中和抗體在當前豬偽狂犬病疫苗評估中的作用

胡生雄

摘要：從疫苗免疫角度出發(fā)，探討了當前豬偽狂犬病疫苗對母豬和生產育肥豬的免疫效果。通過檢測疫苗針對流行毒株（HuBei）產生的中和抗體和gB抗體，分析中和抗體和gB-ELISA抗體的相關性。結果表明，目前普遍使用的PRV疫苗免疫后誘導豬體產生的流行毒株中和抗體水平差異很大，大部分疫苗免疫后不能誘導豬只產生良好的流行毒株中和抗體，gB-ELISA抗體和中和抗體的相關性也不明顯。豬場可以根據PRV的感染狀態(tài)，合理運用能夠產生中和抗體的疫苗免疫，配合合理的生產流程、嚴格的生物安全措施來控制偽狂犬病。

關鍵詞：豬偽狂犬病;免疫;中和抗體

中圖分類號：S858.28? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2018）11-0010-02

PRV為偽狂犬病的致病病原，豬是惟一的自然宿主，可以導致豬只發(fā)生潛伏感染、亞臨床感染以及致死性感染，臨床表現和感染毒株、感染年齡、感染途徑、感染量以及免疫保護水平等多因素有關。長時間以來，免疫作為控制PRV的有效方式被業(yè)內人士充分認可，它能夠提高豬只的感染閾值、減少臨床問題的發(fā)生、縮短攻毒后排毒時間和減少排毒量并能減少攻毒后潛伏感染豬的排毒等，但是，免疫往往不能完全阻止PRV的感染。在減少感染方面，細胞免疫起著重要作用，但要阻止感染，往往需要良好的細胞免疫和體液免疫（中和抗體）協同作用[1]。無論是阻止豬只感染，還是感染后減少臨床問題以及縮短排毒時間和減少排毒量，中和抗體都起著非常重要的作用。但是，近年來隨著PRV新流行毒株在全國范圍內的流行，有研究機構認為，目前使用的Bartha-K61株疫苗免疫誘導針對流行毒株的中和抗體水平比以前的經典毒株更差[2-4]。因此，研究了目前不同品牌Bartha-K61株疫苗誘導產生新流行毒株中和抗體水平和gB抗體的差異和相關性。

1? 材料與方法

1.1? 材料

豬偽狂犬病病毒ELISA抗體檢測試劑盒（阻斷法）和豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒（阻斷法）購自武漢科前生物股份有限公司;豬腎傳代細胞系IB細胞系由華中農業(yè)大學國家微生物學重點實驗室贈與。

1.2? 方法

1.2.1? 試驗場所與疫苗免疫? 選擇湖南省某規(guī)?；i場（經產母豬1 000頭）作為試驗場所，對其中母豬、生長育肥豬豬群作為研究對象。選擇目前市場上主要的3種PRV疫苗對母豬和生長育肥豬進行試驗。選擇其中一條約300頭的生產線免疫A苗（疫苗株為HB-98株），另一條約300頭的生產線免疫B苗（疫苗株為Bartha-K61株），其余生產線全部免疫C苗（某進口品牌，Bartha-K61株）。從A、B、C三個試驗組分別隨機抽取10頭母豬的血清用PRV流行毒株（HuBei株）做中和試驗。

1.2.2? 中和抗體檢測? 使用處于生長對數期的IB細胞測定病毒TCID50。取已滅活處理的血清，在96孔微量細胞培養(yǎng)板上用稀釋液作系列倍比稀釋，使其稀釋度分別為原血清的1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64，每個稀釋度做3個平行孔。加入200 TCID50/100 μL的病毒在37 ℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中孵育2 h。病毒-血清混和物孵育2 h后，各取100 μL中和液到細胞培養(yǎng)板相應的孔中37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中孵育2 h。吸掉中和液，加200 μL DMEM在37 ℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中孵育3～4 d，檢測培養(yǎng)液中中和活性，以能保護50%細胞培養(yǎng)物不被感染的最高血清稀釋度的倒數作為中和終點。設置細胞對照、陰性對照和空白對照，各設3 個平行孔。采用Reed和Muench兩氏法計算結果。

1.2.3? gB抗體檢測? ?采用豬偽狂犬病病毒ELISA抗體檢測試劑盒使用說明書（阻斷法）進行gB抗體檢測。

2? 結果與分析

2.1? 中和抗體水平差異性的研究

2.1.1? 母豬中和試驗檢測結果? 為了更直觀地表示抗體水平的高低，本試驗用能夠中和病毒的最高血清稀釋倍數來表示樣品的中和抗體水平。結果如圖1所示，A疫苗免疫后針對流行毒株的中和抗體水平最高，中和抗體均在1∶8以上。其次是C疫苗免疫，B疫苗免疫針對流行毒株中和抗體效價最低。

