宮頸癌組織中HIF-α、p53及Beclin1的表達(dá)水平探討

李 云，暴金玲，尹國武

(1.榆林市中醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 榆林 719000；2.西安唐城醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安710016)

宮頸癌作為臨床上一類發(fā)病率較高的婦科惡性腫瘤，近年來，針對宮頸癌的診斷與治療雖然取得了較高的進(jìn)展，但據(jù)調(diào)查資料顯示，宮頸癌在近5年內(nèi)的生存期僅占了約50%，且目前臨床工作者對于宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程仍不清楚[1]。因此，需要采取進(jìn)一步的探究與分析來判斷宮頸癌的發(fā)病機(jī)制，以更好的獲得預(yù)防宮頸癌發(fā)生或惡化的新途徑[2]。HIF-α作為機(jī)體中一個重要的細(xì)胞調(diào)節(jié)因子，其作用在于能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞的生長、惡化以及血管的生成產(chǎn)生促進(jìn)作用，p53基因作為一類重要的抑癌基因，對腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展能夠起到一定的抑制作用，當(dāng)其基因結(jié)構(gòu)發(fā)生異常表達(dá)時則會引起腫瘤的惡化。而Beclin1為近年來在新克隆的哺乳動物試驗中發(fā)現(xiàn)的自噬調(diào)控基因，當(dāng)該基因發(fā)生缺失性改變時則可能在一定程度上增加自發(fā)性腫瘤的發(fā)生率[3]。因此，本院開始針對不同宮頸組織中HIF-α、p53及Beclin1的表達(dá)水平及意義進(jìn)行分析，結(jié)果報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取榆林市中醫(yī)院自2014年6月至2017年6月收治的宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變患者分別作為宮頸癌組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組，另選擇同時期來院行體檢的健康婦女作為健康對照組，每組45例，均在本人簽字同意下收集其宮頸組織，全部人員均未接受放化療或是免疫治療，全部人員的宮頸組織涂片均由2名工作經(jīng)驗豐富且年資較高的病理科醫(yī)師判斷，宮頸癌組(全部為子宮頸鱗癌患者)年齡36～76歲之間，平均年齡(50.19±4.90)歲，其中高分化23例，低分化22例；宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組年齡36～76歲之間，平均年齡(50.19±4.90)歲，其中CINⅠ級15例，CINⅡ級16例，CIN Ⅲ級14例；健康對照組年齡36～76歲之間，平均年齡(50.19±4.90)歲。三組一般資料情況比較無明顯差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

在三組人員同意的前提下，采取宮頸活檢進(jìn)行病理檢查，收集宮頸上皮組織，對比三組宮頸組織中HIF-α、p53及Beclin1的表達(dá)水平。對收集到的宮頸組織標(biāo)本采用10%的多聚甲醛進(jìn)行固定，利用梯度酒精給予脫水處理后，給予常規(guī)的石蠟包埋，后制備成4μm厚度的連續(xù)切片，按照操作試劑上說明的要求對其給予抗原熱修復(fù)治療處理后，采用SP法對宮頸組織標(biāo)本給予常規(guī)的染色、標(biāo)記等。

1.3陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)

HIF-α、p53、Beclin1在石蠟切片中陽性染色主要定位在細(xì)胞核內(nèi)，并呈現(xiàn)出棕黃色的顆粒，在高倍鏡下進(jìn)行觀察，放大倍數(shù)為400，隨機(jī)定位選擇5個視野，每個視野下計數(shù)200個腫瘤細(xì)胞，一共可觀察到10 000個，其中陽性細(xì)胞<5%為陰性(-)、5%～10%為弱陽性(+)、11%～50%為中度陽性(++)、>50%為強(qiáng)陽性(+++)[4-5]。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理及分析，計數(shù)資料比較則采用卡方檢驗，多組間比較及組內(nèi)不同強(qiáng)度陽性表達(dá)率比較采用方差分析，若資料不符合正態(tài)分布或方差不齊，則應(yīng)用非參數(shù)檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson檢驗，分析宮頸癌組織中HIF-α、p53及Beclin1表達(dá)水平的相關(guān)性，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組組織中HIF-α的表達(dá)水平情況

