益母草毒性研究

羅 毅，劉紅燕，周本宏，宋金春

（武漢大學(xué)人民醫(yī)院 ，武漢 430060）

益母草（Herba leonuri）又名益母艾、坤草、月母草、地母草等，為唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的新鮮或干燥地上部分，有活血調(diào)經(jīng)、利尿消腫、清熱解毒之功能，素有“血家圣藥”“經(jīng)產(chǎn)良藥”之稱，常用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)閉經(jīng)、惡露不盡、水腫尿少、瘡癰腫毒[1]，在臨床上應(yīng)用非常廣泛。益母草始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，被認(rèn)為是安全無毒的常用中藥，而近年來已有不少有關(guān)益母草致服用者發(fā)生不良反應(yīng)、引起臟器損傷的臨床報(bào)道，一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果證實(shí)了益母草能致肝、腎等臟器毒性。本文對近年益母草的臨床毒性報(bào)道、有關(guān)益母草的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究以及減輕益母草毒性的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行總結(jié)，以期為科學(xué)評價(jià)和進(jìn)一步系統(tǒng)研究益母草的毒性提供參考。

1 益母草毒性的臨床研究

1.1 單味藥應(yīng)用 有關(guān)益母草引起中毒死亡的報(bào)道最早見于20世紀(jì)80年代末期，報(bào)道患者服用益母草400 g煎液，1次口服半量，結(jié)果于1 d后出現(xiàn)腹痛、頭痛、腰痛、多器官出血而死亡，該病例系因益母草用量過大及反復(fù)使用從而導(dǎo)致腎功能衰竭而中毒致死[2]。后來陸續(xù)也有關(guān)于益母草不良反應(yīng)、毒性的臨床報(bào)道。例如，有患者自采益母草，以500 g煎服治療痛經(jīng)，結(jié)果出現(xiàn)乏力、肢體麻木、多汗，繼而心悸的中毒反應(yīng)[3]。一患者口服益母草流浸膏后很快出現(xiàn)全身皮膚發(fā)紅、胸悶心慌、呼吸加快等過敏反應(yīng)[4]。一產(chǎn)婦服用益母草后出現(xiàn)劇烈宮縮疼痛[5]。

1.2 復(fù)方應(yīng)用 劉建華報(bào)道有患者服用活血調(diào)經(jīng)復(fù)方藥，結(jié)果連服3 d后患者出現(xiàn)血尿，所用復(fù)方中含益母草30 g，分析認(rèn)為出現(xiàn)血尿是因復(fù)方中的益母草中毒而致，并提出益母草應(yīng)該忌用于或慎用于既往已有過腎損傷的患者，推薦益母草的使用劑量為9～12 g[6]。益母草對子宮具有較強(qiáng)的收縮作用，常用于婦人產(chǎn)后出血[7-8]。有文獻(xiàn)[9]報(bào)道，應(yīng)用含益母草的復(fù)方用于產(chǎn)后精神病人時(shí)導(dǎo)致多例患者腹痛反應(yīng)。張友志等[10]報(bào)道，一患者因患婦科病服用當(dāng)歸、川芎等配伍益母草的中藥湯劑，口服2次后，出現(xiàn)咽喉麻木，面部潮紅、發(fā)脹、頭暈，以及心慌、雙下肢乏力，行走不穩(wěn)等過敏癥狀，分析認(rèn)為是因益母草所含的益母草堿對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具先興奮后麻醉的作用而致，后將方中益母草改為澤蘭再服用，未出現(xiàn)異常。

