雞滑液囊支原體感染的診斷與防控

侯紹璞，侯宏艷，張丹俊

（1.河南省浚縣畜牧局，河南 ?？h 456250；2.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，安徽 合肥 230031）

雞滑液囊支原體 （Mycoplasma synoviae，MS）是雞的主要致病性支原體之一，可引起雞滑液囊支原體感染。該病以關(guān)節(jié)滲出性的滑液囊膜炎及腱鞘滑膜炎為主要特征，病雞表現(xiàn)為關(guān)節(jié)或足墊腫大、雞冠蒼白、呼吸道疾病等。雞滑液囊支原體感染在世界范圍內(nèi)流行，多個國家的流行病學(xué)監(jiān)測表明其在商品代雞群中有很高的流行率［1-3］。近年來，以滑膜炎為主要特征的MS感染，在我國蛋（肉）雞群中廣泛流行，如河南省、山東省、河北省、湖北省、廣東省、遼寧省等［2-3］都有MS感染的報道，且發(fā)病率有增加的趨勢。

雖然MS感染不會引起雞的直接死亡，但該病一旦在雞群中感染就很難根除。MS感染在雞群中長期蔓延會導(dǎo)致雞跛行、生長發(fā)育遲緩、飼料利用率低、淘汰率增高、雞肉品質(zhì)和雞蛋產(chǎn)量下降等。另外MS感染易于誘發(fā)或并發(fā)其他疾病，與大腸桿菌、新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒等病原微生物混合感染后，引起全身性感染，不易治愈，增加雞的病死率，從而嚴(yán)重危害和影響了雞的生產(chǎn)性能，給養(yǎng)雞產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。因此，一定要重視對雞群MS感染的診斷與防控，使種雞場保持MS陰性，商品雞場最大限度減少MS感染，這對養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展意義重大。筆者對雞滑液囊支原體的診斷與防控措施進(jìn)行了論述，以期為雞滑液囊支原體感染的檢測、診斷和防控提供參考。

1 臨床診斷

滑液囊支原體病全年都可發(fā)生，其中春、秋季節(jié)更容易發(fā)生。任何年齡的雞都具有易感性，但常發(fā)生于雛雞，一般情況下，3～16周齡雞最易發(fā)生急性感染，急性感染時間一般持續(xù)短。病雞和隱性感染雞是該病的傳染源。大部分病雞頭部蒼白，爪墊、翼關(guān)節(jié)、趾關(guān)節(jié)或者跗關(guān)節(jié)發(fā)生腫脹，跗關(guān)節(jié)和爪墊腫脹較為多見，與正常雞相比非常明顯；部分病雞胸部發(fā)生囊腫，龍骨外側(cè)皮膚手感增厚、腫脹；有的病雞出現(xiàn)呼吸道癥狀，如流鼻涕、咳嗽、打噴嚏，發(fā)出明顯的啰音，往往在雞只受到不良刺激（尤其是免疫接種活疫苗后）發(fā)生應(yīng)激后出現(xiàn)；發(fā)病后期，病雞關(guān)節(jié)嚴(yán)重變形，只能臥地不起，雖然具有食欲，但由于不能夠正常采食，采食量漸少導(dǎo)致機體嚴(yán)重消瘦，最終由于過度衰竭或者并發(fā)其他疾病而死亡。

剖檢可見，肝、脾、腎臟等有輕微損傷；胸氣囊或腹氣囊可見渾濁，顯示氣囊炎癥狀；氣管有黏液；胸骨有的有囊腫；剪開關(guān)節(jié)、爪墊等腫大的部位，可見有白色或淡黃色液體滲出，有黃白色干酪樣或黃色膠凍樣物質(zhì)，在進(jìn)行病原分離培養(yǎng)和分子生物學(xué)診斷時常常取這些滲出液和增生物質(zhì)進(jìn)行檢測?；ぱ撞‰u的關(guān)節(jié)腔和腱鞘中可見異嗜性白細(xì)胞和纖維素性浸潤，滑液囊膜因絨毛的形成，其下層淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤而增生。

病毒、細(xì)菌也可引起關(guān)節(jié)腫脹、跛行和生長發(fā)育遲緩，臨床診斷時注意進(jìn)行鑒別［4］。如病毒性關(guān)節(jié)炎是病毒引起的，主要發(fā)生在2～4周齡雛雞，肉雞多發(fā)，由于膝肌腱發(fā)生斷裂而出現(xiàn)跛行，局部組織可見到明顯的出血痕跡，但不會表現(xiàn)出明顯的全身癥狀。雞感染葡萄球菌而出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎后，通常存在趾瘤或體表呈紫色的情況，能從病料組織中分離出葡萄球菌。感染沙門菌或大腸桿菌的病雞除了有跛行外，肝臟上通常有明顯病變，從內(nèi)臟能分離得到沙門菌或大腸桿菌。

