dá)量相比對(duì)照組顯著降低(P<0.05)；干桑葉組Ⅱ和青貯桑葉組Ⅱ均顯著提高LPL基因表達(dá)量(P<0.05)，且干桑葉組Ⅱ中LPL表達(dá)量更高(P<0.05)。在背最長(zhǎng)肌中，青貯桑葉組Ⅱ中LPL表達(dá)量顯著高于對(duì)照組及其他試驗(yàn)組(P<0.05)，其他試驗(yàn)組LPL表達(dá)量較對(duì)照組均有所降低，但差異不顯著(P>0.05)。

圖柱上標(biāo)不同小寫字母表示同一組織不同處理組差異顯著(P<0.05)，未標(biāo)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下圖同Compared with different groups of same tissue,different lowercase letters indicate significant difference (P<0.05),while no letter indicates insignificant difference (P>0.05).The same below圖2 日糧中添加桑葉對(duì)絨山羊不同組織中LPL基因表達(dá)量的影響Fig.2 Effect of supplementation mulberry on LPL expression in different tissues of Cashmere goat

由圖3可知，飼喂干桑葉或青貯桑葉對(duì)FASN在腹部皮下脂肪、腎周脂肪、尾部脂肪、背最長(zhǎng)肌中的表達(dá)量均無(wú)顯著影響(P>0.05)；飼喂干桑葉或青貯桑葉對(duì)肝臟中FASN基因表達(dá)量影響較大，與對(duì)照組相比，干桑葉組Ⅱ和青貯桑葉組Ⅱ中FASN基因表達(dá)量均顯著降低(P<0.05)。

圖3 日糧中添加桑葉對(duì)絨山羊不同組織中FASN基因表達(dá)量的影響Fig.3 Effect of supplementation mulberry on FASN expression in different tissues of Cashmere goat

由圖4可知，在腹部皮下脂肪中，青貯桑葉組ⅢLeptin表達(dá)量顯著高于其他各組(P<0.05)；而干桑葉組Ⅰ和青貯桑葉組Ⅰ較對(duì)照組Leptin表達(dá)量顯著降低(P<0.05)。在腎周脂肪中，青貯桑葉組Ⅱ的Leptin表達(dá)量顯著高于干桑葉組Ⅰ、Ⅱ和青貯桑葉組Ⅰ(P<0.05)；且青貯桑葉組ⅠLeptin表達(dá)量相比對(duì)照組顯著降低(P<0.05)。在尾部脂肪中，干桑葉組Ⅱ、青貯桑葉組ⅢLeptin表達(dá)量分別約為對(duì)照組的2.1和2.4倍，差異顯著(P<0.05)；與對(duì)照組相比，干桑葉組Ⅰ和青貯桑葉組Ⅰ中Leptin表達(dá)量均降低，但差異不顯著(P>0.05)。與LPL基因表達(dá)量變化類似，在肝臟中Leptin基因表達(dá)量極低，飼喂桑葉后并未發(fā)生顯著變化(P>0.05)。在背最長(zhǎng)肌中，青貯桑葉組ⅡLeptin表達(dá)量約為對(duì)照組的2.6倍，差異顯著(P<0.05)；青貯桑葉組Ⅰ、Ⅲ中Leptin表達(dá)量均顯著降低(P<0.05)。

圖4 日糧中添加桑葉對(duì)絨山羊不同組織中Leptin基因表達(dá)量的影響Fig.4 Effect of supplementation mulberry on Leptin expression in different tissues of Cashmere goat

