豬瘟病毒的四種檢測方法比較

(汕頭市動物衛(wèi)生監(jiān)督所, 廣東 汕頭 515041)

1 豬瘟及四種檢測方法

豬瘟是一種危害性較大的禽畜疾病，一般是因為豬瘟病毒而引發(fā)，當(dāng)前世界動物衛(wèi)生組織將豬瘟列于A類疫病，同時也是當(dāng)前我國要重點防控的動物疫病之一。但是因為豬瘟病毒的毒株不同而且毒株的毒性程度不同，所以在臨床的表現(xiàn)以及剖檢的病理上，也存在著區(qū)別。因此對于豬瘟及豬瘟病毒要采用合理的檢測方式進行具體的檢測，實現(xiàn)科學(xué)合理的豬瘟病癥確診，開展合理有效的防控措施。目前針對豬瘟開展的檢測方法主要有4種：①對病毒進行分離的鑒定處理，這種也就是將病毒放置于細胞上進行增殖處理后，借助熒光抗體方式在這些細胞培養(yǎng)物上面進行病毒的檢測。②熒光抗體法，借助豬瘟病毒本身的特異性情況，通過熒光抗體法在組織器官里面進行病毒的檢測。③酶聯(lián)免疫吸附試驗，在豬組織及血液里進行豬瘟病毒粒子的檢測。④反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),對病料里面的病毒核酸進行檢測。

2 豬瘟4種檢測方法對比分析

2.1 豬瘟病毒分離鑒定處理

依照常規(guī)的方法進行PK-15細胞的培養(yǎng)處理，并且細胞培養(yǎng)液是MEM的培養(yǎng)基。之后，從豬的脾臟里面提取一小塊組織剪碎以后放置到乳缽里面進行研磨的處理，并且在里面摻入了5倍體積的PBS內(nèi)容將其制成乳液，之后加入離心管里面進行離心處理10 min，然后對其上清及濾膜除菌處理之后，獲取到無菌浸出液。并且在蓋玻片以及熒光抗體染色處理之后，等待自然干燥以后對其進行培育和沖洗處理，將其封裝以后放置于顯微鏡之下進行觀察，如果細胞里面呈現(xiàn)亮綠色的熒光斑，則屬于陽性病毒，而如果沒有這些光斑，那么就屬于陰性的病毒。

2.2 豬瘟病毒熒光抗體檢測

把無菌采取出來的感染豬瘟病毒的淋巴結(jié)以及脾臟等組織，采用消毒過的剪刀進行剪取處理，從而提取出一小塊的組織將其放置于無劃痕的載玻片上面進行觸壓處理，在室溫環(huán)境下等待干燥之后進行多抗和沖洗及封裝處理，并且在顯微鏡下進行觀察，呈現(xiàn)光斑則為陽，沒有光斑則為陰性。

2.3 豬瘟病毒的酶聯(lián)免疫吸附試驗

這種檢測方法主要是將組織里面的細胞提取液進行化學(xué)處理之后，在一定的反應(yīng)條件之下，將這些產(chǎn)物稀釋出來的物品進行配對及循環(huán)分析，而且在72℃條件下，進行10 min的延伸處理，之后將其產(chǎn)物取出來，在瓊脂糖凝膠里面進行電泳處理，并借助這種凝膠成像的結(jié)果進行具體的病毒情況分析。

2.4 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

采取豬瘟病毒的陽性及陰性還有疑似的病料3 g，將其剪碎之后進行研磨處理，并且加入樣品稀釋液充分地進行渦旋混勻處理并放置于室溫環(huán)境下1 h，對其進行孵育之后將其再進行清洗處理，室溫孵育10 min之后對其進行終止反應(yīng)處理，從而借助反應(yīng)物的波長測定,將其與對照樣品進行對比分析，從而對病毒進行確定。

3 結(jié)果分析

上面提到的4種豬瘟檢測方法，綜合對比有以下表現(xiàn)：第1種方法一般不常用，因為檢測的時間較長，而且需要的內(nèi)容較多，而豬瘟病毒的熒光抗體檢測一般是對于病料組織里面的豬瘟病毒進行檢測，而且檢測的時間比較短，結(jié)果也比較直觀，因此在實驗室里面比較常見。在具體檢測上對于特異性檢測容易出現(xiàn)偏差，例如假陽性的情況，還有觸片的厚薄以及漂洗的具體時間等都會對結(jié)果產(chǎn)生影響。而采用豬瘟病毒的酶聯(lián)免疫吸附試驗進行檢測的時候，因為豬瘟病毒在這些組織材料里面含量不高，因此在具體檢測的時候能夠有效實現(xiàn)低含量豬瘟病毒檢測，同時又能精確檢測其特異性情況。最后一種檢測方法，在實際檢測方面有高效而且敏感的優(yōu)點，并且不大容易受到人為因素的影響，因此其檢測的結(jié)果更加精確。