脾虛證的免疫學(xué)機制研究進展*

★ 舒晴 喻松仁* 白洋 姚琦 王萍

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)研究生院 南昌 330004；2.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330004 )

脾虛證泛指因脾氣虛損而引起的以脾的生理功能失常為主要表現(xiàn)的病理現(xiàn)象和病癥，包括脾氣虛、脾陽虛、脾虛氣陷、脾不統(tǒng)血等。脾虛證大多由飲食不節(jié)、勞倦過度、憂思傷脾或年老體衰、久病耗氣所致。李東垣《脾胃論·脾胃盛衰論》中曰:“百病皆由脾胃衰而生也”，可見人體疾病的發(fā)生與脾胃功能受損密切相關(guān)?！端貑枴みz篇刺法論》云：“正氣存內(nèi)，邪不可干”，脾為“后天之本”“氣血生化之源”，主運化而化生氣血，脾胃功能健旺可以滋養(yǎng)人體正氣，是增強人體抗病能力的基礎(chǔ)；“邪之所湊，其氣必虛”，當(dāng)人體正氣虛弱，無力抗邪時，邪氣便侵襲人體而致病，故《靈樞·本臟篇》中有“脾堅，則臟安難傷”之說?，F(xiàn)代免疫學(xué)研究也表明，傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)中所說的“脾”是人體中最大的淋巴網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，有著廣泛的免疫學(xué)內(nèi)涵。另外，脾的防御功能與人體免疫機制亦十分相似。故，本文將從免疫學(xué)機制的角度綜述學(xué)者們關(guān)于脾虛證本質(zhì)的研究。

1 脾虛證與免疫器官的超微結(jié)構(gòu)

免疫器官主要包括脾臟、胸腺、骨髓和肝臟。結(jié)構(gòu)決定功能，因此，免疫器官的超微結(jié)構(gòu)變化往往是其功能異常的物質(zhì)基礎(chǔ)。目前，脾虛證與免疫器官的研究主要是實驗動物模型。上世紀90年代吳玲霓等[1]就通過實驗研究發(fā)現(xiàn)了脾虛動物的脾臟和胸腺免疫器官超微結(jié)構(gòu)遭到了嚴重破環(huán)；王運平等[2]檢測脾虛小鼠的脾重、脾重指數(shù)、胸腺重量及胸腺指數(shù)，發(fā)現(xiàn)各項指標(biāo)均明顯低于正常小鼠，且具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。此后，眾多學(xué)者復(fù)制脾虛證動物模型進行研究，均發(fā)現(xiàn)脾虛動物的脾臟和胸腺等免疫器官的發(fā)育受到了限制。陳芝喜等[3]觀察到脾虛模型動物脾臟、胸腺等臟器組織增殖減弱。王洪海等[4]研究發(fā)現(xiàn)脾虛證大鼠胸腺、脾重量明顯降低。黃秀深等[5]造模20d后觀測亦發(fā)現(xiàn)濕困脾胃證大鼠脾臟、胸腺濕重大幅減輕(P<0.01)，且胸腺皮質(zhì)厚度及脾臟中央動脈淋巴鞘直徑明顯變小(P<0.01)，可見脾虛大鼠免疫器官的正常發(fā)育會受到抑制。而采用健脾益氣方藥治療，可使脾虛動物已被破壞的免疫器官結(jié)構(gòu)及體重逐漸恢復(fù)到正常水平。如王珺等[6]研究發(fā)現(xiàn)不同劑量四君子湯治療后脾虛證小鼠的體重、脾臟和胸腺指數(shù)均能有所提高；廖樂樂等[7]研究亦表明經(jīng)健脾藥物干預(yù)后脾虛小鼠的免疫器官功能得到明顯提高。劉海濤等[8]證實補氣健脾藥物能明顯改善脾虛證大鼠的體重、脾臟及胸腺指數(shù)降低的現(xiàn)象。綜上，說明脾虛證與免疫器官的超微結(jié)構(gòu)之間是密切相關(guān)的。

2 脾虛證與特異性免疫

2.1 脾虛證與細胞免疫 細胞免疫即細胞介導(dǎo)免疫，是以淋巴細胞、巨噬細胞、紅細胞等免疫細胞發(fā)揮清除異物作用，其中以T淋巴細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答最為關(guān)鍵。

