手足口病患兒體內(nèi)免疫球蛋白、補(bǔ)體、C反應(yīng)蛋白及刺激分析CD80、CD86水平的臨床意義及其與丙種球蛋白治療療效的關(guān)系

覃藝+鄧燕藝+賴昌生

摘 要：目的 探討手足口病患兒血清免疫球蛋白、C反應(yīng)蛋白、補(bǔ)體C3、C4、刺激分子CD80、CD86水平的臨床意義，及其與丙種球蛋白治療療效的關(guān)系。方法 觀察對(duì)象為我院兒科2015年7月～11月收治的60例重癥HFMD患兒及60例非重癥HFMD患兒，同時(shí)收集30例正常兒童血清樣本作為對(duì)照組。比較各組患者血清免疫球蛋白、CRP、補(bǔ)體C3、C4、刺激分子CD80、CD86水平的差異與患兒病情嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。另將重癥HFMD患兒分為A、B兩個(gè)亞組，A組進(jìn)行常規(guī)營(yíng)養(yǎng)支持對(duì)癥治療，B組在A組的治療基礎(chǔ)上聯(lián)用人丙種免疫球蛋白治療，比較A、B兩組患兒病情的進(jìn)展情況及與各指標(biāo)之間的關(guān)系。結(jié)果 治療前，重癥HFMD患兒血清IgA、IgM、IgG及補(bǔ)體C3、C4顯著低于普通組及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），同時(shí)普通組IgA、IgM、IgG及補(bǔ)體C3顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），普通組補(bǔ)體C4與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；重癥HFMD患兒血清CRP水平明顯高于普通組及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。重癥組患兒外周血CD80/CD86顯著高于普通組及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），普通組CD80/CD86顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療前，A、B組患兒各指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。治療后，A、B兩組各指標(biāo)相比治療前均有顯著性差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。A、B兩組補(bǔ)體C3、C4水平未出現(xiàn)顯著差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），A組CRP水平顯著高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。A組外周血CD80/CD86顯著高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 HFMD患兒血清免疫球蛋白、補(bǔ)體C3及C4水平比相比正常人群顯著下調(diào)，且隨著病情的加重而降低；CRP及CD80/CD86相比正常人群顯著上調(diào)，且隨著病情的加重而升高，提示這些指標(biāo)與患兒病情進(jìn)展密切相關(guān)。聯(lián)合應(yīng)用丙種球蛋白治療能夠在對(duì)癥支持治療的基礎(chǔ)上加快患兒康復(fù)進(jìn)程。

關(guān)鍵詞：手足口?。幻庖咔虻鞍?；補(bǔ)體；C反應(yīng)蛋白；CD80/CD86；丙種球蛋白

中圖分類號(hào)：R725.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.02.022

文章編號(hào)：1006-1959（2018）02-0063-05

Abstract：Objective To investigate the clinical significance of serum immunoglobulin，C-reactive protein，complement C3 and C4，stimulatory molecules CD80 and CD86 in children with hand-foot-mouth disease and its relationship with the therapeutic effect of gamma globulin.Methods The subjects were 60 children with severe HFMD and 60 children with non-severe HFMD admitted to our pediatric department from July 2015 to November 2015.Thirty normal children's serum samples were collected as control group.The relationship between serum immunoglobulin，CRP， complement C3 and C4，CD80 and CD86 levels in patients and the severity of illness in children were compared.Another severe HFMD children were divided into A，B two subgroups，Group A was treated with conventional nutritional support symptomatic treatment.Group B was treated with Group A immunoglobulin on the basis of group A treatment.The progress of the disease in group A and group B was compared with that of each index.Results Before treatment，serum IgA，IgM，IgG and complement C3，C4 in children with severe HFMD were significantly lower than those in normal group and control group，The difference was statistically significant（P<0.05）.At the same time，the levels of IgA，IgM，IgG and complement C3 in common group were significantly lower than those in control group，The difference was statistically significant（P<0.05），the normal group of complement C4 and the control group was no significant difference（P>0.05）；severe HFMD serum CRP levels were significantly higher than the normal group and the control group，the difference was statistically significant（P<0.05）.The levels of CD80/CD86 in peripheral blood of children with severe disease were significantly higher than those of control group and normal group（P<0.05），The common group of CD80/CD86 was significantly higher than the control group，the difference was statistically significant（P<0.05）.Before treatment，there was no significant difference in each index between A and B groups （P>0.05）.After treatment，the indexes of A and B groups showed significant difference compared with before treatment，the difference was statistically significant（P<0.05）.A，B two groups of complement C3，C4 levels were not significantly different，the difference was not statistically significant（P>0.05），the CRP level of A group was significantly higher than that of B group，the difference was statistically significant（P<0.05）.A group of peripheral blood CD80/CD86 was significantly higher than the B group，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion Serum immunoglobulin，complement C3 and C4 levels in children with HFMD were significantly lower than those in the normal population，and decreased with the progression of the disease；CRP and CD80/CD86 were significantly up-regulated compared with the normal population，and with the progression of the disease high，suggesting that these indicators are closely related with the progress of children's condition.The combination of gamma globulin therapy can speed up the rehabilitation process in children based on symptomatic and supportive treatment.endprint

