結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1及c-met蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

李樹斌 張延新

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院心胸外科，河南 新鄉(xiāng) 453699)

乳腺癌的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)對患者預(yù)后影響較大〔1〕。研究顯示，結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(MACC)1與結(jié)腸癌、肝癌等惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)存在一定的相關(guān)性，但其在乳腺癌中的表達(dá)報(bào)道較少〔2〕。而c-met主要編碼肝細(xì)胞生長因子酪氨酸激酶受體蛋白，與癌細(xì)胞增殖、浸潤及血管生成等相關(guān)。目前對于乳腺癌c-met蛋白的表達(dá)已有研究〔3〕，但其與MACC1蛋白的關(guān)系尚不明確。本研究探討MACC1及c-met在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 選擇新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院心胸外科2005年1月至2013年1月行乳腺癌手術(shù)并經(jīng)病理證實(shí)乳腺癌的石蠟標(biāo)本82例，年齡23～84〔平均(42.3±4.2)〕歲；浸潤性(包括導(dǎo)管癌和特殊類型癌)53例，非浸潤性癌(包括導(dǎo)管內(nèi)癌和小葉原位癌)29例；組織學(xué)分級：Ⅰ級21例，Ⅱ級35例，Ⅲ級26例；TNM分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期29例，Ⅲ期30例。所有患者術(shù)前未接受放療、免疫治療或化療，全部患者獲得隨訪。30例乳腺癌術(shù)后標(biāo)本的邊緣，經(jīng)病理確診為正常乳腺組織。

1.2試劑 兔抗人MACC1多克隆抗體(美國Sigma公司)；兔抗人c-met 多克隆抗體(美國Dako公司)；二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒、SP免疫組化試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3免疫組化染色 采用S-P免疫組化染色法檢測。切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟，3%H2O2處理5 min，微波進(jìn)行抗原修復(fù)。一抗、二抗、三抗依次加入，DAB進(jìn)行顯色，采用蘇木素復(fù)染。磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗制作陰性對照切片，采用已知陽性癌組織石蠟標(biāo)本切片作為陽性對照。試驗(yàn)過程嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4結(jié)果判定 MACC1和c-met染色位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，染色為棕黃色或棕褐色為陽性細(xì)胞。兩位病理科醫(yī)師采用雙盲法獨(dú)立讀片，選取10個(gè)400倍視野，按照染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占的比例作為綜合判斷標(biāo)準(zhǔn)。染色強(qiáng)度：無著色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。陽性細(xì)胞百分比：陰性0分，陽性細(xì)胞<25%計(jì)1分，25%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，>75%計(jì)4分；兩項(xiàng)指標(biāo)積分相乘，乘積>3分為陽性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，采用Spearman等級相關(guān)分析，采用Log Rank test檢驗(yàn)分析隨訪數(shù)據(jù)。

2 結(jié) 果

2.1MACC1和c-met蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá) 見圖1。MACC1在正常乳腺和乳腺癌組織中陽性表達(dá)率分別為26.7%(8/30)和76.8%(63/82)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=50.08，P<0.01)。c-met在正常乳腺和乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率分別為10.0%(3/30)和70.7%(58/82)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=77.207，P<0.01)。

圖1 MACC1及c-met蛋白在乳腺癌組織表達(dá)(DAB，×200)

2.2MACC1及c-met蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 MACC1及c-met蛋白陽性表達(dá)與年齡、月經(jīng)、腫瘤大小差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而與組織學(xué)分級、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 MACC1及c-met蛋白在乳腺癌中的陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

2.3MACC1與c-met蛋白在乳腺癌中陽性表達(dá)的相關(guān)性 MACC1陽性表達(dá)的組織中乳腺癌c-met陽性表達(dá)率〔82.5%(52/63)〕明顯高于MACC1陰性表達(dá)乳腺癌組織中陽性表達(dá)率〔31.5%(6/19),χ2=52.514，P<0.01〕，相關(guān)性分析顯示，MACC1與c-met的陽性表達(dá)明顯正相關(guān)(r=0.834，P<0.01)。

3 討 論

MACC1主要位于人類7號染色體7p21.1上，與結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌、宮頸癌等發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，但在乳腺癌中的表達(dá)報(bào)道較少〔4〕。本研究表明，隨著乳腺癌的進(jìn)展，組織分化程度越低，臨床分期越晚，浸潤程度越高且發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，MACC1蛋白陽性率相應(yīng)越高，提示MACC1的表達(dá)與乳腺癌進(jìn)展中起一定的作用。文獻(xiàn)顯示，MACC1蛋白高表達(dá)的腫瘤患者一般生存時(shí)間較短，預(yù)后較差，因此可以把MACC1的蛋白表達(dá)作為臨床診斷、預(yù)測及療效監(jiān)測腫瘤標(biāo)志物〔5，6〕。

c-met位于人染色體7q21-q31上，是原癌基因編碼的肝細(xì)胞生長因子(HCG)的受體，為受體酪氨酸蛋白激酶家族成員，與部分癌基因產(chǎn)物和調(diào)節(jié)蛋白密切相關(guān)，參與細(xì)胞相關(guān)信號傳導(dǎo)，調(diào)控細(xì)胞骨架重排，與細(xì)胞增殖、分化和運(yùn)動存在一定的聯(lián)系〔7〕。本研究顯示c-met蛋白在乳腺癌組織中的陽性率明顯高于乳腺正常組織，其陽性表達(dá)與患者年齡、月經(jīng)及腫瘤大小無相關(guān)性，與組織分化程度、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)，此結(jié)果與相關(guān)研究基本一致〔8〕，這也提示乳腺癌的發(fā)生和進(jìn)展與c-met原癌基因的激活相關(guān)，可以把c-met的蛋白表達(dá)作為乳腺癌的輔助診斷，并判斷患者預(yù)后。

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展包含了多因素、多階段的過程，并由多種因素彼此作用，嚴(yán)重者出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化。本研究提示MACC1基因可能通過c-met途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。

1胡一迪，胡孝渠，李 權(quán)，等.Survivin，caspase-8在人體乳腺增生、乳腺癌癌前病變和乳腺癌中的表達(dá)程度分析〔J〕.中國生化藥物雜志，2015；40(1)：100-2.

2賀志云，白志剛，張忠濤，等.腫瘤轉(zhuǎn)移的一個(gè)靶向治療位點(diǎn)MACC1〔J〕.國際外科學(xué)雜志，2014；41(5)：338-41.

3王婧男，張 楠，趙建強(qiáng)，等.乳腺癌中HGF及其受體c-met的表達(dá)與淋巴管生成及淋巴道轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2010；48(3)：90-3.

4Juneja M，Ilm K，Schlag PM，etal.Promoter identification and transcriptional regulation of the metastasis gene MACC1 in colorectal cancer 〔J〕.Mol Oncol，2013；7(5)：929-43.

5Huang Y，Zhang H，Cai J，etal.Overexpression of MACC1 and its significance in human breast cancer progression 〔J〕.Cell Biosci，2013；3(1)：16.

6蔣國燕，李 瑾，施 露，等.RNAi沉默MACC1基因表達(dá)抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖和遷移〔J〕.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013；35(8)：1928-31.

7Ma J，Ma J，Meng Q，etal.Prognostic value and clinical pathology of MACC-1 and c-MET expression in gastric carcinoma 〔J〕.Pathol Oncol Res，2013；19(4)：821-32.

8李 冰，呂亞莉，劉 琳，等.乳腺癌c-Met 蛋白的表達(dá)及臨床病理意義〔J〕.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2012；6(1)：99-102.