2 血清學(xué)檢測

血清學(xué)檢測由于操作簡單、診斷快速，常作為MS感染的初步診斷方法。常用的血清學(xué)檢測方法有血清平板凝集試驗（SPA）、血凝抑制試驗（HI）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）3種，其中國內(nèi)外檢測MS感染的商品化的ELISA試劑盒在生產(chǎn)中應(yīng)用較多。但是，世界衛(wèi)生組織僅將血清學(xué)檢測方法推薦為在群體中進(jìn)行雞支原體篩選、監(jiān)測的方法，而不是對個體進(jìn)行診斷的方法。由此看來，在進(jìn)行血清學(xué)檢測時，樣本量一定要足夠多。另外，血清學(xué)方法都存在一定比例的假陽性或假陰性反應(yīng)，且在有的血清學(xué)檢測方法中，MS感染易與雞毒支原體（MG）感染發(fā)生交叉反應(yīng)。因此，血清學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)的陽性樣本應(yīng)該用傳統(tǒng)的微生物學(xué)病原分離培養(yǎng)及鑒定方法或分子生物學(xué)方法進(jìn)一步鑒定。

3 病原分離培養(yǎng)

采集疑似病雞的咽喉拭子，將病雞關(guān)節(jié)和爪墊等腫脹部位剪開取滲出液或增生物，采集種雞場中產(chǎn)蛋孵化后的雛雞和啄殼死亡毛蛋的氣囊棉拭子，接種到支原體培養(yǎng)基中。MS培養(yǎng)基可為添加了馬血清的改良的KM2培養(yǎng)基，具體操作可參考侯宏艷文章中［5］中綿羊肺炎支原體的分離培養(yǎng)方法進(jìn)行。病原分離培養(yǎng)雖然是最準(zhǔn)確、可靠的方法，但MS屬于原核微生物，大小介于細(xì)菌和病毒之間，分離難度大，培養(yǎng)耗時長（1～3周），因此，病原分離培養(yǎng)在實際養(yǎng)雞生產(chǎn)應(yīng)用中受到一定的限制，不適合生產(chǎn)上的快速診斷和檢測，特別是在多個病原混合感染的情況下。

4 分子生物學(xué)診斷

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，研究人員相繼建立了一些用于檢測MS的分子生物學(xué)方法，如利用特異性的重組DNA探針來檢測MS、根據(jù)MS的某段序列設(shè)計引物對MS進(jìn)行PCR檢測，其特異性、靈敏度高，能快速檢測，檢測的陽性率比病原分離培養(yǎng)的陽性率高，因此，在生產(chǎn)實際中，PCR方法已成為快速、有效檢測MS感染的方法。對臨床疑似MS感染病雞腫脹關(guān)節(jié)和爪墊等部位內(nèi)容物提取DNA后直接進(jìn)行PCR檢測，檢測過程中可用自己合成的引物進(jìn)行PCR擴增，再進(jìn)行序列比對，也可使用國內(nèi)商品化的滑液囊支原體PCR檢測試劑盒進(jìn)行檢測。還有，黎敏［6］認(rèn)為套式PCR較普通PCR靈敏度更高、特異性更好，建立了MS的套式PCR檢測方法。另外，MS在臨床上常常與其他病原微生物混合感染，采用多重PCR一次反應(yīng)可以檢測2種或2種以上的病原，與常規(guī)PCR相比，簡化了檢測程序，節(jié)約檢測成本和時間。如張磊［7］建立的三重PCR方法可用于MG（雞毒支原體）、MS和MM（火雞支原體）的同時檢測和鑒別診斷；劉婷［8］建立了能同時檢測MS、MG（雞毒支原體）、EC（大腸桿菌）和 SA（沙門菌）的多重PCR檢測方法。近些年，實時熒光定量PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)（LAMP）等新的分子生物學(xué)診斷方法加大了對MS診斷的準(zhǔn)確性和實效性。

5 防控

該病能夠通過種蛋進(jìn)行垂直傳播，也能夠在雞群中進(jìn)行直接或者間接水平傳播［9］，且環(huán)境中該病時刻存在，在氣候變化或飼養(yǎng)管理不當(dāng)時，發(fā)病率會上升，因此，在做好種源凈化的同時，加強飼養(yǎng)管理也很重要。

5.1 上游種雞的凈化是重中之重

要確實做好引種的檢疫工作，從原種開始持續(xù)做好疾病凈化工作。并采取有效措施（如藥物浸泡法、溫差法和熏蒸法）對種蛋進(jìn)行處理，從而控制支原體的垂直傳播。有條件的大型企業(yè)利用抗體檢測結(jié)合PCR法做好雞群檢測工作，對于中、小型種禽企業(yè)，可利用快速檢測試劑盒檢測，根據(jù)檢測結(jié)果采取淘汰、免疫、藥物處理等方法，培育出優(yōu)質(zhì)的種雞群。

