銀杏酸的藥理作用及銀杏葉提取物脫酸方法研究進(jìn)展

邵澤艷 姜艷秋

（1.山東郯城醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)園管理委員會(huì)，山東 臨沂 276100；2.山東仁和制藥有限公司，山東 臨沂 276100）

銀杏（GinkgobilobaL.）為銀杏科銀杏屬多年生落葉喬木［1］。銀杏葉具有很高的藥用價(jià)值，銀杏葉提取物（GinkgoBilobaExtract）的主要活性成分為黃酮醇苷、萜類內(nèi)酯和銀杏酸［2］。黃酮醇苷與萜類內(nèi)酯分別具有抗氧化、抗血小板聚集及改善記憶、增強(qiáng)免疫等藥理作用，可用于防治腫瘤、心血管等疾?。?］。銀杏酸類化合物具有致過(guò)敏、抗腫瘤、抗病毒、抗炎、抗氧化和致突變等作用，可用于防治農(nóng)業(yè)病蟲害、抑制痤瘡致病菌等［4］。但有研究顯示服用銀杏類制劑會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重不良反應(yīng)，主要原因與其殘留的銀杏酸（GA）相關(guān)［5］。為此，本文就銀杏酸的藥理作用及銀杏葉提取物脫酸方法進(jìn)行綜述，為提高銀杏的綜合利用價(jià)值、加快銀杏產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供借鑒。

1 藥理作用

銀杏酸（GA）是6-烷基或6-烯基水楊酸的衍生物，主要存在于銀杏外種皮中。銀杏酸具有強(qiáng)烈的殺菌、抗病激活、抗腫瘤等活性，已應(yīng)用于生物農(nóng)藥、化妝品等方面。為此，了解銀杏酸的藥理作用對(duì)合理開發(fā)銀杏資源具有重要意義。

1.1 殺菌、抑菌作用

張秀麗等［6］在研究銀杏酸對(duì)痤瘡致病菌生長(zhǎng)影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)銀杏酸對(duì)痤瘡致病菌有良好的生長(zhǎng)抑制作用。耿敬章等［7］用乙醇浸提銀杏種皮提取銀杏酸，利用濾紙片擴(kuò)散法對(duì)銀杏酸的抑菌性進(jìn)行研究，結(jié)果顯示銀杏酸對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、沙門氏菌和白色念珠菌均有一定的抑制作用。張小利等［8］通過(guò)制備銀杏酸凝膠劑，并對(duì)其體外抑菌活性進(jìn)行初步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)銀杏酸凝膠劑對(duì)痤瘡的致病菌金黃色葡萄球菌和丙酸桿菌均顯示不同程度的抑菌活性，其最小抑菌濃度（MinimumInhibitoryConcentration，MIC）分別為31.756mg/mL和0.992mg/mL。

1.2 防治農(nóng)業(yè)病蟲害

林光榮等［9］在綜合國(guó)內(nèi)江蘇、湖北等省區(qū)對(duì)大田作物病原菌物及動(dòng)物病原細(xì)菌的抑菌研究的基礎(chǔ)上，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)銀杏酸對(duì)6種蔬菜病原菌物菌絲生長(zhǎng)均有抑制作用。吳亮等［10］通過(guò)體內(nèi)和體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)銀杏酸具有很好的抗弓形蟲增殖作用。石啟田［11］通過(guò)對(duì)銀杏酚酸類物質(zhì)防治農(nóng)業(yè)害蟲的研究發(fā)現(xiàn)用銀杏酸酚類物質(zhì)制備的生物農(nóng)藥具有很好的防治蚜蟲、菜青蟲、薊馬的效果，與相對(duì)照的化學(xué)農(nóng)藥具有相似的防治效果。

1.3 抗病激活作用

顧保權(quán)等［12］通過(guò)研究銀杏酸對(duì)稻瘟病、白粉病、霜霉病的作用發(fā)現(xiàn)，使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法幾乎均無(wú)防治效果，但經(jīng)過(guò)預(yù)先不同時(shí)間處理后再接種植物病原菌則具有一定防治效果，這說(shuō)明銀杏酸具有抗病激活作用。

