DNA混合基因分型與圖像偵查的結(jié)合應(yīng)用

鄧少云，王瑞娟，王懷玉

(重慶市公安局大渡口區(qū)分局物證鑒定所，重慶400084)

法醫(yī)DNA檢驗(yàn)技術(shù)在案件偵破過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用，但很多案件的檢材DNA檢驗(yàn)結(jié)果為混合基因型?；旌蠘颖臼呛袃蓚€(gè)或兩個(gè)以上供體成分的檢材，常會(huì)給案件的快速偵破造成困難。研究發(fā)現(xiàn)，一些混合樣本可以通過(guò)拆分得到嫌疑人的DNA分型。但有些混合樣本可能因?yàn)槟０辶窟^(guò)少等原因，會(huì)發(fā)生等位基因漏檢或出現(xiàn)非特異性帶的現(xiàn)象[1]，此時(shí)若直接對(duì)混合基因分型拆分，可能得不到嫌疑人的基因分型，甚至?xí)o偵查方向造成誤導(dǎo)。本文報(bào)道一起混合基因分型直接入庫(kù)比對(duì)與圖像偵查相結(jié)合而偵破的成功案例。

1 案件簡(jiǎn)介

2015年8月19日，某出租車(chē)司機(jī)承載兩名乘客，遭其中一名脅迫致錢(qián)財(cái)被搶。技術(shù)人員提取了相關(guān)檢材。偵查員通過(guò)道路監(jiān)控，也發(fā)現(xiàn)了兩名嫌疑人的圖像，但其逃跑路線監(jiān)控中斷，為案件偵破帶來(lái)困難。

2 材料和方法

2.1 檢材

受害人頸部擦拭拭子、出租車(chē)車(chē)鑰匙、受害人駕駛的出租車(chē)副駕駛座位靠背擦拭拭子、左右后側(cè)車(chē)門(mén)內(nèi)把手擦拭拭子、右后前側(cè)車(chē)門(mén)外把手擦拭拭子、右前側(cè)車(chē)門(mén)內(nèi)把手擦拭拭子以及受害人血樣，依次編號(hào)為 1、2 、3、4、5、6、7、8、9 號(hào)檢材。

2.2 方法

2.2.1 主要儀器和試劑

儀器Veriti PCR擴(kuò)增儀、3500遺傳分析儀與試劑AmpFISTR Identi fi ler?Plus試劑盒均為美國(guó)Applied Biosystems公司產(chǎn)品。

2.2.2DNA模板的提取

使用Chelex法提取受害人血樣（9號(hào)）DNA，使用磁珠法提取其余檢材（1～8號(hào)）DNA。

2.2.3 模板DNA 擴(kuò)增

提取的模板DNA，分別以10 μ L和25 μ L體系使用Identi fi ler Plus試劑盒經(jīng)Veriti PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增，反應(yīng)條件參照說(shuō)明書(shū)。

2.2.4 分型檢測(cè)

擴(kuò)增產(chǎn)物使用3500遺傳分析儀電泳，以GeneMapper?ID- X V1.4軟件分析基因分型。

3 結(jié)果

檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，1～8號(hào)檢材均為混合基因分型，9號(hào)檢材得到受害人的D8S1179等16個(gè)STR基因座基因型。對(duì)1～8號(hào)檢材混合STR圖譜分析后發(fā)現(xiàn)，1～7號(hào)檢材大部分基因座出現(xiàn)5個(gè)以上等位基因峰，說(shuō)明1～7號(hào)檢材可能有3個(gè)或以上供體，故其利用價(jià)值較小，而通過(guò)25 μL體系擴(kuò)增出的8號(hào)檢材混合基因分型有15個(gè)基因座（除D18S51基因座為5個(gè)等位基因峰）為2～4個(gè)等位基因峰（圖1），推測(cè)8號(hào)檢材混合基因分型的供體可能為2個(gè)[2]。

圖1 8號(hào)檢材常染色體STR基因座分型圖譜Fig.1 Genotyping pro fi le of autosomal STRs from No. 8 tested sample

