抑制番茄青枯病拮抗菌株的田間生防效果

王麗麗，李 洋，林樂志

(寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 寧波 315040)

番茄青枯病，是由茄科勞爾氏菌(Ralstoniasolanacearum)引起的一種毀滅性的土傳細(xì)菌病害，是番茄上常見的維管束系統(tǒng)性病害之一，保護(hù)地、露地均可發(fā)生。南方及多雨年份發(fā)生普遍而嚴(yán)重。發(fā)病嚴(yán)重時造成植株整株死亡，導(dǎo)致嚴(yán)重減產(chǎn)甚至絕收。

青枯病菌在環(huán)境中變異較多，傳播途徑多樣，寄主范圍廣，對其防治比較困難[1-2]，目前市場上還未有針對青枯病的專用特效藥。通過生物防治菌對其進(jìn)行防治不失為一條既有效又環(huán)保的途徑，近年來，利用無致病力青枯菌、假單胞菌、芽孢桿菌、鏈霉菌、真菌、噬菌體等來防治番茄青枯病受到了廣大學(xué)者的關(guān)注。芽孢桿菌是多種植物病原菌的拮抗菌，有預(yù)防和控制植物病害的功效，能產(chǎn)生具有抗逆性的內(nèi)生孢子(芽孢)，能耐鹽、耐酸、耐高溫，且易于保存和運輸[3-4]，因此利用芽孢桿菌防治番茄青枯病具有較明顯的優(yōu)勢。

本試驗通過實驗室分離篩選得到的2株拮抗番茄青枯病病原菌的芽孢桿菌菌株進(jìn)行田間應(yīng)用，調(diào)查菌株對番茄青枯病的田間防控效果，從而明確菌株防控番茄青枯病的可能性。

1 材料與方法

1.1 材料

田間試驗在寧波市海曙區(qū)古林鎮(zhèn)天勝四不用農(nóng)場選擇病情大致相同的區(qū)域進(jìn)行。

試驗采用的拮抗菌采用實驗室前期分離篩選得到的W118(解淀粉芽孢桿菌)和W12(枯草芽孢桿菌)，菌株發(fā)酵液含菌量為1億個·mL-1以上。其中，W118經(jīng)中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏(CGMCC No.12200)。參試番茄采用當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)品種申粉8號。

1.2 處理設(shè)計

根據(jù)前期預(yù)試驗，混合菌株防控效果較單一的好，因此本試驗設(shè)置2個處理，分別為混合菌株發(fā)酵液處理(W12+W118)和清水對照(CK)，重復(fù)3次。

田間觀察到番茄植株有青枯病發(fā)生時開始施用混合菌株發(fā)酵液，每隔7 d施用1次，每株番茄苗澆灌量為10 mL，對照施用等量清水，共計3次。

1.3 調(diào)查項目及方法

病情指數(shù)及防控效果調(diào)查。每次灌菌后統(tǒng)計各處理的病情指數(shù)和防控效果。番茄青枯病的分級標(biāo)準(zhǔn)為[5]：0級，植株正常；1級，植株葉片萎蔫程度不超過25%；2級，植株葉片萎蔫程度超過25%且不超過50%；3級，植株葉片萎蔫程度超過50%且不超過75%；4級，植株葉片萎蔫程度超過75%。

病情指數(shù)=Σ(病級數(shù)×該病級植株數(shù))/(最大病級數(shù)×植株總株數(shù))×100；

防控效果/%=(對照組病情指數(shù)-處理組病情指數(shù))/對照病情指數(shù)×100。

根際土壤微生物數(shù)計數(shù)。細(xì)菌計數(shù)采用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，放線菌計數(shù)采用高氏I號合成培養(yǎng)基，真菌計數(shù)采用馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基，病原菌計數(shù)采用SMSA(semi-selectivemedium, South Africa)培養(yǎng)基。相關(guān)培養(yǎng)基配方如下：

牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：牛肉膏3.0 g，蛋白胨10.0 g，NaCl 5.0 g，瓊脂15～25 g，水1 000 mL，pH值7.4～7.6。

高氏I號合成培養(yǎng)基：可溶性淀粉20 g，KNO31.0 g，NaCl 0.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO40.5 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01 g，瓊脂粉10 g，蒸餾水1 000 mL，pH值7.2～7.4。配置時，先用少量冷水將淀粉調(diào)成糊狀，倒入煮沸的水中，邊攪拌邊加入其他成分，溶化后，補(bǔ)足水分至1 L。

馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基：葡萄糖10 g，蛋白胨5 g，KH2PO41 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，1/3 000孟加拉紅100 mL，瓊脂25 g，pH值自然，蒸餾水800 mL，115 ℃滅菌30 min，臨用前加入硫酸鏈霉素0.03 g。

SMSA培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，甘油5 mL，酪蛋白氨基酸1 g，瓊脂粉15 g，蒸餾水1 000 mL。培養(yǎng)基冷卻至50 ℃時每250 mL加入1%的多粘菌素B 2.5 mL，1%的結(jié)晶紫125 μm，1%的四氮唑鹽1.25 mL，1%的桿菌肽625 μmol，0.1%的青霉素125 μmol，1%的氯霉素125 μmol，1%的放線菌酮2.5 mL。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用DPS 7.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析

2 結(jié)果與分析

2.1 對番茄青枯病的田間防控效果

從表1可知，W12和W118的混合菌株能防治田間番茄青枯病，1次灌菌后的防效為 25.6%，3次灌菌后的防效達(dá) 43.0%。

表1 拮抗菌株W12和W118混合發(fā)酵液對 番茄青枯病的田間防控效果

2.2 對植株根際土壤中可培養(yǎng)微生物數(shù)量的影響

由表2可知，施用混合菌株菌液對番茄植株根際土壤中可培養(yǎng)微生物有一定的影響，其中細(xì)菌、放線菌都有一定程度的增加，真菌、病原菌有一定程度的減少，使得土壤中微生物向著有益的方向發(fā)展[6]，說明施用拮抗菌株對番茄植株根際微生物群落有改善作用。

表2 拮抗菌株W12和W118混合發(fā)酵液對 番茄植株根際土壤微生物數(shù)量的影響

3 小結(jié)與討論

試驗結(jié)果表明，高效拮抗菌(W12+W118)經(jīng)發(fā)酵混合后用于田間，灌菌3次后的防治效果達(dá)到43.0%，說明施用拮抗菌能有效地防治田間番茄青枯病的發(fā)生。

施用生防菌不但可以影響番茄植株根際土壤中的病原菌數(shù)量，還可以調(diào)節(jié)土壤中其他微生物的數(shù)量結(jié)構(gòu)。施用拮抗菌后，細(xì)菌、放線菌數(shù)量均較對照增加，病原菌、真菌數(shù)量較對照減少，說明根際土壤微生物區(qū)系向著更健康的方向發(fā)展。但是，通過調(diào)節(jié)土壤微生物生態(tài)來抑制土傳病害的方式，需要較長的時間，因此如要更好地防治青枯病，可能需要連續(xù)幾年施用拮抗菌，最終才使得土壤能夠通過自身的生態(tài)調(diào)節(jié)，達(dá)到抑制病害發(fā)生的目的[7]。

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