艾灸治療神經(jīng)根炎模型大鼠抗炎鎮(zhèn)痛效應(yīng)研究?

王婷婷，朱美玲△，張貴育，劉翠玲，陳柏書，梁 爽，周 鵬，李方園

(1. 廣州中醫(yī)藥大學附屬寶安中醫(yī)院，廣東 深圳 518133； 2. 泉州醫(yī)學高等?？茖W校，福建 泉州 362011)

腰椎間盤突出癥(LDH)是由于纖維環(huán)髓核組織膨脹進入椎管或神經(jīng)孔壓迫脊髓或神經(jīng)根[1]引起的椎間盤退行性病變。最新研究發(fā)現(xiàn)，炎癥介質(zhì)在LDH疾病過程中發(fā)揮著重要作用[2-3]。當髓核破裂并突出時，損傷部位出現(xiàn)大量主要由單核細胞組成的炎性細胞浸潤，釋放以白介素-1β為主的炎性細胞因子，一方面會加重局部炎癥反應(yīng)，另一方面會刺激其他炎性物質(zhì)釋放并引起疼痛的發(fā)生[4-5]，可以認為抗炎已經(jīng)成為LDH治療的重要靶標。坐骨神經(jīng)痛患者的藥物治療主要以非甾體抗炎藥為主[6]，由于臨床治療劑量下的非甾體抗炎藥對人體有不同程度的不良反應(yīng)，因此尋求安全有效、毒副作用小的藥物和治療方式成為迫切之需。

艾灸作為中醫(yī)特色療法，其消除痹痛療效顯著，且溫暖舒適、無副作用，在臨床廣泛應(yīng)用于腰腿痛的治療，但其作用機制不明。本研究擬通過建立神經(jīng)根炎模型大鼠，觀察神經(jīng)功能評分、血清中炎癥因子IL-1β和神經(jīng)根病理組織變化，探討艾灸治療LDH抗炎鎮(zhèn)痛的作用機制。

1 方法

1.1 動物來源及分組

選取SPF級SD雄性大鼠共40只，體質(zhì)量約為180～200 g，南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供(許可證號SCXK(粵)2016-0041)。按隨機數(shù)字表法分為正常組、模型組、艾灸組、西藥組4組各10只，開始實驗前經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 儀器與試劑

多功能酶標儀(美國Biotek公司)；組織切片機(德國LEICA公司)；光學顯微鏡(日本OLYMPUS公司)；艾條(南陽臥龍漢醫(yī)艾絨廠)；美洛昔康片(上海勃林格殷格翰，批號A53971)；大鼠IL-1β ELISA試劑盒(南京建成)；HE染液(南昌雨露實驗器材有限公司)。

1.3 動物模型的建立[7]

依據(jù)0.3 mL/100 g體質(zhì)量標準，腹腔注射10%水合氯醛麻醉動物，固定在操作臺后剃去腰部毛發(fā)，常規(guī)碘酒、酒精消毒皮膚，取后背正中切口，以L5、L6椎間隙為中心，逐層切開充分暴露右側(cè)L5、L6神經(jīng)根。取浸泡福爾馬林的濾紙置于暴露的神經(jīng)根與硬膜囊交界處的腋部固定，用硫酸慶大霉素沖洗切口逐層縫合。青霉素粉外涂傷口，無菌紗布包扎。術(shù)后大鼠蘇醒放回籠中觀察3 d后各組行不同方法干預。以大鼠右側(cè)下肢腫脹，行走出現(xiàn)右足外翻或間歇性跛行即為造模成功。

1.4 治療方法

艾灸組治療：穴取L5、L6受刺激神經(jīng)根所在棘突間隙右側(cè)旁開距中線3～4 mm 處的夾脊穴部位[8]。固定大鼠剪去穴區(qū)被毛，艾條距穴20 mm處懸灸，每次20 min，每日1次，正常組不做任何治療。模型組按照10 mL/kg體質(zhì)量標準，每天給予生理鹽水灌胃。藥物組給予美洛昔康片，按3.75 mg/kg灌胃，劑量為成人日劑量的30倍[9]，每日灌胃1次。均于造模成功后第3天開始干預，連續(xù)治療14 d。

2 觀察、檢測指標與方法

2.1 大鼠患肢大體觀

于治療開始前1 d、治療結(jié)束后次日分別應(yīng)用Siegal神經(jīng)功能6級評分法[10]對大鼠肢體功能進行評價?；贾篌w正常，分級為0級，評分2分；患肢甩尾無力分級為1級，評分4分；后肢無力、行走時具有輕度困難分級為2級，評分6分；后肢無力、行走時具有明顯不穩(wěn)定性分級為3級，評分8分；站立不穩(wěn)但后肢能夠移動分級為4級，評分10分；患肢癱瘓、后肢無自主移動分級為5級，評分12分。

2.2 IL-1β含量測定

干預結(jié)束后次日，大鼠神經(jīng)功能評分后快速眼眶采血，置于1.5 ml EP管中，3000 r/min離心10 min后分離上層血清，迅速置于-20℃凍存。依照ELISA試劑盒說明書檢測步驟進行具體操作。

