布病生物安全Ⅱ級實(shí)驗(yàn)室生物安全風(fēng)險(xiǎn)評估

章春燕

（遼寧朝陽市動物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 朝陽 122000）

布病是布魯氏菌病的簡稱，是一種細(xì)胞內(nèi)寄生菌，可感染牛、豬、山羊、綿羊、野兔、馴鹿、沙林鼠、犬等多種動物和人，是一種危害較為嚴(yán)重的人畜共患病[1-2]。

該病在我國呈廣泛分布，牛羊飼養(yǎng)量較大的地區(qū)尤為嚴(yán)重。在對開展實(shí)驗(yàn)室診斷的過程中，實(shí)驗(yàn)人員在進(jìn)行采樣、實(shí)驗(yàn)室診斷等實(shí)驗(yàn)操作時(shí)可能會暴露于物理、化學(xué)以及生物性危險(xiǎn)因素中，造成實(shí)驗(yàn)室感染。本文以布病的病原學(xué)為背景資料，分析實(shí)驗(yàn)室活動可能產(chǎn)生的危害、對實(shí)驗(yàn)室人員健康的影響以及其他相關(guān)因素，對開展布病診斷的實(shí)驗(yàn)室生物安全進(jìn)行初步的風(fēng)險(xiǎn)評估，以期為從事布病診斷相關(guān)操作的實(shí)驗(yàn)室人員做好生物安全防護(hù)提供依據(jù)。

1 布魯氏菌病流行病學(xué)

布魯氏菌是革蘭氏染色陰性的短桿狀菌，不產(chǎn)生外毒素，但有毒性較強(qiáng)的內(nèi)毒素，被吞噬細(xì)胞吞噬成為胞內(nèi)寄生菌。布魯氏菌病的抗原結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，包括6種20個(gè)生物型，已知的菌種中，可感染人類的有5個(gè)。由強(qiáng)到弱依次為羊種、豬種、牛種、犬種、海洋生物種布魯氏菌[3]。

1.1 傳染源

由于布魯氏菌主要侵蝕生殖系統(tǒng)，因此患病母畜的乳汁、流產(chǎn)胎兒、胎衣、羊水、子宮陰道分泌物、公畜的精液、膿液、糞和尿及患病動物污染的環(huán)境、飼料、墊草、用具等都是主要的傳染源[4]。

1.2 易感動物

易感動物比較多，目前已在60多種動物身上發(fā)現(xiàn)布魯氏菌。我國的易感動物依次為羊、牛、豬、鹿、犬。母畜較公畜易感。人群對本病普遍易感，但本病在人群中感染有明顯的職業(yè)性，與患病動物接觸較多的養(yǎng)殖戶、屠宰戶、鄉(xiāng)村獸醫(yī)、鄉(xiāng)村防疫員等人員的感染率比一般人高。

1.3 傳播途徑

一般認(rèn)為，該病主要是通過直接接觸傳染，比如交配，也可通過被該病原污染的環(huán)境以及一些常見的昆蟲媒介間接傳染。感染途徑包括生殖道、消化道、皮膚和黏膜等，實(shí)際上布魯氏菌病幾乎可通過任何途徑感染。

1.4 穩(wěn)定性

布魯氏菌對外界環(huán)境的抵抗力強(qiáng)，在污染的土壤和水中可存活30～120 d，皮毛60～120 d，鮮乳中8 d，肉中2個(gè)月，糞便中120 d，流產(chǎn)胎兒中約75 d，子宮滲出物中200 d。在陽光直射下可存活4 h。對熱和消毒劑的抵抗力不強(qiáng)，煮沸能將其立即殺死，新潔爾滅等消毒劑5 min可將其殺死。

1.5 人感染后的潛伏期和致病性

布氏桿菌病的潛伏期一般是7～60 d，也有一些個(gè)別病例是在感染后數(shù)月甚至1年才發(fā)病。如果是在實(shí)驗(yàn)室中感染，這種患者一般會在10～50 d內(nèi)就發(fā)病。人感染布氏桿菌病在臨床表現(xiàn)較為多樣，一些病人的臨床癥狀較為簡單，僅在一些部位表現(xiàn)為局部的膿腫；一些復(fù)雜的病例在臨床上則出現(xiàn)多個(gè)臟器、系統(tǒng)同時(shí)受到影響。在我國羊型布病最為多見，未經(jīng)治療者的自然病程為3～6個(gè)月（平均4個(gè)月），但也可以表現(xiàn)為僅1個(gè)月或長達(dá)數(shù)年以上。布氏桿菌病的病程一般可分為急性期和慢性期，牛型的急性期常常不典型，不容易確診。

