老年非瓣膜性心房顫動(dòng)與C反應(yīng)蛋白和膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因多態(tài)性的關(guān)系

畢勇志 馬 芬

(河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院急診科,河南 開封 475000)

老年人心房顫動(dòng)(房顫)的發(fā)生率較高，冠心病、高血壓、風(fēng)濕性瓣膜病、心力衰竭等是老年房顫的危險(xiǎn)因素。房顫包括瓣膜性房顫和非瓣膜性房顫。非瓣膜性房顫是由充血性心肌病、冠心病、高血壓等并發(fā)的心房顫動(dòng)，但并不是所有的上述疾病患者都并發(fā)房顫，房顫和上述疾病的嚴(yán)重程度也沒有直接關(guān)系，因此推測(cè)非瓣膜性房顫可能存在遺傳異質(zhì)性〔1〕。房顫的發(fā)生和炎癥有一定關(guān)系，C反應(yīng)蛋白(CRP)基因C1444T基因多態(tài)性和炎癥時(shí)的CRP水平有一定關(guān)系。有研究〔2～6〕發(fā)現(xiàn)CRP基因多態(tài)性和一些心腦血管疾病有相關(guān)性；心肌梗死、糖尿病、高血壓等是非瓣膜性房顫的危險(xiǎn)因素，膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP)基因TaqIB多態(tài)性和上述疾病關(guān)系密切。本研究擬探討老年非瓣膜性房顫與CRP基因C1444T和CETP基因TaqIB多態(tài)性的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年5月至2016年5月漢族老年非瓣膜性房顫患者112例作為觀察組，同期漢族老年無(wú)房顫患者112例作為對(duì)照組。本研究經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者在納入研究前均簽署知情同意書，同意研究的所有測(cè)試。觀察組年齡(69.3±11.4)歲，男61例，女51例，吸煙31例，飲酒34例，體重指數(shù)(25.1±1.5)kg/m2；對(duì)照組年齡(70.1±9.8)歲，男59例，女53例，吸煙35例，飲酒42例，體重指數(shù)(24.9±1.3)kg/m2。兩組年齡、性別、吸煙、飲酒、體重指數(shù)等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

排除標(biāo)準(zhǔn)：非漢族者，年齡<60歲，研究對(duì)象之間有血緣關(guān)系者，有炎癥反應(yīng)者，患有惡性腫瘤、風(fēng)濕性疾病、肝腎疾病者，合并瓣膜性心臟病者等。

1.2主要試劑 DNA提取試劑盒，Taq聚合酶，DNA合成緩沖液(上海生工生物有限公司)；Mix dNTP，TaqQI限制性內(nèi)切酶(天根生物有限公司)等。

1.3方法 血液采集：受試者在住院第2天清晨時(shí)采集靜脈血5 ml，抽取到EDTA抗凝管中。低溫冰凍保存，并于7 d內(nèi)完成DNA提取。

制備基因組DNA：按DNA提取試劑盒步驟進(jìn)行操作，將收集的全血加入細(xì)胞裂解液進(jìn)行裂解，加入蛋白沉淀溶液沉淀，收集含有DNA的上清液，加入異丙醇，離心得到白色DNA沉淀，加入DNA裂解液進(jìn)行DNA裂解。電泳時(shí)選擇的電泳溫度不應(yīng)超過(guò)30℃，電壓80～100 V。本研究選擇 500 Ladder DNA Marker 條帶。

CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB多態(tài)性檢測(cè)：將裂解的DNA采用PCR進(jìn)行擴(kuò)增，CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB均進(jìn)行酶切，瓊脂糖凝膠電泳確定基因型，CPR基因C1444T三種基因型為CC、TT、CT；CETP基因TaqIB三種基因型為B1B1、B1B2、B2B2。CETP基因TaqIB位點(diǎn)引物序列：5′-CACTAGCCCAGAGAGAGGAGTGCC-3′；3′-CTGAGCCCAGCCGCACACTAA-5′；CETP TaqIB多態(tài)性 RS 號(hào)碼為RS708272，RS序列為ACCTGGCTCAGATCTGAACCCTAACT〔C/T〕GAACCCCAGTGATTCTGGGTCTCAG。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件，組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，Logistic回歸分析CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB基因型與老年非瓣膜性房顫的關(guān)系，非條件Logistic回歸用于校正其他危險(xiǎn)因素可能對(duì)結(jié)果的影響。

2 結(jié) 果

2.1CPR基因C1444T基因型電泳結(jié)果 CPR基因C1444T多態(tài)性是C點(diǎn)-T點(diǎn)的突變，T為突變位點(diǎn)時(shí)為等位基因T，C為突變位點(diǎn)時(shí)為等位基因C，由此形成三種基因型，151、313 bp兩條片段為CC型；462 bp單條片段為TT基因型；151、313、462 bp三條片段為CT基因型。見圖1。