2.1.2? 生長育肥豬中和試驗檢測結果? 試驗結果如圖2所示，A疫苗免疫后針對流行毒株的中和抗體水平整體要高于B疫苗和C疫苗。A疫苗可使90%以上仔豬產生流行毒株的中和抗體，而B疫苗僅能使40%仔豬產生流行毒株的中和抗體，C疫苗僅能使60%仔豬產生流行毒株的中和抗體。

2.2? gB抗體水平與中和抗體相關性的研究

通過ELISA檢測gB抗體來評估疫苗免疫后的效果，一般來說，gB抗體水平越高，中和抗體水平會越高。但是，由于流行毒株與經典毒株相比具有高變異性，其gB基因的一些位點發(fā)生突變，因此gB-ELISA的抗體水平和流行毒株的中和抗體水平可能存在一定的差異。試驗選擇10周齡生長育肥豬做試驗，用A、B、C疫苗分3組免疫，檢測每頭試驗豬的gB-ELISA抗體，并分析其和流行毒株中和抗體之間的關系，檢測結果見圖3和表1。本試驗所用ELISA為阻斷ELISA，S/N值和gB抗體值成反比。由表1可知，目前商品化疫苗誘導生長育肥豬產生的流行毒株中和抗體水平都不太高，但是差異很大，B疫苗誘導產生的中和抗體值最低，但是其gB抗體并不是最低。另外，也可以看到，A疫苗誘導gB抗體最好且中和抗體也最好。C疫苗免疫誘導的中和抗體介于A和B中間，但其gB抗體卻最低。表明gB抗體和目前流行毒株中和抗體相關性不強，單純通過檢測gB抗體水平的高低來評估疫苗免疫后的保護水平高低不合理。

3? 討論

同一種疫苗免疫母豬和生長育肥豬誘導的中和抗體水平差異很大。不同品牌的PRV疫苗免疫誘導的流行毒株中和抗體和gB-ELISA抗體無明顯相關性，以前通過gB-ELISA抗體水平來評估疫苗免疫效果的方法需要做進一步的認證。疫苗抗原含量高并不意味著誘導的中和抗體水平高。上述研究中的C進口疫苗的抗原標識含量是最高的，但是無論是在母豬免疫還是在生長育肥豬免疫中它誘導的流行毒株中和抗體水平都不是最高的。楊文萍等[5]分析了大量的田間PR案例后，歸納出本次PR大面積流行的三個主要特點：高水平的gB-ELISA抗體沒能阻止豬群快速轉陽、豬場開始轉陽時往往先發(fā)生在育肥豬階段、轉陽場臨床情況差異很大。上述的中和抗體系列研究成果有助于進一步理解這三個流行特點。

B疫苗誘導產生的中和抗體值最低，但是其gB抗體水平并不是最低。另外，A疫苗誘導gB抗體最高且中和抗體也最好。C疫苗免疫誘導的中和抗體介于A和B中間，但其gB抗體水平卻最低。所以，gB抗體水平高的豬只并不一定具備高水平的中和抗體。盡管中和抗體不能阻止PRV感染，但是，對減少臨床問題和損失的作用是明顯的。同樣由上述的研究結果可知，多數疫苗免疫生長育肥豬后誘導的流行毒株中和抗體水平很低，甚至沒有。在實際生產中，有的疫苗免疫母豬后誘導的針對流行毒株中和抗體水平都不高。這種情況下，一旦感染壓力增大，臨床上就容易出現明顯損失。

由上述系列研究結果可知，目前普遍使用的PRV疫苗免疫后誘導豬體產生的流行毒株中和抗體水平差異很大，大部分疫苗免疫后不能誘導豬只產生良好的流行毒株中和抗體，gB-ELISA抗體和中和抗體的相關性也不明顯。豬場可以根據本場PRV的感染狀態(tài)，合理運用能夠產生中和抗體的疫苗免疫，配合合理的生產流程、嚴格的生物安全措施來控制偽狂犬病。

參考文獻：

[1] 林云雄，梁培新，楊玉堅，等.豬偽狂犬病病毒流行毒株體外中和抗體系列研究的啟示[J].養(yǎng)豬，2015（5）：89-93.

[2] 鄒浩勇，陳冬煥，熊金鳳，等.偽狂犬病毒中和抗體與gB-ELISA抗體阻斷率之間的相關性[J].豬業(yè)科學，2008，25（5）：94-96.

[3] 楊濤濤，劉崇靈，劉曉波，等.生豬偽狂犬病毒gB抗體與中和抗體的相關性分析[J].湖南農業(yè)大學學報（自科版），2015，41（3）：303-306.

[4] 龔文波，徐? 靜，郭建寶，等.三種豬偽狂犬病抗體監(jiān)測方法的比較[J].四川畜牧獸醫(yī)，2017，44（11）：25-27.

[5] 楊文萍，顧真慶，孫海鳳，等.偽狂犬病毒流行毒株的抗原性和血清中和特性分析[J].畜牧與獸醫(yī)，2014，46（10）：11-14.