2.3 局部受刺激神經(jīng)的組織結(jié)構(gòu)觀察

正常組動物眼眶采血麻醉后，取下背部神經(jīng)根和神經(jīng)根附近肌肉，迅速置入10%多聚甲醛中固定。其余3組分別沿前手術(shù)切口切開皮膚，取放置濾紙附近神經(jīng)根和附近肌肉按照上述方法固定。采用常規(guī)制片、HE染色，置于光學顯微鏡下觀察神經(jīng)根和附近肌肉如下病變及其程度。

2.4 統(tǒng)計學方法

3 結(jié)果

3.1 大鼠Siegal神經(jīng)功能評分

表1顯示，各組在造模后患肢神經(jīng)功能評分較正常組顯著升高(P<0.01)，組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后模型組評分與正常組比較顯著升高(P<0.01)，說明腰神經(jīng)根炎模型復制成功，基線水平一致具有可比性。治療后，艾灸組及西藥組評分均較其治療前明顯下降(P<0.01)；與模型組比較評分均有顯著下降(P<0.01)，說明艾灸和西藥干預有效，均可降低模型大鼠炎性疼痛癥狀。

3.2 各組大鼠血清IL-1β含量比較

表1顯示，模型組IL-1β含量較正常組明顯升高 (P<0.05)，提示造模后出現(xiàn)明顯炎癥反應(yīng)。經(jīng)艾灸與西藥治療后，各干預組IL-1β含量較模型組明顯降低(P<0.05)，說明艾灸與西藥均有抗炎作用。

表1 各組大鼠治療前后Siegal神經(jīng)功能評分及血清IL-1β含量比較

注：與同期正常組比較：a)P<0.01，b)P<0.05；與同期模型組比較：c)P<0.01，d)P<0.05

3.3 局部受化學刺激神經(jīng)組織及周圍肌肉組織結(jié)構(gòu)的變化

圖1～8顯示，HE染色結(jié)果可見，正常組大鼠神經(jīng)及肌肉組織纖維平行排列、結(jié)構(gòu)清晰。模型組大鼠神經(jīng)根組織見神經(jīng)間質(zhì)水腫，有少量炎癥細胞浸潤，神經(jīng)根周圍肌肉組織纖維排列紊亂，并有大量炎癥細胞浸潤。艾灸組、西藥組經(jīng)治療后其病變有不同程度改善。

4 討論

近年相關(guān)研究理論認為，炎癥對LDH引起的神經(jīng)痛及其病理改變具有關(guān)鍵作用[3]，破裂的纖維環(huán)和裸露的髓核在致炎因子及自身免疫反應(yīng)的影響下首先刺激硬脊膜囊和神經(jīng)根袖，導致周圍的血管叢損傷、局部微循環(huán)障礙、神經(jīng)根營養(yǎng)供應(yīng)不足而致痛[11]。改善微循環(huán)，降低局部組織中致炎致痛物質(zhì)含量，抑制神經(jīng)根及周圍組織炎癥的發(fā)生，是LDH治療的重要環(huán)節(jié)[12]。

LDH屬于中醫(yī)學“痹癥”“腰痛”范疇?！秲?nèi)經(jīng)》中提到“風寒濕三氣雜至，合而為痹也”。后腰部是陽經(jīng)循行部位，六淫之邪侵襲，由皮毛而至經(jīng)絡(luò)，致使經(jīng)絡(luò)的氣血凝滯引發(fā)腰痛[13]。而中醫(yī)對“痛”的病機概括主要有“不通則痛”與“不榮則痛”?！巴ńj(luò)止痛”的中醫(yī)治療原則，與現(xiàn)代醫(yī)學改善循環(huán)降低局部組織致炎致痛物質(zhì)含量的治療方法不謀而合。中醫(yī)艾灸具有宣散寒濕、活血祛瘀、溫陽通絡(luò)的功效，故在LDH非手術(shù)療法中，中醫(yī)艾灸具有明顯的優(yōu)勢[14]，但其作用機制尚未明確。

圖1 正常組大鼠神經(jīng)根組織(HE染色×400)

圖2 正常組大鼠神經(jīng)根周圍肌肉組織(HE染色×400)

圖3 模型組大鼠受刺激神經(jīng)根組織(HE染色×400箭頭示輕度水腫，少量炎癥細胞浸潤)

圖4 模型組大鼠受刺激神經(jīng)根周圍肌肉組織(HE染色×400箭頭示大量炎癥細胞浸潤)

圖5 艾灸組大鼠受刺激神經(jīng)根組織(HE染色×400)

圖6 艾灸組大鼠受刺激神經(jīng)根周圍肌肉組織(HE染色×400)

圖8 西藥組大鼠受刺激神經(jīng)根周圍肌肉組織(HE染色×400)

綜上所述，艾灸可減輕化學性神經(jīng)根炎炎癥反應(yīng)程度，具有抗炎鎮(zhèn)痛作用， 可有效減輕化學性炎癥誘導的大鼠神經(jīng)根損傷，該作用可能是其臨床治療LDH的機制之一。目前對于艾灸治療LDH的作用機制研究較少，而更為全面地掌握艾灸治療LDH的機制，可促進艾灸療法在臨床上的推廣使用，本研究可為進一步探討艾灸治療LDH作用機制提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。