適宜四川達(dá)州地區(qū)栽培的平菇引種試驗(yàn)

孫傳齊 徐建俊 李 彪 趙 輝 馬 潔 徐 德 周 勇

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適宜四川達(dá)州地區(qū)栽培的平菇引種試驗(yàn)

孫傳齊1徐建俊1李 彪1趙 輝1馬 潔1徐 德1周 勇2

（1. 達(dá)州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，四川 達(dá)州 635000；2. 達(dá)州市通川區(qū)蔬菜研究所，四川 達(dá)州 635000）

為了篩選適宜達(dá)州地區(qū)栽培的平菇優(yōu)良菌株，對(duì)當(dāng)?shù)刂髟云贩N及引進(jìn)菌株共13個(gè)進(jìn)行品比試驗(yàn)，經(jīng)過(guò)對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度、子實(shí)體產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率的測(cè)定分析，初步篩選出性狀優(yōu)良的菌株P(guān)1、P5和P13。對(duì)3個(gè)菌株進(jìn)行rDNA-ITS基因鑒定的結(jié)果顯示，3個(gè)菌株的基因片段存在差異，排除同物異名和同名異物菌株，可供達(dá)州地區(qū)應(yīng)用推廣。

平菇；優(yōu)良菌株；品比試驗(yàn)；篩選

平菇（）是一種世界性的食用菌，在我國(guó)分布極廣[1]，其中廣溫平菇又是平菇中栽培量最大且暢銷不衰的品種，具有栽培品種優(yōu)良，栽培技術(shù)成熟，集中于秋冬季栽培，消費(fèi)群體穩(wěn)定等特點(diǎn)。近幾年來(lái)，四川省達(dá)州市出現(xiàn)平菇生產(chǎn)不出菇或不轉(zhuǎn)潮現(xiàn)象，極大地挫傷菇農(nóng)栽培積極性。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，主要是由菇農(nóng)自行引種，品種混雜且長(zhǎng)期無(wú)性繁殖，菌株種性退化造成的[2]。解決這一問(wèn)題的根本措施是引進(jìn)優(yōu)良菌株。但菌株的表現(xiàn)性狀受環(huán)境條件影響較大，同一品種在不同地域的表現(xiàn)有很大差異[3]。筆者自2015年來(lái)先后從國(guó)內(nèi)食用菌科研單位引進(jìn)平菇菌株20個(gè)，2017年對(duì)其中表現(xiàn)較好的13個(gè)菌株進(jìn)行了品比試驗(yàn)研究，初步篩選出適宜達(dá)州市栽培的廣溫平菇優(yōu)良菌株。

1 材料與方法

1.1 供試菌株及編號(hào)

以當(dāng)?shù)刂髟耘嗥贩NP7為對(duì)照，供試菌株共13個(gè)（表1）。各參試菌株經(jīng)同時(shí)復(fù)壯后，擴(kuò)大培養(yǎng)，采用相同的菌種等級(jí)進(jìn)行品比試驗(yàn)。

表1 菌株名稱及來(lái)源

1.2 供試培養(yǎng)基

①母種培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基，馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，加水1 000 mL，pH自然。②原種和栽培種培養(yǎng)基：棉籽殼40%，雜木屑40%，麩皮16%，石灰2%，石膏1%，過(guò)磷酸鈣1%，含水量65%。③出菇培養(yǎng)料：雜木屑73%，棉籽殼12%，麩皮12%，石灰2%，石膏1%，含水量65%。

1.3 試驗(yàn)方法

（1）菌種制作。分母種、原種、栽培種三級(jí)制種，培養(yǎng)基按常規(guī)方法配制、滅菌，接種后置于25～28 ℃溫度下培養(yǎng)[4]。

（2）菌袋制作。根據(jù)配方比例及制袋量分別稱取各種原料。雜木屑和棉籽殼提前預(yù)濕，常規(guī)方法拌料，培養(yǎng)料含水量均控制在65%左右，pH 8.0～8.5，使用規(guī)格為22×38（cm）的聚乙烯筒袋裝料，每袋折合干料2.0 kg，100 ℃常壓滅菌10～12 h。冷卻后（28 ℃以下）按無(wú)菌操作規(guī)程兩頭接種。每個(gè)菌株接種100袋，重復(fù)3次。