2.2CETP基因TaqIB基因型電泳結(jié)果 CETP基因TaqIB多態(tài)性是C點(diǎn)-T點(diǎn)的突變，T等位基因?yàn)橥蛔兾稽c(diǎn)時(shí)為等位基因B1，C等位基因?yàn)橥蛔兾稽c(diǎn)時(shí)為等位基因B2，由此形成三種基因型，173、353 bp兩條片段為B1B1型；532 bp單條片段為B2B2基因型；173、353、532 bp三條片段為B1B2基因型。見圖2。

1 為CC基因型，2為TT基因型，3為CT基因型圖1 CPR基因C1444T基因型酶切電泳圖

1為B2B2基因型，2為B1B1基因型，3為B1B2基因型圖2 CETP基因TaqIB基因型酶切電泳圖

2.3CPR基因C1444T基因型和CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg檢驗(yàn)結(jié)果 CPR基因C1444T基因型和CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg檢驗(yàn)，均P>0.05，表明本實(shí)驗(yàn)樣本群體代表性好。見表1，表2。

2.4兩組CPR基因C1444T基因型及等位基因頻率比較 兩組CPR基因C1444T基因型之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，觀察組TT基因型高于對(duì)照組。觀察組患者CPR基因C1444T T等位基因頻率高于對(duì)照組(P<0.05)。見表3。

2.5兩組CETP基因TaqIB基因型及等位基因頻率比較 兩組CETP基因TaqIB基因型之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，觀察組B1B1基因型高于對(duì)照組。觀察組CETP基因TaqIB B1等位基因頻率高于對(duì)照組(P<0.05)。見表4。

2.6Logistic回歸分析 將CPR基因C1444T基因型CC取值為0，CT基因型取值為1，TT基因型取值為2；將CETP基因TaqIB基因型B1B1取值為0，B1B2基因型取值為1，B2B2基因型取值為2；調(diào)整房顫的危險(xiǎn)因素，如高血壓、糖尿病、性別、年齡、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等，兩組之間CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB基因型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明漢族人群中CPR基因C1444T(T為危險(xiǎn)因子)和CETP基因TaqIB(B1為危險(xiǎn)因子)多態(tài)性可能和非瓣膜性房顫有相關(guān)性。見表5。

表1 CPR基因C1444T基因型Hardy-Weinberg檢驗(yàn)〔n(%),n=112〕

表2 CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg檢驗(yàn)〔n(%),n=112〕

表3 兩組CPR基因C1444T基因型及等位基因頻率比較〔n(%),n=112〕

表4 兩組CETP基因TaqIB基因型及等位基因頻率比較〔n(%),n=112〕

表5 各指標(biāo)Logistic回歸分析

3 討 論

人CRP基因編碼與細(xì)胞間信號(hào)傳遞及免疫系統(tǒng)關(guān)系比較密切。CRP水平是心血管事件的預(yù)測(cè)因子，房顫心肌組織中氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)增加，損傷內(nèi)皮功能。CRP水平是房顫的危險(xiǎn)因素，房顫時(shí)CRP水平升高。CRP基因C1444T多態(tài)性和CRP水平關(guān)系密切，有研究〔7～9〕，發(fā)現(xiàn)CRP基因多態(tài)性和缺血性腦卒中等心腦血管疾病有一定的相關(guān)性。劉威等〔8〕發(fā)現(xiàn)，急性腦梗死患者的血清CRP升高，但急性腦梗死和CRP基因rs1205基因多態(tài)性沒有相關(guān)性；姜玉章等〔2〕結(jié)果發(fā)現(xiàn)，缺血性腦卒中和CRP基因變異呈負(fù)相關(guān)。但關(guān)于CRP基因C1444T多態(tài)性和老年非瓣膜性房顫相關(guān)性的研究不多?？紤]到非瓣膜性房顫患者CRP水平增高，CRP基因C1444T多態(tài)性和CRP水平關(guān)系密切，那么CRP基因C1444T多態(tài)性是否和老年非瓣膜性房顫有相關(guān)性呢？本文研究發(fā)現(xiàn)，老年非瓣膜性房顫可能和CPR基因C1444T(T為危險(xiǎn)因子)多態(tài)性具有相關(guān)性。