1.4 抗腫瘤作用

王輝等［13］通過(guò)將銀杏酸（GA）與化療藥物聯(lián)用探討銀杏酸對(duì)耐藥細(xì)胞多藥耐藥（MDR）的影響，發(fā)現(xiàn)銀杏酸具有部分逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞耐受化療藥物作用，在維持化療藥物原劑量的情況下，再與銀杏酸聯(lián)用則明顯提高了對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率，而且耐藥細(xì)胞的MDR水平有所下降。周陳晨等［14］通過(guò)觀察不同濃度和不同作用時(shí)間銀杏酸對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞增殖和凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)銀杏酸對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性的生長(zhǎng)抑制作用。徐素琴等［15］在研究銀杏酸單體的抗腫瘤活性試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)GA通過(guò)抑制磷脂酰肌醇磷脂酶C阻止腫瘤細(xì)胞增殖。楊小明等［16］通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)銀杏酸濃度≤5.0μg/mL時(shí)，對(duì)小鼠NIH/313細(xì)胞和轉(zhuǎn)化的正常人腎臟293細(xì)胞的生長(zhǎng)幾乎不產(chǎn)生影響，但對(duì)人肺癌LTEP-a-2、A549細(xì)胞和白血病U937細(xì)胞生長(zhǎng)均產(chǎn)生明顯抑制作用，其作用機(jī)理與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。

1.5 抑制酪氨酸酶活性作用

龔盛昭［17］在研究總銀杏酸對(duì)酪氨酸酶活性的影響及動(dòng)力學(xué)時(shí)發(fā)現(xiàn)總銀杏酸對(duì)酪氨酸酶抑制作用明顯，可抑制酪氨酸酶單酚酶和二酚酶的活力，使得單酚酶和二酚酶活力下降50%的總銀杏酸質(zhì)量濃度（IC50）分別約為0.03、0.20g/L。莊江興等［18］通過(guò)研究銀杏外種皮提取的銀杏酸同系物單體GA1對(duì)酪氨酸酶和黑色素瘤細(xì)胞B16的作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，GA1在低濃度范圍內(nèi)對(duì)小鼠黑色素細(xì)胞B16無(wú)毒害作用，并且可抑制酪氨酸酶表達(dá)及黑色素的生成。

1.6 損害神經(jīng)系統(tǒng)

楊曉敏［19］的實(shí)用急性中毒手冊(cè)中明確說(shuō)明白果毒被吸收后能夠損害神經(jīng)系統(tǒng)，出現(xiàn)先興奮后抑制癥狀，而且能損害末梢神經(jīng)，導(dǎo)致功能障礙。

1.7 滅釘螺

吳向陽(yáng)等［20］通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)銀杏酸殺滅釘螺效果良好。張聯(lián)恒等［21］通過(guò)研究銀杏酸對(duì)魚的急性毒性時(shí)發(fā)現(xiàn)銀杏酸混合物藥液對(duì)紅鯉魚的致死濃度（LC50）為1.805 mg/L，對(duì)鯽魚苗的LC50為1.930mg/L，依據(jù)48h的LC50毒性分級(jí)，銀杏酸的毒性為中等，銀杏酸對(duì)魚類的急性毒性比化藥氯硝柳胺低，與植物滅螺劑麻風(fēng)樹籽提取物、黃姜滅釘螺劑對(duì)魚類的毒性類似。

1.8 損傷線粒體功能

孫鍇等［22］研究發(fā)現(xiàn)銀杏酸對(duì)心臟線粒體呼吸功能具有明顯的抑制作用，并可降低線粒體的膜電位，增強(qiáng)MPTP的開放，從而誘發(fā)心肌細(xì)胞凋亡。2年后，孫鍇等［23］通過(guò)對(duì)線粒體的功能評(píng)價(jià)首次闡明了銀杏酸對(duì)肝臟線粒體的損傷作用，銀杏酸對(duì)線粒體呼吸功能抑制作用呈劑量依賴性，并對(duì)氧化磷酸化有解偶聯(lián)作用。