人類感染布魯氏菌后在臨床上可將其分為急性型、亞急性型、慢性型、復(fù)發(fā)感染型和局限性感染。急性型在臨床上主要表現(xiàn)出的特征性癥狀為發(fā)熱、乏力、多汗、睪丸炎、關(guān)節(jié)炎等。還有一些在臨床上會出現(xiàn)神經(jīng)痛、頭痛、肝脾腫大、皮疹等。亞急性型在臨床上主要表現(xiàn)為一些不典型癥狀，如失眠、乏力、上呼吸道炎癥、低熱、食欲差等，一些個(gè)別急性感染的病例可能也會與亞急性型相同，沒有非常典型的臨床癥狀。慢性型在臨床上主要表現(xiàn)為頭痛、肌肉疼痛、關(guān)節(jié)痛、夜間盜汗、長期低熱、乏力，有一些在臨床上還會表現(xiàn)為胃腸道癥狀（如胃納差、腹瀉、便秘等）、失眠、抑郁、易激動等，這些癥狀在臨床上極易被診為神經(jīng)官能癥而耽誤病情。

1.6 治療

利福平與多西環(huán)素聯(lián)合治療：利福平劑量為600～900 mg·d-1；多西環(huán)素 200 mg·d-1，分次口服，連用6周，為首選方案。亦可選用四環(huán)素與利福平聯(lián)合治療。也可用鏈霉素、慶大霉素、阿米卡星與多西環(huán)素聯(lián)合治療。在治療期間要盡量臥床休息，可以適量口服一些維生素。對于發(fā)熱的病人一般采用物理降溫的方式進(jìn)行處理，劇烈頭痛及關(guān)節(jié)痛的患者可應(yīng)用解熱鎮(zhèn)痛藥物。

2 生物安全Ⅱ級實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動的潛在危險(xiǎn)性

2.1 實(shí)驗(yàn)活動

實(shí)驗(yàn)活動主要是指在實(shí)驗(yàn)室從事與布氏桿菌病病原相關(guān)活動的行為，包括布氏桿菌病病原的血清學(xué)及病原學(xué)檢測等。

2.2 實(shí)驗(yàn)活動的類型

根據(jù)該病原菌的檢驗(yàn)流程，在實(shí)驗(yàn)室中主要涉及樣品的采集及運(yùn)輸、樣品的接收、實(shí)驗(yàn)室檢測操作過程、生物安全柜等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的使用、試驗(yàn)樣本及廢棄物的處理等。

2.3 實(shí)驗(yàn)活動風(fēng)險(xiǎn)識別和控制措施

2.3.1 直接和簡接接觸感染風(fēng)險(xiǎn)

樣品采集保存運(yùn)輸、樣品接收、樣品檢測的過程中，實(shí)驗(yàn)人員直接或間接接觸了具有感染性的樣品以及因感染性樣品外泄導(dǎo)致污染的樣品外包裝、操作臺面、儀器設(shè)備等造成人員感染和樣品污染。

在采集樣品和接收樣品的過程中，每個(gè)動物群體都應(yīng)當(dāng)視為可疑感染動物群體，識別被傳染的潛在風(fēng)險(xiǎn)。在采樣時(shí)，采樣人員要做好個(gè)人防護(hù)，佩戴手套、口罩、帽子、防護(hù)眼罩、穿防護(hù)服、鞋套等防護(hù)設(shè)備。接收樣品時(shí)，應(yīng)當(dāng)遵守《實(shí)驗(yàn)室生物安全管理程序》的要求，設(shè)有專門接受樣品的房間或空間，接樣人員在做好個(gè)人防護(hù)的同時(shí)，在指定的地點(diǎn)完成樣品交接，樣品通過指定的通道進(jìn)入實(shí)驗(yàn)，避免樣品對實(shí)驗(yàn)室以外的環(huán)境造成污染，從而造成人員接觸感染。

樣品在采集和運(yùn)輸過程中發(fā)生泄露甚至擴(kuò)散，可能會引發(fā)從業(yè)人員感染或污染環(huán)境，為有效降低這種風(fēng)險(xiǎn)，收集標(biāo)品的容器最好為質(zhì)地堅(jiān)固、密封良好的塑料制品，保證密封后無泄露，在容器外部不應(yīng)有殘留物，標(biāo)本的內(nèi)層要在生物安全柜內(nèi)打開，并用消毒劑對外部進(jìn)行噴灑消毒。樣品保存的冰箱冰柜應(yīng)貼生物安全標(biāo)識，實(shí)行雙人雙鎖管理，確保陽性樣品不隨意流出實(shí)驗(yàn)室。

在接觸過可疑污染物時(shí)，應(yīng)及時(shí)更換手套，工作服應(yīng)在檢測活動結(jié)束時(shí)應(yīng)通過消毒液浸泡或紫外燈照射消毒處理，工作臺面、地面、使用的儀器設(shè)備也要消毒處理，防止接觸感染。

2.3.2 氣溶膠產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)

工作人員在打開樣品、用移液器抽吸樣品等實(shí)驗(yàn)活動中都會產(chǎn)生氣溶膠。因此，樣品的打開、實(shí)驗(yàn)操作等活動盡可能的在生物安全柜內(nèi)操作，操作過程動作應(yīng)輕柔。