3 討 論

3.1 飼喂桑葉對(duì)絨山羊血脂代謝的影響

TG、TC、LDL-C、HDL-C是反映機(jī)體血脂代謝水平的常用指標(biāo)，對(duì)豬[9]、鼠[15]、雞[16]等動(dòng)物的研究表明，在日糧中添加桑葉提取物降血脂效果明顯，能顯著降低血清TC、TG濃度，并抑制血清LPS活性。Kobayashi等[17]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加桑葉提取物能顯著降低血清中的LDL-C、TC濃度，而對(duì)HDL-C、TG濃度無(wú)明顯影響。Song等[18]研究發(fā)現(xiàn)，給小鼠飼喂桑葉提取物后,高脂肪攝入日糧組血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C濃度均顯著降低。在本試驗(yàn)中，日糧中添加桑葉后，對(duì)絨山羊血清TC、TG、HDL-C、LPS、LPL濃度影響均不顯著，但TC、TG濃度有下降趨勢(shì)。LPL在TG代謝中起關(guān)鍵作用，可促進(jìn)TG水解為游離脂肪酸以供各組織利用[19]。本試驗(yàn)中，日糧中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%干桑葉和15%青貯桑葉可顯著降低絨山羊血清LDL-C濃度。對(duì)桑葉提取物中有效成分的研究表明，桑葉中富含的多糖類、黃酮類、多元酚類等生物活性物質(zhì)均具有良好的降血脂、降血糖功效[8,20]。同時(shí)，桑葉中所含脂類以不飽和脂肪酸為主，其中亞麻酸、亞油酸含量可達(dá)到36%，亞油酸和亞麻酸能促進(jìn)膽固醇分泌排出，從而降低血清膽固醇含量[21]。桑葉中含有單寧、纖維素等抗?fàn)I養(yǎng)因子，可結(jié)合飼料中的生物大分子，形成不易消化的復(fù)合物[4]，從而降低飼料消化率，這也是動(dòng)物飼糧中不能大量添加桑葉的主要原因。本研究中，添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%青貯桑葉組降血脂效果不顯著，可能與桑葉中的抗?fàn)I養(yǎng)因子成分有關(guān)。研究表明，桑葉中生物堿類、黃酮類等活性物質(zhì)積累量具有季節(jié)性變化趨勢(shì)， 9月底至10月初采收的桑葉飼喂效果較好[22]。本試驗(yàn)中，飼喂干桑葉或青貯桑葉均未顯著降低血清TC、TG濃度，可能是由于本次試驗(yàn)所用桑葉采收時(shí)間較早，生物活性成分積累量未達(dá)到最佳狀態(tài)所致。桑葉在青貯發(fā)酵過程中，微生物產(chǎn)生大量的酶類能降解植物纖維素，降低淀粉等高分子對(duì)生物堿、多糖、黃酮類等功能性成分的包裹作用，有利于有效成分的溶出[23]，導(dǎo)致發(fā)酵后桑葉中黃酮類、生物堿類等成分有不同程度的增加[24-25]。但桑葉在曬干過程中黃酮類、生物堿類化合物損失較大[26]，因此，青貯桑葉組相比干桑葉組降血脂效果更好，可能是由于青貯桑葉中黃酮類、生物堿類等有效成分含量更高所致。

3.2 絨山羊不同組織LPL、FASN、Leptin基因表達(dá)量的差異性分析

絨山羊的體脂沉積及血脂代謝受到基因調(diào)控、營(yíng)養(yǎng)水平、年齡等多因素的影響，基因表達(dá)調(diào)控是其中的關(guān)鍵因素。LPL是脂肪細(xì)胞分化的標(biāo)志，在脂肪酸的合成和攝取過程中有重要作用；FASN是脂肪酸從頭合成的關(guān)鍵酶，直接調(diào)控脂肪合成過程；Leptin是肥胖基因的表達(dá)產(chǎn)物，主要由白色脂肪細(xì)胞分泌，以負(fù)反饋方式抑制機(jī)體脂肪沉積。本試驗(yàn)分析了LPL、FASN以及Leptin基因在不同組織中的表達(dá)規(guī)律，3種脂代謝調(diào)控基因在腹部皮下脂肪、尾部脂肪、腎周脂肪、肝臟中均有表達(dá)，但表現(xiàn)出一定的組織特異性。

本研究中，各組織中LPL基因表達(dá)量由高到低依次為腹部皮下脂肪、尾部脂肪、腎周脂肪、肝臟，在肝臟中表達(dá)量顯著低于3種脂肪組織，而脂肪組織間的表達(dá)量并無(wú)顯著差異。這是由于LPL主要由肝外實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成，在脂肪組織中可大量合成[10,27]。FASN表達(dá)量由高到低依次為肝臟、腹部皮下脂肪、尾部脂肪、腎周脂肪；Leptin表達(dá)量由高到低依次為腹部皮下脂肪、腎周脂肪、尾部脂肪、肝臟。肝臟中FASN表達(dá)量很高，但Leptin表達(dá)量極低，這是由于肝臟是脂肪酸合成的主要場(chǎng)所，脂肪酸合成過程中通過Leptin介導(dǎo)的細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子3信號(hào)通路，組織中Leptin分泌減少能夠使FASN表達(dá)量上升，促進(jìn)脂肪酸合成[28]。FASN、Leptin表達(dá)量在腹部皮下脂肪中均較高，前人針對(duì)新疆褐牛脂肪代謝調(diào)控基因的研究也獲得類似結(jié)果[28]，這可能是由于脂肪沉積最先發(fā)生在皮下，腹部皮下也是脂肪沉積量最多的部位[29]，從而發(fā)生Leptin抵抗現(xiàn)象。同時(shí)，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，LPL、FASN、Leptin基因表達(dá)量在腎周脂肪和尾部脂肪中比較接近，說(shuō)明各基因表達(dá)有組織特異性，并且在同類組織中的表達(dá)也存在一致性。

