子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中緊密連接蛋白Occludin和ZO-1的表達(dá)及關(guān)聯(lián)性

梁曉紅 段廣庭 袁 穎

(青海省交通醫(yī)院婦科，青海 西寧 810001)

子宮內(nèi)膜癌是常發(fā)生于中老年女性，是與子宮內(nèi)膜上皮不典型增生相關(guān)的腫瘤。病變可呈侵襲性生長，并可以伴有轉(zhuǎn)移〔1〕。細(xì)胞間緊密連接具有維持細(xì)胞極性、黏附性、運(yùn)動(dòng)性及調(diào)節(jié)分化的功能〔2，3〕。Occludin和ZO-1是與緊密連接相關(guān)的蛋白，主要位于人上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞連接的復(fù)合體中，正常組織細(xì)胞中表達(dá)增高，而在腫瘤中的表達(dá)下降，尤其是惡性程度高的腫瘤中表達(dá)常丟失，這為腫瘤離開原發(fā)部位提供了重要條件〔4，5〕。本實(shí)驗(yàn)分析子宮內(nèi)膜樣腺癌術(shù)后組織中Occludin和ZO-1的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2015年1月至2016年12月青海省交通醫(yī)院經(jīng)病理學(xué)確診為子宮內(nèi)膜樣腺癌，并行手術(shù)根治的患者69例為觀察組，年齡42～85歲，平均59.6歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①多原發(fā)癌；②伴有生殖系統(tǒng)先天畸形；③有遺傳性疾病。同期確診為子宮內(nèi)膜復(fù)雜性增生伴不典型增生患者28例為對照組，年齡40～78歲，平均56.8歲。28例因子宮肌瘤行子宮全切后的增生期子宮內(nèi)膜組織為正常對照組，年齡43～75歲，平均54.9歲。3組均留取術(shù)后蠟塊組織和臨床資料，一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2Occludin和ZO-1的檢測 術(shù)后石蠟包埋組織均切取4 μm切片，應(yīng)用免疫組化方法檢測3組中Occludin和ZO-1的表達(dá)，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，均由臨床實(shí)驗(yàn)室的技師進(jìn)行操作，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，做好質(zhì)量控制工作，減少誤差。

1.3結(jié)果判定 Occludin和ZO-1的陽性表達(dá)部位是細(xì)胞膜，以呈現(xiàn)淡黃色-褐色為陽性反應(yīng)細(xì)胞。依據(jù)染色強(qiáng)度不同分為4個(gè)等級：0分，無顯色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，棕褐色。根據(jù)同樣物鏡下(400倍視野)陽性細(xì)胞數(shù)的不同分為5個(gè)等級：0分，<5%；1分，5%～25%；2分，26%～50%；3分，51%～75%；4分，76%～100%。將得分相乘定為最終陽性結(jié)果，以0～3分定為陰性，以>3分定為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.13組Occludin和ZO-1陽性率比較 3組Occludin和ZO-1陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

2.2觀察組不同臨床特征中Occludin和ZO-1陽性率的比較 觀察組中Occludin和ZO-1表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，Occludin的表達(dá)與腫瘤的浸潤深度密切相關(guān)，二者均與患者的年齡、分化程度無明顯相關(guān)性。見表2。

表1 3組中Occludin和ZO-1陽性率比較〔n(%)〕

表2 觀察組不同臨床特征中Occludin和ZO-1陽性率的比較〔n(%)〕

2.3觀察組中Occludin和ZO-1的相關(guān)性 Occludin和ZO-1呈正相關(guān)(r=0.49，P=0.038)。

3 討 論

子宮內(nèi)膜樣腺癌是來源于子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，是腫瘤性演變較為典型的腫瘤，即由不典型增生到癌變到浸潤性病變，并繼發(fā)腫瘤性的轉(zhuǎn)移。在轉(zhuǎn)移前腫瘤細(xì)胞的黏附性降低，細(xì)胞連接的程度下降，細(xì)胞間的固有結(jié)構(gòu)可能因黏附性下降而引發(fā)破壞，使腫瘤細(xì)胞易于離開原發(fā)灶形成轉(zhuǎn)移瘤〔6，7〕。Occludin是第一個(gè)被克隆的緊密連接跨膜蛋白，其基因定位于5q13.1，分子質(zhì)量為64 kD，其表達(dá)的蛋白由504個(gè)氨基酸構(gòu)成，具有4個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域〔8，9〕。ZO-1 是第一個(gè)被確定的緊密連接相關(guān)蛋白，是膜相關(guān)鳥苷酸激酶蛋白家族成員，可以和ZO-2、ZO-3 形成復(fù)合體，并與Occludin的羧基端相互作用，將跨膜蛋白和細(xì)胞骨架連接在一起傳遞各類信號(hào)〔10，11〕。目前普遍認(rèn)為，腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移與細(xì)胞間連接力的喪失有關(guān)〔12〕。Occludin 和 ZO-1 蛋白表達(dá)的下調(diào)或缺失，是腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移的重要步驟〔13，14〕。Occludin 和 ZO-1在對腫瘤進(jìn)展的作用過程中也可能對細(xì)胞外基質(zhì)進(jìn)行調(diào)節(jié)，主要通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的分泌發(fā)揮這種調(diào)控作用，這時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)形成有效的降解，使腫瘤轉(zhuǎn)移的屏障形成有效的破壞，細(xì)胞在松解后穿過基底膜，形成轉(zhuǎn)移性腫瘤病灶。

本研究提示Occludin和ZO-1二者低表達(dá)時(shí)可以促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。Occludin表達(dá)下降后可以促進(jìn)腫瘤的浸潤性生長。因此兩種蛋白丟失意味著腫瘤性的病變和腫瘤不良的生物學(xué)行為。朱克超等〔15〕通過觀察食管鱗癌中Occludin和ZO-1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)二者表達(dá)下調(diào)，認(rèn)為其與腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，這與腫瘤細(xì)胞緊密連接的完整性破壞有關(guān)，為腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移提供了可能〔16〕。本實(shí)驗(yàn)說明二者不是細(xì)胞分化過程中的調(diào)節(jié)蛋白，二者在結(jié)構(gòu)上可能具有同源性，在功能上具有協(xié)同作用〔10〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為Occludin和ZO-1表達(dá)的變化使腫瘤的浸潤模式發(fā)生改變，即二者表達(dá)丟失后引起細(xì)胞極性紊亂，可能促進(jìn)功能性腺管狀結(jié)構(gòu)的丟失，使腫瘤細(xì)胞的形態(tài)更加彌漫，細(xì)胞的體積更小，易于浸潤和遷移〔17〕。

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