2 益母草毒性的實(shí)驗(yàn)研究

2.1 益母草及其提取物的毒性作用研究 益母草同屬的多種植物在民間作為益母草使用，陳紅賓等[11]取5種益母草水提物，分別灌胃、腹腔注射給予小鼠，測定LD50值，結(jié)果大花益母草（益母草）灌胃給藥的LD50大于120 g生藥/kg，腹腔注射給藥的LD50為（20.60±0.06）g生藥/kg，細(xì)葉益母草毒性偏大，紫花益母草和強(qiáng)心益母草毒性次之，大花益母草和保加利亞益母草的的毒性最小，提示益母草的毒性與其來源品種有關(guān)。孫蓉等[12]取益母草水煎液，按高劑量90 g/kg、低劑量30 g/kg灌胃給予大鼠，連續(xù)給藥90 d，并進(jìn)行停藥30 d的恢復(fù)期檢查，結(jié)果高、低劑量組使尿常規(guī)和尿微量蛋白明顯異常，使腎功能指標(biāo)血肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平明顯升高，高劑量給藥使血中肝功能指標(biāo)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平明顯升高，并且高劑量組大鼠腎組織有間質(zhì)纖維組織增生、腎小管上皮細(xì)胞濁腫的病理改變，停藥 30 d后，益母草所造成的損傷不能完全恢復(fù)至正常水平，高劑量給藥所致的間質(zhì)纖維化幾乎不能恢復(fù)。羅毅等[13]取益母草煎液，以60 g/（kg·d）劑量（相當(dāng)于成人日用量30 g的等效劑量的20倍）灌胃給予大鼠15 d。給藥15 d后，大鼠血清中ALT、AST、BUN、Cr和尿N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）、尿蛋白指標(biāo)水平明顯升高，肝、腎組織可見炎性細(xì)胞浸潤等輕度病理改變，表明益母草大劑量較短期使用可致大鼠肝腎毒性損傷，且經(jīng)15 d恢復(fù)該毒性影響不完全可逆。國外學(xué)者對益母草的長期毒性也進(jìn)行了相關(guān)的研究。Han So-Ri等[14]取朝鮮產(chǎn)益母草水提取物，分別以125、250、500、1 000、2 000 mg/kg/d劑量灌胃給予F344大鼠13周，評價(jià)益母草的毒性，結(jié)果給藥組大鼠的行為均無異常，尿常規(guī)、血液流變學(xué)和血清生化檢測指標(biāo)水平均無明顯變化，所有組織和臟器的形態(tài)組織學(xué)檢查中僅2 000 mg/（kg·d）劑量給藥組可見前胃鱗狀上皮細(xì)胞增生，表明在文中實(shí)驗(yàn)條件下，益母草水提物給藥劑量為1 000 mg/（kg·d）時(shí)對大鼠無明顯損害作用，由此推算，若以安全系數(shù)100倍考慮，人每日允許攝入益母草水提物的量應(yīng)為1 000 mg/kg體質(zhì)量。但其研究未明確表明益母草大劑量、長期給藥具有毒性。呂莉莉等[15]考察了益母草醇提和水提物對小鼠的急性毒性，結(jié)果益母草提取物的毒性靶器官主要為腎臟、肝臟，腎臟毒性大于肝臟，短期大劑量給藥未造成明顯肝、腎實(shí)質(zhì)性損害。

現(xiàn)有文獻(xiàn)多報(bào)道益母草具有肝、腎毒性，也有文獻(xiàn)報(bào)道了益母草對生殖系統(tǒng)的作用。任淑君等[16]以不同濃度的益母草浸膏液加入到液化的人精液中，以改良的Sander-Cramer試驗(yàn)方法測定精子的活性，記錄不同時(shí)間及不同濃度藥液的殺精效果，結(jié)果益母草有明顯的殺精效果，且殺精作用隨藥液濃度增加而增加。此體外研究結(jié)果提示益母草可能具有遺傳毒性。為了評價(jià)益母草對生殖細(xì)胞的遺傳毒性，朱玉琢等[17-19]采用小鼠精子畸形試驗(yàn)、精原細(xì)胞姐妹染色單體互換（SCE）試驗(yàn)和小鼠精子非程序DNA合成試驗(yàn)，從細(xì)胞、染色體和分子不同水平，全面考察益母草對雄性小鼠生殖細(xì)胞的遺傳毒性，結(jié)果在實(shí)驗(yàn)所用劑量范圍（相當(dāng)于人臨床常用量的5、10、20、40倍）內(nèi)，益母草未引起小鼠精子畸形頻率和精原細(xì)胞SCE頻率增高,亦不能誘導(dǎo)雄性小鼠生殖細(xì)胞非程序DNA合成（UDS）；益母草對對醋酸鉛所誘發(fā)的小鼠精子畸形、精原細(xì)胞SCE和精子UDS有明顯抑制作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明益母草本身對雄性生殖細(xì)胞無遺傳損傷作用，并對雄性小鼠生殖細(xì)胞遺傳物質(zhì)具保護(hù)作用。上述研究結(jié)果提示益母草只具體外殺精作用，體內(nèi)并無生殖毒性。