3.3 日糧中添加桑葉對(duì)絨山羊各組織LPL、FASN、Leptin基因表達(dá)量的影響

本研究中，日糧中添加桑葉后，絨山羊各組織中LPL、FASN、Leptin基因表達(dá)量呈現(xiàn)不同的變化規(guī)律，說(shuō)明桑葉可能通過影響LPL、FASN、Leptin的基因表達(dá)量從而調(diào)控機(jī)體的脂質(zhì)代謝過程。日糧中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%青貯桑葉，絨山羊尾部脂肪、腎周脂肪和背最長(zhǎng)肌中LPL基因表達(dá)量均顯著升高。研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)LPL有重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子包括過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)等，PPAR-α能夠激活組織中LPL的表達(dá)[30]。有研究以小鼠為模型，發(fā)現(xiàn)桑葉提取物作用下肝臟和脂肪組織中PPAR-α、PPAR-γ、LPL基因表達(dá)量顯著上升[31]。同時(shí)，本團(tuán)隊(duì)在前期研究中發(fā)現(xiàn)，桑葉飼喂絨山羊后脂肪組織中PPARs基因表達(dá)量有上升趨勢(shì)，因此筆者推測(cè)本研究脂肪組織中LPL基因表達(dá)量上升可能是PPARs表達(dá)增強(qiáng)引起的。

Sun等[7]在供給大鼠的高脂肪日糧中混合桑葉后，檢測(cè)到肝臟中FASN基因表達(dá)量顯著下降。本研究得到相似的結(jié)論，飼喂干桑葉和青貯桑葉主要影響絨山羊FASN基因在絨山羊肝臟中的表達(dá)量，而對(duì)脂肪組織和背最長(zhǎng)肌中的基因表達(dá)無(wú)顯著影響。大量研究表明，腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路在脂肪代謝中發(fā)揮重要調(diào)控作用[17,32]。FASN的表達(dá)受到固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(SREBP)轉(zhuǎn)錄因子家族的直接調(diào)控作用，SREBP-1是肝臟中脂肪合成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，在AMPK通路中通過對(duì)SREBP-1的抑制作用下調(diào)FASN的表達(dá)[33]。Chang等[32]研究了桑葉提取物抑制肝臟脂肪積累的作用，檢測(cè)到肝臟中FASN、SREBP-1表達(dá)量均顯著降低。本試驗(yàn)并未對(duì)SREBP-1的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，后續(xù)可從AMPK通路進(jìn)行機(jī)制探究。有研究指出，Leptin表達(dá)量的增加能抑制FASN的基因表達(dá)，從而減少脂肪沉積[34]。因此，本試驗(yàn)中飼喂桑葉組FASN基因表達(dá)量降低也可能與Leptin表達(dá)量上升有關(guān)。

Leptin是由脂肪細(xì)胞分泌的與能量代謝有關(guān)的激素，能消耗脂肪組織中的油脂而對(duì)肌肉組織無(wú)明顯影響[35]。Leptin通過激活A(yù)MPK信號(hào)通路，促進(jìn)TG分解及脂肪酸的氧化，降低細(xì)胞中TG和游離脂肪酸的含量[36]。有研究發(fā)現(xiàn)，Leptin能夠提高肌肉組織中LPL的基因表達(dá)量，但抑制脂肪組織中LPL的表達(dá)[37]。本研究獲得相似的結(jié)果，添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%青貯桑葉組背最長(zhǎng)肌中Leptin基因表達(dá)量顯著升高，對(duì)應(yīng)的LPL表達(dá)量也顯著上升；但在脂肪組織中，未觀察到Leptin、LPL基因表達(dá)量有顯著上升，這可能是由于Leptin的抵抗現(xiàn)象引起的[12,38]，具體機(jī)制應(yīng)在后續(xù)試驗(yàn)中進(jìn)行探究。

4 結(jié) 論

日糧中添加干桑葉和青貯桑葉對(duì)絨山羊脂肪代謝均有調(diào)控作用，但整體上飼喂青貯桑葉降血脂、抑制脂肪沉積效果更明顯；在絨山羊日糧中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%的青貯桑葉有更好的降血脂效果，降低血液中TC、TG、LDL-C濃度，并且能夠促進(jìn)脂肪組織中LPL、Leptin基因表達(dá)，抑制肝臟中FASN基因的表達(dá)。

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