CETP基因含有15個(gè)內(nèi)含子和16個(gè)外顯子，CETP的主要功能是轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)，介導(dǎo)高密度脂蛋白膽固醇被脂肪組織攝取，參與機(jī)體對(duì)炎癥的反應(yīng)〔10，11〕。CETP基因TaqIB多態(tài)性在心血管疾病中具有保護(hù)作用，CETP基因TaqIB的B2等位基因能夠引起血液中CETP水平降低，使CETP對(duì)高密度脂蛋白中膽固醇酯的轉(zhuǎn)移作用降低，血液中低密度脂蛋白水平下降，高密度脂蛋白水平升高，減弱血管壁的炎癥反應(yīng)〔12〕。血脂和心血管疾病的發(fā)生有一定的相關(guān)性，時(shí)曉遲等〔13〕對(duì)冠心病和CETP基因TaqIB多態(tài)性的相關(guān)性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)冠心病的發(fā)病和CETP基因TaqIB多態(tài)性沒有相關(guān)性；徐曉玉等〔10〕對(duì)腦出血與CETP基因I405V、D442G多態(tài)性的關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)漢族人群腦出血和CETP基因I405V多態(tài)性可能沒有關(guān)系，CETP基因D442G多態(tài)性和腦出血患者的血脂水平有一定相關(guān)性；劉欣等〔4〕對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性和CETP基因D442G多態(tài)性的關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性和CETP基因D442G突變有一定關(guān)系。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：老年非瓣膜性房顫可能和CETP基因TaqIB(B1為危險(xiǎn)因子)多態(tài)性具有相關(guān)性。CETP基因TaqIB B1等位基因?yàn)槲ｋU(xiǎn)因子，B2等位基因?yàn)楸Ｗo(hù)因子，B2等位基因可以降低血液中低密度脂蛋白水平，減輕血管壁的炎癥反應(yīng)，和非瓣膜性房顫的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)；B1等位基因和B2等位基因的作用相反，B1等位基因和高血壓、冠狀動(dòng)脈疾病的發(fā)病關(guān)系密切，而房顫的發(fā)生和高血壓、冠狀動(dòng)脈疾病關(guān)系密切。因此，考慮CETP基因TaqIB B1等位基因通過(guò)升高低密度脂蛋白水平促進(jìn)血管壁的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而和老年非瓣膜性房顫的發(fā)生相關(guān)。

1Yadava M，Hughey AB，Crawford TC.Postoperative atrial fibrillation：incidence，mechanisms，and clinical correlates〔J〕.Heart Fail Clin，2016；12(2)：299-308.

2姜玉章，王 兵，李前輝，等.C反應(yīng)蛋白基因多態(tài)性與超敏C反應(yīng)蛋白的關(guān)系及其與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)研究〔J〕.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012；35(10)：916-20.

3Kotlêga D，Bia?ecka M，Kurzawski M，etal.Risk factors of stroke and-717A>；G (rs2794521) CRP gene polymorphism among stroke patients in West Pomerania province of Poland〔J〕.Neurol Neurochir Pol,2014；48(1)：30-4.

4劉 欣，于明月，?；勖簦?CETP基因D442G多態(tài)性與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系及意義〔J〕.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015；42(10)：1914-7.

5Bakeyi M，Wulasihan M，Lu WH，etal.Relationship between the TaqI B polymorphism of the cholesterol ester transfer protein gene and atrial fibrillation in Han and Kazak populations〔J〕.Genet Mol Res,2014；13(4)：9300-7.

6Meroufel DN，Mediene-Benchekor S，Lardjam-Hetraf SA，etal.Associations of common SNPs in the SORT1，GCKR，LPL，APOA1，CETP，LDLR，APOE genes with lipid trait levels in an Algerian population sample〔J〕.Int J Clin Exp Pathol,2015；8(6)：7358-63.

7Szydlowski L，Skierska A，Markiewicz-Loskot G，etal.The role of interleukin-6，its-174 G>；C polymorphism and C-reactive protein in idiopathic cardiac arrhythmias in children〔J〕.Adv Med Sci,2013；58(2)：320-5.

8劉 威，趙美英，張 寧，等.急性腦梗死與CRP基因及 rs1205基因多態(tài)性的相關(guān)性分析〔J〕.中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2015；18(14)：51-2.

9Chang SN，Tsai CT，Wu CK，etal.A functional variant in the promoter region regulates the C-reactive protein gene and is a potential candidate for increased risk of atrial fibrillation〔J〕.J Intern Med,2012；272(3)：305-15.

10徐曉玉，鄭孝瑜，揭福平，等.CETP基因I405V、D442G多態(tài)性與長(zhǎng)沙漢族人腦出血及血脂水平的相關(guān)性〔J〕.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2016；33(1)：91-6.

11Bushueva OY，Stetskaya TA，Korogodina TV，etal.Investigation of the association between the HindⅢ polymorphism of the LPL gene and the Taq1b polymorphism of the CETP gene with the risk of atherothrombotic stroke in the dwellers of Central Russia〔J〕.Ter Arkh，2015；87(8)：86-91.

12Guo S，Hu Y，Ding Y，etal.Association between eight functional polymorphisms and haplotypes in the cholesterol ester transfer protein (CETP) gene and dyslipidemia in national minority adults in the far west region of china〔J〕.Int J Environ Res Public Health，2015；12(12)：15979-92.

13時(shí)曉遲，卞春暉，劉 瑞，等.膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-TaqIB 基因多態(tài)性與冠心病發(fā)病的相關(guān)性研究〔J〕.中國(guó)急救醫(yī)學(xué)，2015；(4)：337-41.