孔雀支原體病的臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室檢疫

程秀荀

（河南省臨潁動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 漯河 462600）

禽支原體病又稱禽支原體，其病原主要為雞毒支原體（MG），滑液支原體（MS）和火雞支原體（MM）；而引起孔雀感染致病的禽源支原體通常為雞毒支原體。

Delaplane和stuart（1943）首次將由雞毒支原體引起的疾病命名為慢性呼吸道?。≧D），并現(xiàn)仍在應(yīng)用?？兹钢гw病的臨床特征為潛伏期較長(zhǎng)，多呈慢性經(jīng)過，尚可有部分隱性病例。以呼吸困難、氣管鑼音等呼吸道癥狀表現(xiàn)為主?？兹钢гw病的病理組織學(xué)變化特征為呼吸道組織戮膜單核細(xì)胞浸潤(rùn)，黏液腺及淋巴組織增生。

1 流行病學(xué)

世界多數(shù)國(guó)家均有雞毒支原體感染禽類的報(bào)道，并已從包括孔雀、環(huán)頸雉、鷓鴣、鵪鶉、鴕鳥、珍珠雞、花尾棒雞和鴿等30余種禽體中檢出了病原。帶菌禽和病禽是本病的主要傳染源，亦可通過被污染的飼料、飲水、器具及其他環(huán)境進(jìn)行傳播，種蛋、甚至雄鳥的精液也可能造成孔雀后代發(fā)??；另外，人和其他外來動(dòng)物也可成為本病的傳播媒介。自然感染以呼吸道、消化道和經(jīng)卵傳遞為主要感染途徑?？兹冈诤渖犸曫B(yǎng)時(shí)，舍內(nèi)溫差大，飼養(yǎng)密度過高，通風(fēng)不良及營(yíng)養(yǎng)失調(diào)等因素，可成為本病流行的誘因。

2 臨床癥狀

通常有較長(zhǎng)的潛伏期，相鄰各自獨(dú)立鳥舍間的鳥只病情傳播也無明顯特征，甚至有隔舍進(jìn)行傳播或與病鳥相鄰鳥舍不發(fā)生新病例的情況存在。病鳥表現(xiàn)精神不振，采食減少，育成鳥生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，成鳥體重下降，并伴有體溫上升等全身癥狀。典型的呼吸道癥狀，可出現(xiàn)重度的呼吸困難，病鳥張口、伸頸，當(dāng)呼吸道分泌物增加時(shí)，出現(xiàn)咳嗽、氣管鑼音，病鳥頻頻甩頭試圖排出黏液，使呼吸更加困難，這時(shí)可在病鳥口角處附有透明、混帶有氣泡、粘稠的液體。

3 病理學(xué)檢疫

3.1 病理剖檢變化

喉頭及氣管黏膜充血、水腫、附有黏稠滲出物，有時(shí)氣管黏膜面出現(xiàn)局灶性的增厚區(qū)。嚴(yán)重病例炎癥可蔓延至支氣管和肺。氣囊病變?cè)诳兹钢гw病有較高的發(fā)生率，表現(xiàn)胸氣囊透明度下降、呈混濁半透明狀，氣囊壁粗糙、增厚，附有絲狀或斑點(diǎn)狀纖維素性或干酪樣滲出物；病程較長(zhǎng)時(shí)，在腹氣囊也可見到相似的病變。

3.2 病理組織學(xué)變化

孔雀支原體病以呼吸道和氣囊病變?yōu)橹?。氣管黏膜白?xì)胞浸潤(rùn)，上皮細(xì)胞間出現(xiàn)大量杯狀細(xì)胞，固有膜的血管充盈，支氣管黏膜下層中腺泡和排泄管擴(kuò)張，內(nèi)充滿黏液，黏液中混有數(shù)量不等的白細(xì)胞、脫落的被復(fù)上皮和黏液腺及其排泄管的上皮細(xì)胞。病變氣管表現(xiàn)纖維素性炎癥，以纖維素析出和迅速凝固為特征，隨著炎癥的發(fā)展，纖維素繼續(xù)增厚，形成較為致密的灰白色、點(diǎn)或片狀物體覆于氣囊表面，這種纖維素樣物質(zhì)也可深入于氣囊組織內(nèi)部，和氣囊壁聯(lián)系在一起。4病原學(xué)檢疫

4.1 病料采集和處理

可用棉拭從其口咽、氣管、泄露殖腔中取樣；病死鳥可從氣管、肺和氣囊病變組織中采集樣品。用于分離培養(yǎng)禽源支原體的培養(yǎng)基可選用經(jīng)修改的Frey氏固體和液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基配方：基礎(chǔ)液80mL（配法：NaCl 2.5g，KCl 0.2g，Mg2SO4·7H2O，Na2HPO40.8g，KH2PO40.05g；葡萄糖 5g，乳蛋白水解物2.5g，依次溶于500mL蒸餾水中，115℃高壓滅菌20min）；豬血清 12mL，L- 半胱氨酸（1%）1mL；輔酶Ⅰ（1%）1mL，精氨酸（5%）0.2mL。半胱氨酸與輔酶Ⅰ預(yù)先混合10min后，加入其他成分，調(diào)pH值至7.6。固體培養(yǎng)基配方：在上述基礎(chǔ)液中加入1%純化瓊脂，121℃高壓蒸氣中滅菌15min，冷至56℃時(shí)加入其他成分。

4.2 鏡 檢

將液體培養(yǎng)物在37℃環(huán)境中，培養(yǎng)5～7d，經(jīng)5000轉(zhuǎn)/min離心30min，取沉淀物一滴作涂片，干燥后用甲醇固定2～3min。用pH7.2的PBS將姬姆薩染液稀釋20倍，染色3h，再用PBS沖洗，干后用丙酮脫色10s，自然干燥后在油鏡下觀察。通常情況下，首次培養(yǎng)檢出率較低，可每隔3～5d傳代一次，連續(xù)傳數(shù)代，以增加分離的數(shù)量。禽支原體有多種生長(zhǎng)形態(tài)，除球形、球桿形基本形狀外，尚有絲形、環(huán)形等多種形狀。該種微生物姬姆薩著色良好，呈革蘭氏弱陰性。

4.3 菌落觀察

將固體培養(yǎng)物置于37℃，潮濕環(huán)境中培養(yǎng)3～5d，進(jìn)行觀察。典型的禽支原體菌落較小，呈圓形、光滑、濕潤(rùn)、中央致密隆起、邊緣整齊，具凸起乳頭狀、稍平煎蛋狀或臍狀外觀；液體培養(yǎng)物可表現(xiàn)輕度混濁。根據(jù)雞毒支原體和滑液支原體菌落具有吸附紅細(xì)胞的特性可用紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)與非病原支原體菌落相鑒別。取5mL成雞抗凝血液，用2～3倍生理鹽稀釋，2000轉(zhuǎn)/min離心10min，棄上清液，再加生理鹽水重復(fù)離心沖洗2～3次，制成0.25%雞紅細(xì)胞懸液。取該懸液15～20mL，滴加于菌落表面，室溫下作用15～20min后，用生理鹽水反復(fù)沖洗2～3次，用低倍鏡觀察，如菌落表面吸滿紅細(xì)胞，則判為陽(yáng)性。

4.4 動(dòng)物致病性試驗(yàn)

選用10日齡左右健康雞雛，鼻腔或氣管接種病料混懸液或純培養(yǎng)物0.2～0.3mL，觀察其結(jié)果；亦可接種于雞胚卵黃囊，待感染胚5～7d死亡后，剖檢病胚進(jìn)行綜合判定。