2.1.1 脾虛證與T淋巴細胞及相關(guān)細胞因子 T淋巴細胞源于骨髓中多能干細胞，在胸腺內(nèi)分化成熟，成為具有免疫活性的T淋巴細胞。臨床及實驗研究均表明脾虛證與T淋巴細胞及相關(guān)細胞因子表達相關(guān)，脾虛時外周血T淋巴細胞百分比明顯低于正常值，T淋巴細胞亞群CD4+T與CD8+T比值也異常[9]。張聲生等[10]研究發(fā)現(xiàn)脾虛證和脾虛痰濕證患者的外周血T細胞亞群CD4+T及CD4+/CD8+比值較健康人明顯下降，可見不論是脾虛證還是脾虛痰濕證，其細胞免疫功能都明顯下降。萬生芳[11]制作脾虛大鼠模型進行研究，結(jié)果顯示脾虛證大鼠CD3+T、CD4+T細胞較空白對照組下降,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。脾虛不僅影響T淋巴細胞亞群的表達，而且與相關(guān)細胞因子表達之間也存在一定的關(guān)聯(lián)性。細胞因子(CK)是細胞信號傳遞的使者，能參與免疫細胞的分化并調(diào)節(jié)機體的免疫應(yīng)答。王洪海等[4]研究脾虛證大鼠免疫系統(tǒng)變化特點時發(fā)現(xiàn)脾虛證大鼠IL-1β表達顯著降低，IL-2、TNF-α表達不穩(wěn)定。王明明等[12]實驗研究結(jié)果也顯示，脾虛證與細胞因子表達之間具有高度的相關(guān)性?？梢?，脾虛證與T淋巴細胞及相關(guān)細胞因子的表達密切相關(guān)。同樣，健脾藥物的治療能明顯糾正T淋巴細胞及相關(guān)細胞因子的異常表達，如陳勇等[13]發(fā)現(xiàn)防己黃芪湯灌胃治療可提升脾虛小鼠T淋巴細胞增值能力并使IL-2表達恢復(fù)到正常水平。趙盛云等[14]發(fā)現(xiàn)四君子湯可明顯增加脾虛大鼠胃黏膜CD4+T細胞數(shù)量并降低CD8+T細胞的數(shù)量。李宏宇等[15]采用四君子湯治療脾虛證小鼠，亦證實能使其T淋巴細胞增殖能力得到提升。此外，針刺治療對脾虛證亦有一定療效，曾榮華等[16]通過針刺大鼠“足三里”穴發(fā)現(xiàn)可明顯改善脾虛證大鼠納差、便溏、泄瀉等癥狀并有效調(diào)節(jié)脾虛證大鼠腸系膜淋巴結(jié)T淋巴細胞亞群的平衡,維持機體的免疫穩(wěn)態(tài)。

2.1.2 脾虛證與紅細胞 紅細胞是血液中數(shù)量最多的的一種血細胞，也是血液中運送氧氣的最主要載體，同時還具有一定的免疫功能。紅細胞參與機體免疫反應(yīng)，主要發(fā)揮增強吞噬、去除循環(huán)免疫復(fù)合物和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答等作用[17]。自Siegel1981年提出紅細胞具有免疫功能后，學(xué)者們開始對此展開研究。研究發(fā)現(xiàn)，脾虛證對紅細胞免疫功能的影響主要體現(xiàn)在酶母菌紅細胞C3b受體花環(huán)率(RBC-C3b-RR)及紅細胞免疫復(fù)合物花環(huán)率(RBC-Ic-RR)上，而與紅細胞總數(shù)之間無明顯直接聯(lián)系。田維毅等[18]通過檢測脾虛大鼠RBC-C3b-RR、RBC-Ic-RR以及紅細胞總數(shù)觀察紅細胞的免疫功能時，發(fā)現(xiàn)脾虛大鼠RBC- C3b-RR、RBC-Ic-RR均明顯低于正常對照組。王紅偉等[19]研究脾虛大鼠血液成分時亦發(fā)現(xiàn)脾虛組RBC-C3b-RR、RBC-Ic-RR明顯低于正常組。此外，蔡琨等[20]通過番瀉葉制作的脾虛模型組大鼠RBC-C3b-RR也顯著低于正常對照組(P<0.05)。研究表明，脾虛證與紅細胞免疫功能之間有明顯的關(guān)聯(lián)性。