2 銀杏葉提取物脫酸方法

銀杏酸的脫酸方法主要有有機(jī)溶劑提取法、微波輔助提取、超聲輔助提取、樹脂提取和超臨界二氧化碳萃取等，在這些脫酸方法中，應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)的主要是樹脂提取和超臨界二氧化碳萃取。

2.1 樹脂提取

秦俊哲［24］在研究不同大孔樹脂（D101、DA201、DM301、DS401）對(duì)銀杏酸的吸附分離特性中發(fā)現(xiàn)，大孔吸附樹脂DA201在靜態(tài)吸附4h后達(dá)到吸附平衡，當(dāng)銀杏酸粗提取液的濃度為0.45mg/mL，動(dòng)態(tài)上樣流速為1mL/mL時(shí)，吸附銀杏酸效果較好，樹脂吸附容量為59.00mg/g。同時(shí)，當(dāng)乙醇洗脫劑的濃度為95%，洗脫速度為1mL/min時(shí)，解析率為98.46%，銀杏酸純度較高，達(dá)到83.4%。在這4種大孔樹脂中DA201的吸附分離特性最優(yōu)。安曉東等［25］以銀杏葉提取物中銀杏酸含量為指標(biāo)，研究了大孔樹脂脫除銀杏葉提取物中銀杏酸的工藝，比較了HDP5000、LX-202、LX-9、ADS-7和ADS-85種大孔樹脂對(duì)銀杏酸的靜態(tài)吸附效果及洗脫效果。發(fā)現(xiàn)HDP5000樹脂脫除銀杏酸效果最好，上樣液銀杏酸濃度為2.5mg/mL，pH為3.5，流速為2BV/h，上樣液為70%乙醇溶液，應(yīng)用這種方法脫酸，銀杏葉提取物中銀杏酸單位含量經(jīng)液相檢測(cè)后小于2mg/kg。

2.2 超臨界二氧化碳萃取

吳向陽(yáng)等［26］對(duì)銀杏葉中有毒成分銀杏酸的超臨界CO2脫除工藝進(jìn)行了研究，通過(guò)三因素三水平正交試驗(yàn)探討了操作壓力、溫度和CO2總流量對(duì)銀杏酸脫除率的影響，發(fā)現(xiàn)在萃取壓力為30MPa、溫度為60℃、總流量為600L時(shí)能夠有效脫除銀杏葉中的銀杏酸，脫除率達(dá)79.1%，經(jīng)過(guò)萃取過(guò)后的銀杏葉中銀杏酸含量為0.25%。沈剛等［27］采用一種改性的超臨界二氧化碳萃取技術(shù)，即應(yīng)用硅膠作為載體，壓力為30MPa，溫度為55℃，8%甲醇作為改性劑，此方法對(duì)銀杏酸的回收率和選擇性非常理想。王志強(qiáng)等［28］利用Agilent1100高效液相色譜儀對(duì)SC-CO2萃取和甲醇回流萃取銀杏果外種皮中的銀杏酸，發(fā)現(xiàn)SC-CO2萃取銀杏外種皮中銀杏酸操作簡(jiǎn)便，萃取率和萃取純度較高，無(wú)溶劑殘留，環(huán)境污染小，優(yōu)于傳統(tǒng)的溶劑萃取法，適于工業(yè)化生產(chǎn)。

3 結(jié)語(yǔ)

國(guó)際上公認(rèn)的銀杏葉提取物的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)是總黃酮≥24%，總內(nèi)酯≥6%，同時(shí)銀杏酸＜5mg/kg。為了加快我國(guó)銀杏產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，中國(guó)藥典委員會(huì)也通過(guò)對(duì)《中國(guó)藥典》2015年版的修訂加大了對(duì)銀杏葉提取物的質(zhì)量控制，雖然現(xiàn)在我國(guó)大多數(shù)銀杏制劑生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的銀杏制劑中銀杏黃酮和內(nèi)脂已經(jīng)達(dá)到或超過(guò)了國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，但銀杏酸含量還比較高，出口受限。為使我國(guó)銀杏產(chǎn)品在國(guó)際上占有一席之地，需要我國(guó)嚴(yán)格把控銀杏葉提取物中銀杏酸的含量。

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