益母草主要含有生物堿類、二萜類、揮發(fā)油類等成分。其中生物堿類成分具有抗炎、利尿等活性[20]。呂麗莉等[21]用富含生物堿類的益母草醇提取物，以30、60、120 g/kg劑量作為低、中、高劑量連續(xù)灌胃給予大鼠90 d，結(jié)果三個(gè)劑量的醇提物均可使大鼠尿常規(guī)、尿微量蛋白明顯異常，使大鼠血清BUN、Cr水平明顯升高；中、高劑量給藥組大鼠腎臟臟器系數(shù)顯著增大；高劑量組大鼠腎組織病變最嚴(yán)重，表現(xiàn)為間質(zhì)中可見纖維組織增生，腎小管上皮細(xì)胞濁腫明顯，腎近端小管直段處可見上皮細(xì)胞嚴(yán)重壞死，結(jié)果提示益母草醇提取物長時(shí)間給藥可導(dǎo)致大鼠明顯腎毒性損傷，其損傷程度呈一定的劑量依賴關(guān)系，與生物堿的含量成正相關(guān)性，據(jù)此初步判定生物堿類成分是導(dǎo)致益母草產(chǎn)生腎毒性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。呂莉莉等[15]的研究表明益母草醇提物的毒性較水提物大，醇提物中總生物堿含量高于水提物。孫玲等[22]比較了益母草95%乙醇提取物和醇提水沉物對小鼠的急性毒性，醇提物毒性大于醇提水沉物，醇提物中總生物堿含量高于醇提水沉物，水沉工藝能顯著降低總生物堿的含量和毒性，提示水沉工藝除去的脂溶性雜質(zhì)也可能是益母草的毒性成分。孫曉倩等[23]比較了益母草水提物和水提醇沉物對小鼠的急性毒性，水提物毒性大于水提醇沉物，水提物中總生物堿含量大于水提醇沉物中的，醇沉工藝能顯著降低總生物堿的含量和毒性，可能與醇沉除去水溶性雜質(zhì)有關(guān)。上述研究均表明益母草提取物的毒性與總生物堿含量呈一定相關(guān)性。

羅毅等[24]取益母草總生物堿提取物分別以0.615、1.23 g/（kg·d）劑量，相當(dāng)于給予益母草生藥50、100 g/（kg·d），灌胃給予小鼠，連續(xù)給藥15 d，總生物堿對小鼠未表現(xiàn)明顯的肝、腎毒性,僅高劑量時(shí)可使小鼠血清AST水平明顯增高，使部分肝細(xì)胞顆粒變性，影響小鼠肝功能。孫曉倩等[25]以益母草總生物堿提取物給藥，提取物中含鹽酸水蘇堿和益母草堿42.1%，另含未知生物堿成分8.59%，結(jié)果總堿提取物對大、小鼠均可造成急性毒性損傷，對大鼠的毒性大于小鼠，對二者的LD50分別為4.5102、5.7072 g/（kg·d）。

鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿是益母草的主要已知活性成分，是評價(jià)益母草藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)[1]，石金金等[26]考察鹽酸水蘇堿灌胃給予小鼠的急性毒性，以鹽酸水蘇堿5 000 mg/kg為最大給藥劑量（為化學(xué)藥品的極限劑量），測得鹽酸水蘇堿的 LD50或 MTD（最大耐受量）大于5 000 mg/kg，表明鹽酸水蘇堿灌胃給藥對小鼠的急性毒性很低，鹽酸水蘇堿可能為低毒化學(xué)物質(zhì)。張金蓮等[27]以益母草堿低、中、高劑量單次和連續(xù)28 d灌胃給予大鼠，考察益母草堿及其主要代謝物益母草堿葡萄糖醛酸結(jié)合物（leonurine-O-glucuronide）在體內(nèi)的毒代動(dòng)力學(xué)，結(jié)果益母草堿具吸收快和代謝快的特點(diǎn)，在體內(nèi)主要以其代謝物形式存在，益母草堿及其主要代謝物在體內(nèi)未見明顯的蓄積，試驗(yàn)中亦未見益母草堿對大鼠有明顯的毒性作用。富顯祖等[28]以鹽酸益母草堿5 000 mg/kg為最大給藥劑量，按20 mL/kg容量一次灌胃給予小鼠，測得鹽酸益母草堿的LD50和MTD均大于5 000 mg/kg，提示鹽酸益母草堿急性毒性甚低。