Key words：Hand-foot-mouth disease；Immunoglobulin；Complement；C-reactive protein；CD80/CD86；Gamma globulin

手足口?。╤and-foot-mouth disease，HFMD）是由柯薩奇病毒A組16型（CoxA16）和腸道病毒71型（EV71）等腸道病毒引起的急性傳染病，好發(fā)于學(xué)齡前兒童。多數(shù)患兒癥狀較輕，主要臨床癥狀包括口腔腭咽等粘膜組織出現(xiàn)疼痛性水泡，四肢及臀部的皮疹、皰疹，同時(shí)伴有發(fā)熱、納差、咳嗽等消化呼吸系統(tǒng)癥狀，少數(shù)患兒合并心肌炎、病毒性腦膜炎、肺水腫等嚴(yán)重并發(fā)癥，可致患兒死亡。對(duì)于重癥手足口病，早期診斷并盡早對(duì)癥治療是臨床工作的關(guān)鍵，有許多研究顯示機(jī)體免疫狀況與該疾病病情進(jìn)展密切相關(guān)[1-2]。本研究擬通過觀察120例患兒及30例正常兒童的血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）、補(bǔ)體、C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）及刺激分子CD80、CD86水平，探究相關(guān)指標(biāo)與病情嚴(yán)重程度之間的關(guān)系，同時(shí)探究重癥患者聯(lián)合使用丙種球蛋白對(duì)相關(guān)指標(biāo)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 觀察對(duì)象為我院兒科2015年7月～11月收治的60例重癥HFMD患兒及60例非重癥HFMD患兒，同時(shí)收集30例正常兒童血清樣本作為對(duì)照組。重癥HFMD患兒60例，男性34例，女性26例，年齡6個(gè)月～4歲，平均年齡（2.2±0.6）歲；其中A組患兒30例，男性17例，女性13例，年齡6個(gè)月～4歲，平均年齡（2.1±0.7）歲；B組患兒30例，男性17例，女性13例，年齡8個(gè)月～4歲，平均年齡（2.4±0.9）歲。非重癥HFMD患兒60例，男性37例，女性23例，年齡7個(gè)月～5歲，平均年齡（3.2±1.2）歲。正常兒童30例，男性15例，女性15例，年齡10個(gè)月～7歲，平均年齡（3.2±1.4）歲。各組患兒男女比例、年齡之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合《手足口病診療指南》（2013年版）診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患兒年齡為6個(gè)月～9歲；③所有患兒家屬均知情此次研究并自愿參與，同時(shí)取得家屬同意并在知情同意書上簽字。排除標(biāo)準(zhǔn)為：①排除合并過敏、麻疹、水痘、風(fēng)疹、帶狀皰疹、等出疹性疾??；②排除合并其他心肝腎造血系統(tǒng)疾病；③排除免疫缺陷疾病。

1.3對(duì)象分組 ①普通組患兒僅口腔腭咽等粘膜組織出現(xiàn)疼痛性水泡，手足及臀部的皮疹、皰疹，可伴發(fā)熱、納差、咳嗽等癥狀；②重癥組患兒在上述癥狀出現(xiàn)的同時(shí)，出現(xiàn)體溫持續(xù)增高、精神萎靡、嗜睡、頭痛頭暈、惡心嘔吐；肌張力增高；腦膜刺激征；心悸、心絞痛；呼吸困難等；③對(duì)照組為常規(guī)體檢未出現(xiàn)異常的兒童。