2.2 脾虛證與體液免疫 體液免疫是通過B細胞產(chǎn)生的抗體來發(fā)揮保護目的的免疫機制。脾虛證與體液免疫的關(guān)系主要表現(xiàn)為免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)和補體(C3、C4)含量的異常。李家邦與溫慶祥等[21-22]分別通過臨床和實驗研究探討四君子湯對機體免疫功能的影響，李氏研究發(fā)現(xiàn)脾虛模型大鼠的血清IgM水平會顯著降低，而治療后能明顯提高，溫氏亦檢測到脾虛患者經(jīng)四君子湯治療后血清IgA、IgG、IgM水平明顯升高。二人采用不同實驗對象證明了脾虛證與血清免疫球蛋白水平之間的關(guān)系并發(fā)現(xiàn)健脾方藥治療能使異常的免疫功能恢復(fù)正常。此外，李宏宇等[13]用四君子湯給脾虛小鼠灌胃后，發(fā)現(xiàn)脾虛小鼠B淋巴細胞增殖的能力明顯增強，各項免疫指標(biāo)都有所恢復(fù)。朱萱萱等[23]研究結(jié)果亦提示溫脾實腸顆粒和溫脾實腸合劑具有促進脾陽虛小鼠血清中溶血素抗體生產(chǎn)的作用，能有效增強體液免疫功能。聶建華等[24]研究發(fā)現(xiàn)土人參根水煎液可以明顯提高脾氣虛大鼠IgM、IgG、C3、C4水平。綜上可見，脾虛會影響B(tài)細胞抗體的表達而采用健脾法可明顯提高體液免疫功能。

2.3 脾虛證與局部免疫 分泌型IgA(SIgA) 是機體黏膜局部抗感染免疫的主要抗體，在腸道黏膜免疫中起到關(guān)鍵作用。研究表明，與正常人相比脾虛證患者唾液中SIgA含量明顯偏低。陳永輝等[25]通過檢測腸道相關(guān)指標(biāo)發(fā)現(xiàn)脾虛患兒腸道局部免疫功能低下。徐世軍等[26]檢測脾虛大鼠SIgA發(fā)現(xiàn)SIgA含量明顯低于正常對照組。孫理軍等[27]觀察大鼠脾虛與唾液免疫的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠唾液溶菌酶增高、SIgA降低，表明脾虛會導(dǎo)致大鼠唾液免疫功能的紊亂。張博等[28]研究脾虛老齡大鼠腸道免疫功能時發(fā)現(xiàn)脾虛組大鼠腸黏膜sIgA分泌減少，四君子湯組大鼠腸黏膜sIgA分泌增加。

3 脾虛證與非特異性免疫

非特異性免疫即與生俱來的先天免疫，能對各種病原微生物作出快速反應(yīng)，而且在特異性免疫過程中也發(fā)揮重要作用。脾虛證非特異性免疫功能的異常主要表現(xiàn)為固有免疫細胞和固有免疫分子的異常表達。溫慶祥等[22]曾發(fā)現(xiàn)脾虛大鼠的IL-4、IL-8水平明顯下降。段永強等[29]通過研究發(fā)現(xiàn)脾虛證進程中小鼠非特異性免疫功能低下(P<0.05)，脾虛小鼠腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數(shù)，T、B淋巴細胞增殖反應(yīng)及NK細胞活性明顯受到影響。同樣，健脾藥物的干預(yù)能使紊亂的細胞表達得以改善。顧紅纓等[30]研究發(fā)現(xiàn)補中益氣湯治療能使脾虛小鼠IL-2表達增強。趙寧等[31]觀察發(fā)現(xiàn)四君子湯可以使脾虛證大鼠異常的TGF-β、TNF-α表達恢復(fù)正常。米娜[32]采用利血平制備脾虛模型，發(fā)現(xiàn)脾虛小鼠的RBC-C3bR、RBC-IC花環(huán)率，脾NK細胞活性，巨噬細胞活性，脾及胸腺指數(shù)等指標(biāo)均明顯低于正常值(P<0.01)。童光東等[33]研究發(fā)現(xiàn)溫補培元方組動物的巨噬細胞功能、脾細胞NK細胞活性與脾虛等病理模型組相比有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。