關(guān)于益母草醇提物、水提物、總生物堿提取物的毒性研究表明益母草的毒性與生物堿含量相關(guān)，益母草的毒性物質(zhì)基礎(chǔ)可能是生物堿成分，也可能是水沉工藝除去的脂溶性雜質(zhì)，而醇沉工藝也可能除去益母草的毒性成分。為了進(jìn)一步探究益母草產(chǎn)生毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)，羅毅等[29-30]分別考察益母草石油醚提取物、氯仿提取物以60 g/kg 劑量連續(xù)灌胃15 d對大鼠肝、腎的亞急性毒性作用，并考察其停藥15 d后的可逆性。結(jié)果可見血中ALT、AST 、BUN、Cr和尿蛋白、尿NAG水平明顯升高，肝、腎組織可見腫脹、少量炎細(xì)胞浸潤等病理損傷。停藥后，大鼠的肝腎功能指標(biāo)中除尿蛋白外，其余各指標(biāo)水平均明顯降低，肝腎組織病理損傷也有減輕。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示益母草石油醚和氯仿提取物對大鼠有明顯的肝腎毒性，其毒性影響具有一定的可逆性，但大鼠短期內(nèi)尚不能恢復(fù)正常。研究提示益母草致毒性的成分可能主要存在于其石油醚提取物中。

2.2 益母草毒性作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究 益母草可導(dǎo)致肝、腎等不同臟器毒性，其中益母草的腎臟毒性尤為引起醫(yī)藥界人士的高度重視，對益母草致腎臟損傷為主的不良反應(yīng)及其機(jī)制研究已取得了一定的進(jìn)展。為了探討益母草醇提物導(dǎo)致大鼠腎毒性的病理損傷機(jī)制，黃偉等[31]取益母草醇提物，以30、60、120 g/kg劑量作為低、中、高劑量灌胃給予大鼠45 d，測定與氧化損傷機(jī)制密切相關(guān)的指標(biāo)，結(jié)果益母草醇提物可造成大鼠腎組織明顯的病理改變，腎組織損傷程度隨醇提物給藥劑量的增大而加重，醇提物使大鼠血清中丙二醛（MDA）和總巰基（-SH）含量增加，使還原型谷胱甘肽(GSH)含量下降，使、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性下降，因此提出氧化損傷機(jī)制可能是導(dǎo)致益母草醇提物腎毒性的機(jī)制之一。黃偉等[32]又取益母草醇提物，以30、60、120 g/kg劑量灌胃給予大鼠90 d，觀察益母草醇提物長期、大量給藥導(dǎo)致大鼠腎毒性的機(jī)制與氧化損傷的相關(guān)性，結(jié)果益母草醇提取物可引起機(jī)體的氧化應(yīng)激誘導(dǎo)腎細(xì)胞脂質(zhì)過氧化作用增強(qiáng)，機(jī)體氧化應(yīng)激后誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化和組織內(nèi)活性分子-SH損耗而造成腎組織損傷，自由基和氧化損傷機(jī)制在益母草醇提物導(dǎo)致的腎毒性中發(fā)揮重要作用。劉紅燕等[33]將NRK52E大鼠腎小管上皮細(xì)胞用不同劑量（12、36、 60 g/d）的益母草石油醚提取物進(jìn)行處理，體外培養(yǎng)結(jié)果顯示石油醚提取物可使大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡增加，可致NRK52E 細(xì)胞總數(shù)明顯減少。以Western Blotting 方法檢測，小劑量益母草石油醚提取物可使NRK52E 細(xì)胞抗凋亡蛋白（Bcl-2）、血紅素加氧酶-1（H0-1）表達(dá)增加，研究提示益母草石油醚提取物對腎小管上皮細(xì)胞的損傷機(jī)制是引起細(xì)胞凋亡增多, 該機(jī)制并非是通過下調(diào)Bcl-2途徑。