宮頸癌組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組分別與健康對照組相比HIF-α的陽性表達(dá)率較高(χ2值分別為5.46、6.11，均P<0.05)，宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組與健康對照組相比HIF-α的陽性表達(dá)率較高(χ2=6.52，P<0.05)，健康對照組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組、宮頸癌組組織中HIF-α的陽性表達(dá)率呈現(xiàn)出上升趨勢，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表1。

表1 三組組織中HIF-α的表達(dá)水平對比(n)

Table 1 Comparison of expression level of HIF-α in tissues among three groups (n)

2.2三組組織中p53的表達(dá)水平情況

宮頸癌組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組分別與健康對照組相比p53的陽性表達(dá)率較高(P<0.05)，宮頸癌組與宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組相比p53的陽性表達(dá)率較高(P<0.05)，健康對照組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組、宮頸癌組組織中p53的陽性表達(dá)率呈現(xiàn)出上升趨勢，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表2。

表2 三組組織中p53的表達(dá)水平對比[n(%)]

2.3三組組織中Beclin1的表達(dá)水平情況

宮頸癌組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組分別與健康對照組相比Beclin1的陽性表達(dá)率較低(P<0.05)，宮頸癌組與宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組相比Beclin1的陽性表達(dá)率較低(P<0.05)，健康對照組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組、宮頸癌組組織中Beclin1的陽性表達(dá)率呈現(xiàn)出降低趨勢，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表3。

表3 三組組織中Beclin1的表達(dá)水平對比[n(%)]

2.4宮頸癌組織中HIF-α、p53及Beclin1表達(dá)水平的相關(guān)性

在45例宮頸癌患者的宮頸組織中，HIF-α、p53水平相較于宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組患者及健康人呈明顯高表達(dá)(P<0.05)，Beclin1水平相較于宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組患者及健康人則呈明顯低表達(dá)(P<0.05)，經(jīng)Pearson檢驗分析，在宮頸癌患者的發(fā)病過程中，宮頸組織中HIF-α、p53表達(dá)水平呈明顯的正相關(guān)(r值分別為0.5635、0.4754，P<0.05)。HIF-α、p53水平與Beclin1水平則呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.532、-0.678，均P<0.05)。

2.5宮頸癌HIF-α、p53及Beclin1免疫組化染色陽性切片

宮頸癌各指標(biāo)免疫組化染色見圖1，均表達(dá)于細(xì)胞核。

注：A為HIF-α；B為p53；C為Beclin1。

圖1 宮頸癌各指標(biāo)免疫組化染色陽性(20×)

Fig.1 HIF-α positive immunohistochemical staining in cervical cancer

3討論

3.1 HIF-α在實體瘤中的表達(dá)水平及意義

據(jù)研究資料顯示，實體瘤在發(fā)生發(fā)展期間存在著不同程度的缺氧情況，HIF-α為了對腫瘤血管的新生提供良好的環(huán)境起到了重要的作用[5]。早在1992年的一項研究中即發(fā)現(xiàn)了HIF-α能夠在缺氧條件下廣泛存在于人體以及哺乳動物的體內(nèi)，其作用機(jī)制在于能夠在缺氧條件下表現(xiàn)出表達(dá)水平方面的變化，且HIF-α靶基因的主要功能與新生血管以及細(xì)胞能量代謝具有密切的相關(guān)性，并對腫瘤細(xì)胞的生長發(fā)展產(chǎn)生一定的作用，表現(xiàn)為在腫瘤細(xì)胞的惡性進(jìn)展過程中呈現(xiàn)出逐漸升高的趨勢[6]。本次結(jié)果顯示，宮頸癌組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組分別與健康對照組相比HIF-α的陽性表達(dá)率較高，宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組與健康對照組相比HIF-α的陽性表達(dá)率較高，健康對照組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組、宮頸癌組組織中HIF-α的陽性表達(dá)率呈現(xiàn)出上升趨勢，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果提示，HIF-α在正常的宮頸組織中并不存在，但在宮頸內(nèi)瘤變及宮頸癌組織中已經(jīng)存在了一定的升高跡象，這就說明了HIF-α可能對腫瘤細(xì)胞的生長產(chǎn)生促進(jìn)作用[7]。