4 脾虛證與免疫遺傳

免疫遺傳即包含免疫又涵蓋了遺傳方面的內(nèi)容。目前為止，對于脾虛證與免疫遺傳之間關(guān)聯(lián)性的系統(tǒng)研究較少，而且主要集中在基因和細胞凋亡兩個領(lǐng)域。其中關(guān)于脾虛證與基因的研究報道比較匱乏，劉曉穎等[34]最早從癌基因P53角度揭示了脾氣虛證在胃癌前病變中的重要作用。此外，張世平等[35]探究脾虛證患者與人類白細胞抗原(HLA)之間的關(guān)聯(lián)性，結(jié)果顯示脾虛證與HLA-B22之間存在顯著相關(guān)性(P<0.015),提示脾虛證的本質(zhì)可能有與免疫遺傳學(xué)因素存在一定關(guān)系。曾益宏[36]通過臨床與實驗相結(jié)合的方法研究脾虛證與線粒體基因多態(tài)性相關(guān)性，結(jié)果提示脾虛證存在著基因的多態(tài)性及基因的異常表達。細胞凋亡方面，徐珊等[37]研究發(fā)現(xiàn)氣陰兩虛型慢性胃炎胃粘膜中促進細胞凋亡的基因蛋白Bax、Fax、P16的表達減弱，細胞凋亡受到抑制。近年來隨著現(xiàn)代免疫遺傳研究技術(shù)的成熟，從分子和蛋白表達的角度亦發(fā)現(xiàn)脾虛影響其相關(guān)指標(biāo)的表達。鄭愛華等[38-39]通過研究發(fā)現(xiàn)大鼠脾虛時PKCmRNA和IFN-rmRNA表達水平明顯低于正常對照組，IL-4rmRNA表達水平顯著高于正常對照組。劉海濤等[8]研究發(fā)現(xiàn)脾虛模型大鼠小腸黏膜中SGLT1、GLUT2蛋白表達均顯著降低(P<0.05)。

5 脾虛證與神經(jīng)內(nèi)分泌

神經(jīng)內(nèi)分泌是神經(jīng)學(xué)和內(nèi)分泌學(xué)之間的邊緣學(xué)科，與免疫功能之間密切相關(guān)，故認為其與脾虛證之間亦存在一定的關(guān)聯(lián)性。夏天等[40]研究發(fā)現(xiàn)脾虛時下丘腦、垂體、甲狀腺的合成、分泌及調(diào)控功能均低下，從而影響激素水平，這些都會導(dǎo)致機體免疫功能的下降。李剛等[41]通過研究發(fā)現(xiàn)脾虛證大鼠額葉皮質(zhì)血清亮氨酸-腦啡肽(L-EK)含量明顯低于正常組(P<0.05)，各腦區(qū)L-EK含量較正常組顯著升高(P<0.01)。而L-EK可能會通過下丘腦-垂體-甲狀腺軸影響并削弱免疫功能。呂琳等[42]研究發(fā)現(xiàn)脾虛大鼠腦-腸軸β-內(nèi)啡肽(β-EP)與紅細胞免疫功能相關(guān)，且不同部位與相同免疫指標(biāo)之間的關(guān)聯(lián)性存在差異。溫慶祥等[43]研究四君子湯對脾虛大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)功能的影響，檢測結(jié)果顯示脾虛組血清胃泌素、胃動素、醛固酮等的水平較治療組明顯降低，可見脾虛會引起神經(jīng)內(nèi)分泌免疫功能的下降。李志強等[44]檢測脾虛證大鼠血清性激素和甲狀腺激素水平發(fā)現(xiàn)脾虛模型大鼠血清雌二醇(E2)及甲狀腺素(T4)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)含量比正常對照組明顯升高(P<0.01), 睪酮(T)含量比正常對照組降低(P<0.05)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

6 小結(jié)

綜上所述，可見脾與免疫系統(tǒng)關(guān)系密切，脾虛證與免疫功能低下十分相似，從免疫學(xué)機制的角度探究脾虛證的本質(zhì)研究取得了一定的進展，但主要是基于實驗動物模型的觀察，臨床驗證較少。而如今臨床中肥胖癥、高血壓、糖尿病等各類代謝性疾病的發(fā)病率急劇上升，由此引發(fā)的各類心血管疾病及癌癥也嚴重危害著人類的健康，從中醫(yī)辨證的角度究其病因發(fā)現(xiàn)均與脾虛有著密不可分的聯(lián)系，脾虛生痰、脾失健運均會導(dǎo)致機體免疫力的下降而致生病。因此，隨著脾虛證診斷標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)范化、脾虛證動物模型研究的成熟化及現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，探求脾虛證的內(nèi)在本質(zhì)，是從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度找到疾病發(fā)生原因的關(guān)鍵。找尋脾虛證的本質(zhì)，了解疾病發(fā)生的根源，才能更好的做到治病求本、未病先防，為臨床疾病診治和預(yù)防提供借鑒，給科研提供更多新思路。