5.2 加強生物安全管理

雞場可通過采取多種措施來使雞場環(huán)境、衛(wèi)生水平不斷提高。盡量做到雞群的全進(jìn)全出，雞舍使用前應(yīng)嚴(yán)格消毒后再空舍1周以上；做好雛雞早期的溫度管控，在溫差較大的春、秋季節(jié)要進(jìn)行有效通風(fēng)；應(yīng)使用SPF蛋制作的活疫苗進(jìn)行免疫接種，以避免非SPF蛋制作的活疫苗攜帶MS。多注意管理上的細(xì)節(jié)，最大程度減少應(yīng)激的發(fā)生，降低雞群感染MS的風(fēng)險。

5.3 疫苗免疫

疫苗免疫能有效防止滑液囊支原體的感染，防止垂直傳播。對于種雞，推薦在35日齡使用MS弱毒疫苗進(jìn)行點眼，同時免疫M(jìn)S滅活疫苗，開產(chǎn)前進(jìn)行MS滅活疫苗二免。對于商品蛋雞或者肉雞，要從有質(zhì)量保證的種雞場引進(jìn)健康雞，如果使用疫苗，推薦在15日齡使用MS弱毒疫苗進(jìn)行點眼。

5.4 合理使用藥物

該病具有較差的治療效果，但對于MS陽性雞群，合理使用藥物能夠有效降低MS感染，劉軼秋［10］先用最小抑菌濃度（MIC）再用棋盤法測定了8種不同組合藥物對雞滑液囊支原體GX11-T株的敏感性，認(rèn)為恩諾沙星的有4個組合表現(xiàn)出相加作用。當(dāng)在雞群中發(fā)現(xiàn)軟腳病雞后要立即進(jìn)行淘汰，并在飼料中添加敏感的藥物用于預(yù)防該疾病的蔓延，常用的藥物有喹諾酮類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、泰妙菌素、林可大觀霉素或相關(guān)中草藥物等，連續(xù)使用3～5 d（最好是先做藥敏試驗，再根據(jù)試驗結(jié)果合理使用藥物）。對于開產(chǎn)后蛋雞發(fā)生MS感染的，要使用符合國家相關(guān)規(guī)定的藥物，在嚴(yán)格遵守國家休藥期的基礎(chǔ)上進(jìn)行有效治療。

6 小結(jié)

敏感、準(zhǔn)確、快速的診斷方法為MS感染的檢測，并最終建立無MS感染雞群提供了可靠的依據(jù)。MS感染的實驗室診斷方法主要有血清學(xué)方法、病原微生物分離培養(yǎng)法以及分子生物學(xué)方法。血清學(xué)方法由于常出現(xiàn)非特異性的交叉反應(yīng)而影響診斷的準(zhǔn)確性；由于支原體對所需條件要求苛刻，病原微生物分離培養(yǎng)所需時間長，操作繁雜，不能快速做出診斷；PCR法快速、簡單、靈敏，有明顯的優(yōu)勢，但技術(shù)條件要求較高。因此，最終確診需要多種診斷方法聯(lián)合使用，如采用ELISA與PCR法檢測，并結(jié)合臨床癥狀和病理變化來判斷雞場MS感染情況。

MS在雞群內(nèi)可直接和間接水平傳播，還能通過雞胚從種雞垂直傳播給后代，雞群一旦感染MS將很難根除。防控MS感染，保持種雞群的無MS感染狀態(tài)，是種雞及其提供的雛雞最重要的質(zhì)量指標(biāo)之一，對養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展意義重大。因此，國內(nèi)種雞公司做好MS感染的診斷與防控勢在必行，如郭龍宗等［11］通過對哈伯德曾祖代雞開展嚴(yán)格的生物安全飼養(yǎng)管理，并根據(jù)一個完整飼養(yǎng)周期的持續(xù)觀察、血清檢測和病原檢測結(jié)果顯示，該雞群實現(xiàn)了無MS感染，并對其后代的數(shù)百個樣品進(jìn)行PCR檢測，也未發(fā)現(xiàn)任何的垂直感染，表明在我國是完全可以通過嚴(yán)格的生物安全措施來有效控制MS感染的。

在規(guī)?；B(yǎng)殖的商品肉雞（蛋雞）群中，根據(jù)雞場情況可使用疫苗或藥物來預(yù)防雞群的MS感染。同時，在購進(jìn)雛雞時應(yīng)嚴(yán)格把關(guān)，從無MS感染的種雞場引進(jìn)雛雞；堅持實行全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式；保持雞舍有效通風(fēng)，降低飼養(yǎng)密度，加強消毒；定期進(jìn)行MS的ELISA檢測和PCR檢測。嚴(yán)格的生物安全措施對維持雞群呼吸道健康和保持雞群不被MS感染至關(guān)重要。