3 益母草減毒的實(shí)驗(yàn)研究

3.1 配伍減毒 孫蓉等取[12]復(fù)方益母膠囊、益母草水煎液分別以低（30 g/kg）、高（90 g/kg）劑量灌胃給予大鼠90 d，比較給藥組大鼠的尿常規(guī)、尿微量蛋白定性、ALT、AST、Cr、BUN等肝、腎功能指標(biāo)的測定結(jié)果，結(jié)果顯示復(fù)方益母膠囊給藥組大鼠的這些指標(biāo)水平低于高劑量益母草水煎液給藥組大鼠，其差異有顯著性意義，表明合理配伍能明顯減輕益母草所致的毒性影響。提示在使用益母草時(shí)，可通過合理的藥物配伍以制約其毒性，預(yù)防其毒性發(fā)生。李曉宇等[34]進(jìn)行不同配伍方式中益母草總生物堿的含量測定及急性毒性比較研究，結(jié)果不同配伍對益母草中總生物堿的含量和毒性各不相同，可通過與當(dāng)歸、川芎、木香等中藥配伍降低益母草中總生物堿的含量達(dá)到減毒的目的,進(jìn)一步證實(shí)了益母草主要生物堿成分含量的降低與復(fù)方配伍減毒的相關(guān)性。

3.2 炮制減毒 黃偉等[35]進(jìn)行了鮮益母草、干益母草、酒炙益母草的乙醇回流提取物對小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)，測得鮮益母草的半數(shù)致死量（LD50）以生藥量計(jì)為83.089 g/kg、干益母草的LD50以生藥量計(jì)為102.93 g/kg，酒炙益母草無法測出LD50值，測得其最大耐受量（MTD）值以生藥量計(jì)為98.0 g/kg，相當(dāng)于成人每公斤體重日用量的228.7 倍（成人體質(zhì)量以70 kg計(jì)），急性毒性作用的大小順序?yàn)轷r益母草＞干益母草＞酒炙益母草，表明炮制可降低益母草的毒性。程軒軒等[36]采用高效液相色譜法考察了不同炮制方法和不同提取溶劑對益母草中有效成分益母草堿、蘆丁和金絲桃苷含量的影響，測得炮制品中3種成分含量為：生品＞醋炙品＞酒炙品，炮制后益母草堿與黃酮類成分金絲桃苷的含量明顯降低。由于益母草的毒性物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確，對炮制減毒的機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

4 結(jié)語

縱觀有關(guān)益母草毒性作用的實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道，不同文獻(xiàn)所報(bào)道的益母草致毒性作用的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果有一定差異，這不僅與實(shí)驗(yàn)所用益母草的基源、給藥劑量和給藥時(shí)間的不同有關(guān)，應(yīng)該也與益母草藥材本身因產(chǎn)地、生境、采收時(shí)間等因素所致的質(zhì)量差異密切相關(guān)，對此應(yīng)做進(jìn)一步細(xì)致比較?？傮w來看，對于益母草毒性的研究目前尚不系統(tǒng)、深入，現(xiàn)有的研究結(jié)果也不盡一致，益母草的毒性是源于其所含的生物堿類成分還是其它脂溶性成分至今尚不明確，致益母草毒性作用的化學(xué)成分還有待進(jìn)一步分離、確證，益母草的毒性與給藥劑量、給藥時(shí)間的相關(guān)性有待闡明，益母草的毒性與產(chǎn)地、生境、采收時(shí)間的相關(guān)性也有待闡明。益母草是一味臨床上應(yīng)用非常廣泛的中藥，為保證臨床用藥安全，在臨床使用益母草時(shí)必須十分重視益母草的毒性，合理控制其用藥劑量、用藥時(shí)間，并要注意其與其它藥味的合理配伍，積極探索有效的炮制減毒工藝，以避免益母草的不良反應(yīng)或毒性的發(fā)生，最大限度地發(fā)揮益母草的良好療效，使之更好地造福于人類。