（3）菌絲體培養(yǎng)。接種后將各菌株菌種及菌袋置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行避光培養(yǎng)，室溫控制在25～28 ℃，空氣相對(duì)濕度為65%～70%。觀察菌絲的生長(zhǎng)情況，若有雜菌污染，及時(shí)將其揀出。觀察紀(jì)錄各菌株在PDA培養(yǎng)基及培養(yǎng)料中的生長(zhǎng)情況，采用直線生長(zhǎng)測(cè)量法測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，觀察菌絲生長(zhǎng)勢(shì)，比較不同菌株的菌絲生長(zhǎng)情況后用“+”號(hào)記錄菌絲密度和生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)弱。用新復(fù)極差法對(duì)各菌株的生長(zhǎng)速度進(jìn)行差異顯著性分析。菌絲日均生長(zhǎng)速率（mm/d）=菌絲生長(zhǎng)量（mm）/培養(yǎng)天數(shù)（d）。

（4）出菇管理與采收。按常規(guī)方法進(jìn)行[5]。

（5）產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)。記錄統(tǒng)計(jì)各菌株的鮮菇產(chǎn)量，計(jì)算生物學(xué)效率，利用新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析[6]。生物學(xué)效率=（子實(shí)體總產(chǎn)量/干料重）×100%。

（6）拮抗試驗(yàn)。對(duì)綜合性狀優(yōu)良的3個(gè)菌株進(jìn)行拮抗試驗(yàn)。無(wú)菌條件下，將菌齡相同、同等大小的3個(gè)菌絲塊接種于同一平板上，25 ℃恒溫對(duì)峙培養(yǎng)，觀察有無(wú)拮抗反應(yīng)。

（7）抗雜能力試驗(yàn)。對(duì)綜合性狀優(yōu)良的3個(gè)菌株進(jìn)行抗雜能力試驗(yàn)。將供試菌株與青霉菌株接種于同一平板，設(shè)3個(gè)重復(fù)，25 ℃恒溫培養(yǎng)，對(duì)比各菌株的抗菌效果。

（8）rDNA-ITS基因測(cè)序分析。鑒定綜合性狀優(yōu)良的3個(gè)菌株之間的遺傳差異，排除同物異名和同名異物菌株。采用改良的CTAB法提取DNA[7]，通過(guò)PCR擴(kuò)增ITS片段，然后送上海生物工程股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長(zhǎng)情況

參試菌株菌絲顏色變黃白的有P7、P11和P12，發(fā)黃原因可能是菌絲易老化；其余均為潔白。各菌株菌絲長(zhǎng)勢(shì)較強(qiáng)，濃密粗壯。其中，P1、P5和P13菌株菌絲生長(zhǎng)較快，分別為0.74 mm/d，0.72 mm/d和0.71 mm/d，與對(duì)照菌株差異顯著。

表2 供試菌株菌絲的生長(zhǎng)情況比較

注：+++表示菌絲長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，粗壯，整齊；++表示菌絲長(zhǎng)勢(shì)較強(qiáng)，粗壯，較整齊；+表示菌絲長(zhǎng)勢(shì)弱，生長(zhǎng)不整齊。

2.2 子實(shí)體農(nóng)藝性狀

從表3可以看出，P1、P5和P13三個(gè)菌株子實(shí)體農(nóng)藝性狀較好，表現(xiàn)為顏色灰色，菌蓋大而厚，菌柄粗而短，較適合在當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)銷售。

2.3 生物學(xué)效率

從表4可以看出，P1、P5和P13三個(gè)菌株產(chǎn)量較高，生物轉(zhuǎn)化率均在120%以上，其中，P1為130%，P13為126.6%，P5為121.5%，與對(duì)照比差異均達(dá)極顯著。

圖1 供試菌株間的拮抗反應(yīng)

2.4 菌株拮抗試驗(yàn)

拮抗試驗(yàn)表明，P1、P5、P13菌株之間存在拮抗反應(yīng)，拮抗線明顯（圖1）。說(shuō)明3個(gè)菌株間親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，為不同的菌株。