2.3.3 銳器的意外傷害

注射器等銳器使用不當(dāng)造成損傷。風(fēng)險(xiǎn)控制措施：在采樣等實(shí)驗(yàn)活動中，應(yīng)嚴(yán)格遵守防護(hù)措施，避免手持注射器等銳器隨意走動或傳遞銳器；用注射器采集動物血液樣品時(shí)在采集血液樣品時(shí)，應(yīng)小心規(guī)范操作，采樣結(jié)束后，應(yīng)將針頭帽套回，避免樣品運(yùn)輸過程扎傷工作人員；禁止用手分離注射器針頭或徒手毀壞使用過的注射器，推薦使用負(fù)壓離心管和獸用采血針采血。將使用過的針頭丟入利器盒中，防止意外傷害。利器盒在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要統(tǒng)一滅菌處理。

2.3.4 設(shè)備風(fēng)險(xiǎn)

生物安全柜如果沒有按照其設(shè)備的操作規(guī)范進(jìn)行定期的維護(hù)與檢修，就會失去應(yīng)有的防護(hù)效果，高壓滅菌器滅菌也要定期更換膠圈等，以確保其滅菌效果。離心機(jī)使用時(shí)操作不當(dāng)，如離心機(jī)的頂蓋沒有蓋嚴(yán)引起離心的樣品向外飛濺，也或者離心機(jī)沒有配平等原因?qū)е碌碾x心管破裂，離心機(jī)內(nèi)部被樣品污染。對特殊儀器設(shè)備管理人員應(yīng)當(dāng)定期進(jìn)行培訓(xùn)考核，考核合格方能上崗。儀器使用人員應(yīng)遵守儀器設(shè)備操作要求，儀器要在規(guī)定時(shí)間內(nèi)定期維護(hù)檢測以及期間核查，必保其正常工作性能。

3 建議

實(shí)驗(yàn)室在決定操作布病試驗(yàn)時(shí)，要先確定本實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)級別，以保障操作人員的自身安全，建議實(shí)驗(yàn)室達(dá)到生物安全Ⅱ級實(shí)驗(yàn)室的建筑和設(shè)施水平方可開展布病一系列的實(shí)驗(yàn)室檢測。

建議實(shí)驗(yàn)室人員定期開展檢驗(yàn)操作技術(shù)培訓(xùn)和生物安全技術(shù)培訓(xùn)，培訓(xùn)的內(nèi)容應(yīng)包括實(shí)驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)規(guī)范、生物安全制度、生物安全操作標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)規(guī)范、生物安全法律法規(guī)等，考核合格方能上崗，確保每個(gè)實(shí)驗(yàn)員都能自覺準(zhǔn)守操作標(biāo)準(zhǔn)，做好個(gè)人防護(hù)，避免感染。實(shí)驗(yàn)室可針對各風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)建立突發(fā)生物安全事故應(yīng)急預(yù)案，定期開展培訓(xùn)，有條件的實(shí)驗(yàn)室可定期開展生物安全應(yīng)急演練，通過實(shí)驗(yàn)室內(nèi)審、實(shí)驗(yàn)室督查等手段對實(shí)驗(yàn)員操作情況進(jìn)行檢查指導(dǎo)。

相關(guān)的儀器設(shè)備應(yīng)當(dāng)按要求定期維護(hù)和檢定，認(rèn)真確實(shí)的開展儀器期間核查，對有安全隱患和使用效果不達(dá)標(biāo)的儀器應(yīng)及時(shí)上報(bào)，對儀器設(shè)備管理人員和儀器設(shè)備使用人員開展儀器操作技術(shù)培訓(xùn)，對操作危險(xiǎn)性的儀器可授權(quán)專門人員操作使用。

建議實(shí)驗(yàn)室建立實(shí)驗(yàn)人員的健康檔案，每年組織實(shí)驗(yàn)人員開展布病項(xiàng)目的體檢，實(shí)驗(yàn)室人員必須在身體健康的情況下才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作，有皮膚損傷、懷孕等的情況下禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室開展本項(xiàng)目的檢測活動。

4 小 結(jié)

我國把布魯氏菌病定位二類病原微生物，認(rèn)為其是實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會較多，發(fā)病后不易治療，多人群健康造成危害較大的傳染病類種。近年來，布病在人間感染有逐年上身趨勢，人類布病流行又有明顯的職業(yè)傾向，獸醫(yī)、基層防疫人員、獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員都是高危人群，實(shí)驗(yàn)室關(guān)于布病檢測項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室風(fēng)險(xiǎn)識別和防控措施是一個(gè)持續(xù)性的工作，需要全體實(shí)驗(yàn)室工作人員的共同參與，只有實(shí)驗(yàn)室人員自覺提高風(fēng)險(xiǎn)防控意識，風(fēng)險(xiǎn)管控能力才能提升，實(shí)驗(yàn)室人員感染布病的安全隱患才能徹底排除。