1.4觀察指標(biāo) 患兒入院后2 h內(nèi)檢查項(xiàng)目包括血清免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）、C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein ，CRP）、補(bǔ)體C3、C4、刺激分子CD80、CD86，出院時(shí)或1周后復(fù)查各項(xiàng)指標(biāo)。

1.5方法

1.5.1檢測(cè)方法 取患者入院后2 h內(nèi)4 ml靜脈血，置于干燥離心管中進(jìn)行離心，轉(zhuǎn)速3000 r/min，時(shí)長(zhǎng)10 min，分離上層血清。免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）采用免疫散射比濁法檢測(cè)，所用儀器為貝克曼Immage 800型特種蛋白儀，檢測(cè)試劑為英國(guó)The Binding Site公司生產(chǎn)。CRP采用膠乳免疫比濁法，檢測(cè)試劑為elabscience公司生產(chǎn)補(bǔ)體C3、C4采用散射比濁法，檢測(cè)試劑為四川邁克公司生產(chǎn)，均嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。對(duì)患兒清晨空腹采集2 ml靜脈血，進(jìn)行外周血CD80、CD86細(xì)胞檢測(cè)，EDTA-K2抗凝。24 h內(nèi)采用細(xì)胞流式儀CytoFLEX檢測(cè)CD80、CD86細(xì)胞的陽(yáng)性率，通過（%）表示，通過BD DIVA軟件進(jìn)行分析。

1.5.2治療方法 普通組及重癥組患者均對(duì)癥營(yíng)養(yǎng)支持治療，A組病毒唑靜滴，劑量10～15 mg/（kg·d），同時(shí)增加5%葡萄糖、小兒氨基酸、小兒電解質(zhì)、甲基強(qiáng)的松龍1～2 mg/（kg·d），甘露醇等對(duì)癥治療；B組在A組的治療基礎(chǔ)上聯(lián)用丙種球蛋白。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，并使用方差分析比較各組檢查結(jié)果差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（α=0.05），SNK法進(jìn)行組間比較。

2結(jié)果

2.1治療前患兒血清免疫球蛋白水平差異 比較三組患兒入院時(shí)血清免疫球蛋白水平差異，方差分析比較各組之間差異。治療前重癥組患兒血清IgA、IgG、IgM水平低于普通組及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），普通組血清IgA、IgG、IgM水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2治療前后患兒血清補(bǔ)體C3、C4水平差異 比較三組患兒入院時(shí)補(bǔ)體C3、C4水平差異，方差分析比較各組之間差異。治療前重癥組患兒血清補(bǔ)體C3、C4水平顯著低于普通組及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），普通組血清補(bǔ)體C3水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。普通組補(bǔ)體C4與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3治療前后患兒CRP水平差異 比較三組患兒入院時(shí)CRP水平差異，方差分析比較各組之間差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療前重癥組患兒血清CRP水平明顯高于普通組及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），普通組CRP水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.4治療前后患兒刺激分子CD80、CD86水平差異顯著 比較三組患兒入院時(shí)刺激分子CD80、CD86水平差異，方差分析比較各組之間差異。重癥組患兒外周血CD80、CD86顯著高于普通組及對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），普通組CD80、CD86顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表4。endprint

2.5治療前后重癥患兒A、B兩組各指標(biāo)差異 方差分析比較A、B兩組患兒治療前各指標(biāo)水平的差異，治療前A、B兩組各指標(biāo)無顯著性差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表5。

2.6治療前后重癥患兒A、B兩組各指標(biāo)差異 方差分析比較A、B兩組患兒治療后各指標(biāo)水平的差異，采取治療后3 d，A組補(bǔ)體C3水平顯著低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），A、B兩組補(bǔ)體C4水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。A組CRP水平顯著高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。A組外周血CD80、CD86顯著高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表6。

3討論

手足口病是由腸道病毒引起的一種常見的傳染病。病毒大多通過呼吸道及消化道感染機(jī)體，機(jī)體被病原菌感染后會(huì)發(fā)生炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為多種炎癥因子的瀑布式釋放并通過炎癥反應(yīng)來造成多種臟器功能的損傷[3]，從而出現(xiàn)多種并發(fā)癥而發(fā)展為重癥病例。實(shí)踐證明[4]，在重癥手足口病的患者中，早期及時(shí)應(yīng)用大劑量丙種球蛋白能成功地阻止病情的進(jìn)一步惡化，有效改善疾病的預(yù)后及減少死亡率。