3.2 p53在實體瘤中的表達(dá)水平及意義

p53作為一種存在于人體當(dāng)中的抑癌基因，在正常情況下，野生型的p53基因具有較為強(qiáng)大的抑癌活性，對細(xì)胞周期起到了一定的調(diào)控作用，但當(dāng)細(xì)胞DNA受到損害時，p53蛋白則會對P21基因的表達(dá)產(chǎn)生刺激激活的作用，同時能夠與細(xì)胞周期蛋白相互結(jié)合而形成復(fù)合型結(jié)構(gòu)，最終導(dǎo)致細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1階段，引起其死亡，避免其進(jìn)展成為腫瘤細(xì)胞[8-9]。但發(fā)生了突變的p53基因則能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生與發(fā)展，甚至直接對細(xì)胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)化作用，在本次研究中所采用的免疫組化檢測方法對p53基因的突變陽性率進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)宮頸癌組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組分別與健康對照組相比p53的陽性表達(dá)率較高，宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組與健康對照組相比p53的陽性表達(dá)率較高，健康對照組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組、宮頸癌組組織中p53的陽性表達(dá)率呈現(xiàn)出上升趨勢，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果提示，p53的異常表達(dá)能夠促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，加重病情，在臨床診斷及治療過程中可起到一定的監(jiān)測作用[10]。

3.3 Beclin1蛋白在實體瘤中的表達(dá)水平及意義

Beclin1蛋白在正常情況下具有調(diào)節(jié)細(xì)胞分化及促進(jìn)細(xì)胞生長的作用，早有研究資料顯示，Beclin1蛋白與胃癌、肺癌及肝癌等不同類型惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有密切的相關(guān)性，另外，報道中還指出，Beclin1蛋白的表達(dá)下調(diào)可能說明宮頸組織即將開始發(fā)生進(jìn)一步的惡性病變，對其水平進(jìn)行研究具有一定的應(yīng)用價值[11-12]。本次研究結(jié)果顯示，宮頸癌組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組分別與健康對照組相比Beclin1的陽性表達(dá)率較低，宮頸癌組與宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組相比Beclin1的陽性表達(dá)率較低，健康對照組、宮頸上皮內(nèi)瘤樣變組、宮頸癌組組織中Beclin1的陽性表達(dá)率呈現(xiàn)出降低趨勢，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其提示Beclin1蛋白可能與腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展惡化以及預(yù)后具有一定的相關(guān)性，當(dāng)其水平開始下調(diào)時，能夠?qū)m頸癌的發(fā)生發(fā)展起到一定的促進(jìn)作用，值得引起足夠的重視。進(jìn)一步分析宮頸癌患者宮頸組織中HIF-α、p53及Beclin1的表達(dá)水平的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，隨著宮頸癌病情的發(fā)展，患者宮頸組織中HIF-α、p53表達(dá)水平明顯增高，Beclin1的表達(dá)水平則明顯降低，Person相關(guān)分析結(jié)果顯示，宮頸癌患者宮頸組織中HIF-α、p53表達(dá)水平呈明顯的正相關(guān)，HIF-α、p53水平與Beclin1水平則呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，提示HIF-α、p53及Beclin1的表達(dá)水平與宮頸癌的發(fā)展具有一定的關(guān)系，在宮頸癌發(fā)生發(fā)展的過程中，HIF-α、p53表達(dá)水平與疾病發(fā)展呈明顯的正相關(guān)，Beclin1水平則與疾病發(fā)展呈負(fù)相關(guān)。

綜上所述，HIF-α、p53及Beclin1的表達(dá)水平與宮頸癌的發(fā)展具有一定的關(guān)系，HIF-α、p53表達(dá)水平與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展呈明顯的正相關(guān)，Beclin1水平則與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展呈負(fù)相關(guān)，通過對三者的指標(biāo)水平進(jìn)行檢測，能夠幫助判斷。

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