將8號(hào)檢材混合基因分型與受害人的DNA基因座基因型比對(duì)（表1），以人工拆分方法無(wú)法得到有效的基因座基因型。將8號(hào)檢材混合基因型直接導(dǎo)入本市DNA數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行自動(dòng)比對(duì)，結(jié)果有100個(gè)以上的比中數(shù)據(jù)項(xiàng)。其中，匹配度100 %的比中男性DNA樣本2個(gè)，匹配度在85 %～100 %之間的男性DNA樣本比中37個(gè)，核實(shí)此37個(gè)DNA樣本所對(duì)應(yīng)的人員身份信息，然后與偵查人員提供的監(jiān)控視頻嫌疑人圖像一一比對(duì)，發(fā)現(xiàn)匹配度為92.3 %的某DNA樣本所對(duì)應(yīng)的人員與監(jiān)控中1名嫌疑人疑似為同一人。抓獲該嫌疑人，其對(duì)犯罪事實(shí)供認(rèn)不諱。與數(shù)據(jù)庫(kù)匹配度為92.3 %的嫌疑人的基因分型如表1。

表1 STR基因座基因分型Table 1 Database-matched STR genotypes from the No. 8 sample

續(xù)表1

4 討論

混合斑的檢驗(yàn)和應(yīng)用一直是法醫(yī)DNA分析的難點(diǎn)，但有時(shí)混合斑DNA的檢驗(yàn)往往又能為案件偵破提供線索?；旌匣蚍中偷膽?yīng)用，有一些人工或軟件拆分方法，但一般是在已知樣本或峰高及峰面積的基礎(chǔ)上進(jìn)行[3-4]。本案中混合基因分型因不含已知樣本（受害人）基因分型，并且圖譜中部分峰值較低，難以拆分。因此，技術(shù)人員將本案確定的混合基因分型直接入庫(kù)比對(duì)。

利用混合基因型入庫(kù)自動(dòng)比對(duì)，首先，需要確認(rèn)分型結(jié)果是否為兩人份混合基因分型；其次，在擁有案件其他線索的基礎(chǔ)上對(duì)入庫(kù)比對(duì)結(jié)果從包含匹配度由高到低篩查。但是，在比對(duì)結(jié)果中，包含匹配度為100 %的樣本卻不一定就是嫌疑對(duì)象，比如本案中包含匹配度為100 %的2個(gè)樣本就被排除。因?yàn)?，第一，目前DNA檢驗(yàn)所用試劑盒可能與建數(shù)據(jù)庫(kù)時(shí)所用試劑盒不同，像本案檢材的DNA檢驗(yàn)結(jié)果中TH01、D19S433和TPOX基因座就不包含在建數(shù)據(jù)庫(kù)所用的試劑盒中，而建數(shù)據(jù)庫(kù)所用試劑盒含有的D6S1043和Penta E基因座在本案檢材DNA檢驗(yàn)結(jié)果中也未包含；第二，混合斑DNA檢驗(yàn)時(shí)，可能因?yàn)槟０辶窟^(guò)少等原因，會(huì)發(fā)生等位基因漏檢或出現(xiàn)非特異性帶的現(xiàn)象，比如本案中8號(hào)檢材混合基因型中的D2S1338（18/19/21）基因座，其中就未出現(xiàn)嫌疑人的24號(hào)等位基因。所以，一定要與案件其他線索結(jié)合使用。本案就是技術(shù)人員利用偵查人員提供的監(jiān)控中嫌疑人圖像與8號(hào)混合基因型入庫(kù)比對(duì)結(jié)果相結(jié)合使用而最終得以成功破獲。

此方法的缺點(diǎn)，一是工作量較大，由于混合基因型入庫(kù)自動(dòng)比對(duì)時(shí)容易出現(xiàn)較多隨機(jī)無(wú)效比中的情況[5-6]，如本案中8號(hào)混合基因分型比中數(shù)據(jù)庫(kù)中匹配度為85 %及以上的樣本就達(dá)37個(gè)，匹配度在85 %以下的樣本將會(huì)更多，若都人工逐一排除，其工作量必然非常大；二是混合基因分型的結(jié)果不一定完全準(zhǔn)確，由于在判斷或分析時(shí)，可能會(huì)受到影子帶、譜帶丟失等諸多因素干擾，導(dǎo)致混合物證的數(shù)據(jù)不一定準(zhǔn)確，因此使用時(shí)還需謹(jǐn)慎。本案例混合基因分型與圖像偵查結(jié)合的成功應(yīng)用，說(shuō)明對(duì)無(wú)法通過(guò)人工拆分的混合斑分型結(jié)果，可將其直接入庫(kù)比對(duì)作嫌疑人篩查，進(jìn)而為案件偵破提供線索，但前提是必須與案件其他線索或證據(jù)相互結(jié)合使用。

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