手足口病患者均存在一定程度的體液免疫紊亂，體液免疫在抵抗腸道病毒感染的過程中發(fā)揮著重要的監(jiān)視及預(yù)防病毒感染的作用，B淋巴細(xì)胞分泌IgA、IgG、IgM，補(bǔ)體活性升高，共同發(fā)揮免疫應(yīng)答功效[5-6]。IgG是人體血清免疫球蛋白的主要成分，在初級(jí)免疫應(yīng)答中最持久最重要，是抗感染過程中的主力軍。它能夠促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞的吞噬作用，與病毒蛋白結(jié)合使病毒失去侵入宿主細(xì)胞的能力[7-8]。IgM是機(jī)體體液免疫應(yīng)答最早產(chǎn)生的免疫球蛋白，也是通過與病毒蛋白結(jié)合產(chǎn)生凝集作用而對(duì)抗病毒，在機(jī)體早期防御中起著重要作用[9-10]。血清中IgA沒有直接結(jié)合病毒蛋白的能力，但其可激活抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用，介導(dǎo)NK細(xì)胞釋放穿孔素及顆粒酶等，使病毒感染的細(xì)胞的細(xì)胞膜穿孔溶解[11]。本次研究中發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組、普通組、重癥組患者IgG、IgA、IgM水平呈梯度下降的趨勢(shì)，且各組兩兩比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此現(xiàn)象的發(fā)生可能是由于腸道病毒侵入機(jī)體時(shí)間還較短，并未引起機(jī)體IgG、IgA的顯著表達(dá)，而IgM作為早期體液免疫應(yīng)答的產(chǎn)物，產(chǎn)量并不高，加上病毒繁殖過快，血清IgG、IgA、IgM產(chǎn)出遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于消耗，導(dǎo)致患兒血清IgG、IgA、IgM水平的降低。

補(bǔ)體系統(tǒng)在體內(nèi)可輔助特異性抗體增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬作用，另外其能夠增強(qiáng)血管通透性，促進(jìn)免疫細(xì)胞的趨化作用，并能夠中和病毒、溶解被病毒感染的細(xì)胞、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。是體液免疫的重要組成部分[12]。本次研究中發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)體的含量在對(duì)照組、普通組、重癥組患者中也出現(xiàn)一定的梯度降低，結(jié)合IgG、IgA、IgM水平的變化，提示患兒體液免疫應(yīng)答存在異常。

CRP是肝細(xì)胞合成的一類非特異性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，一般情況下不升高，但在有炎性反應(yīng)時(shí)會(huì)迅速增高與體內(nèi)炎癥反應(yīng)的程度具有良好一致性[13]。在細(xì)菌感染所致的急性炎癥中反應(yīng)高度靈敏，其可以引發(fā)對(duì)侵入細(xì)胞的免疫調(diào)理作用和吞噬作用，而表現(xiàn)出炎癥反應(yīng)，是常用的炎性標(biāo)志物[14]。本研究中，CRP隨患兒病情嚴(yán)重程度而升高，檢測(cè)CRP對(duì)患兒病情的進(jìn)展有輔助價(jià)值，同時(shí)提示重型手足口病的患兒更易在病毒感染的基礎(chǔ)上繼發(fā)細(xì)菌感染。

CD80、CD86為抗原遞呈細(xì)胞上重要的協(xié)同刺激分子，其能夠增強(qiáng)抗原遞呈細(xì)胞的功能，誘導(dǎo)Th0細(xì)胞分化為功能細(xì)胞，增強(qiáng)患兒的免疫能力[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，重癥組患兒CD80、CD86的表達(dá)明顯高于其他兩組，可能是由于過度的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致患兒機(jī)體CD80、CD86過度表達(dá)，提示患兒機(jī)體處于體液免疫激活的過程中。

有報(bào)道顯示，在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用丙種球蛋白治療可加快手足口病患兒的康復(fù)進(jìn)程，減少并發(fā)癥發(fā)生的幾率[16]，與本次研究結(jié)果基本符合，聯(lián)合應(yīng)用丙種球蛋白治療可直接升高重癥患兒體內(nèi)的免疫球蛋白水平，抑制病毒的增殖，更迅速有效地控制感染，使補(bǔ)體水平顯著回升，CRP及CD80、CD86水平顯著降低，減輕患兒的炎癥反應(yīng)，有利于患兒的病情及預(yù)后。

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收稿日期：2017-6-24；修回日期：2017-7-26

編輯/李樺e(cuò)ndprint