2.5 抗菌試驗(yàn)

由圖2可以看出，將試驗(yàn)菌株與青霉菌株接種在同一平板上進(jìn)行對(duì)峙培養(yǎng)，結(jié)果：P1、P5、P13三菌株都抗青霉菌，其中P13對(duì)青霉抗性較強(qiáng)，完全覆蓋青霉菌落。

表3 供試菌株子實(shí)體農(nóng)藝性狀比較

注：同列數(shù)據(jù)后小寫(xiě)字母不同表示差異顯著（0.05），大寫(xiě)字母不同表示差異極顯著（0.01），表4同。

表4 供試菌株生物學(xué)轉(zhuǎn)化率比較

圖2 供試菌株與青霉的拮抗反應(yīng)

圖3 PCR擴(kuò)增條帶電泳圖譜

2.6 供試菌株ITS序列測(cè)定

3個(gè)菌株ITS擴(kuò)增片段都在650 bp左右（圖3），將3個(gè)菌株ITS測(cè)序結(jié)果引入NCBI blast中，均可找到與其序列相似性超過(guò)99%以上的菌株（表5）。表明3個(gè)菌株為側(cè)耳屬的不同菌株。

表5 供試菌株ITS序列鑒定結(jié)果

3 結(jié) 論

（1）對(duì)供試平菇菌株的各項(xiàng)指標(biāo)比較分析表明：菌株P(guān)1、P5和P13綜合性狀較好，菇體色深，菌蓋大、厚，菌柄短，抗雜力強(qiáng)，轉(zhuǎn)化率均在120％以上，其中，P1的轉(zhuǎn)化率達(dá)到130％。

（2）菌株間的拮抗試驗(yàn)顯示，各菌株間拮抗線明顯，說(shuō)明不是同一菌株。3個(gè)菌株對(duì)青霉菌都有抗性，因此在菌絲培養(yǎng)期間即便感染雜菌，也不必將污染菌包挑出，菌絲可以吃掉雜菌。ITS鑒定結(jié)果表明，3個(gè)菌株的基因片段存在差異，可以排除同種異名和同名異種菌株。

（3）引進(jìn)商品菌株在推廣前，必須先進(jìn)行品比試驗(yàn)[8]，只有掌握各商品菌株綜合農(nóng)藝性狀，生產(chǎn)中才可根據(jù)季節(jié)和當(dāng)?shù)叵M(fèi)者喜好的顏色合理選擇生物轉(zhuǎn)化率較高的菌株栽培。從生產(chǎn)及市場(chǎng)需求分析，菌絲生長(zhǎng)、出菇、轉(zhuǎn)潮快，產(chǎn)量高，子實(shí)體厚實(shí)，褐色或深褐色，商品性好的品種最受生產(chǎn)者和消費(fèi)者喜愛(ài)。因此，綜合各菌株的菌絲生長(zhǎng)情況和生物學(xué)效率，P1、P5和P13為適宜于達(dá)州地區(qū)推廣栽培的菌株。

[1] 果有旺, 班立桐. 5個(gè)平菇菌株農(nóng)藝性狀比較試驗(yàn)[J]. 中國(guó)園藝文摘, 2010(9): 37-38.

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[5] 王賀祥.食用菌栽培學(xué)[Ｍ]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社, 2008.

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Strain comparative test of eurythermicfor cultivation in dazhou

Sun Chuanqi1Xu Jianjun1Li Biao1Zhao Hui1Ma Jie1Xu De1Zhou Yong2

(1. Dazhou Institute of agricultural sciences，Dazhou，Sichuan 635000, China；2. Tongchuan District Institute of vegetables，Dazhou，Sichuan 635000, China)

In order to screen the strains of eurythermicwhich was suitable for cultivation in Dazhou regions,the strain comparative test of 13 different strains ofwere conducted,which were introduced from different provinces and regions in domestic or applied in production currently.After the comparison study on mycelial growth condition, growth period and morphology,as well as yield of 13strains,three good strains with high yield and suitable for cultivation in Dazhou were selected, they were the P1、P5、P13.Three strains were identified by rDNA-ITS gene, and the results showed that the gene fragments of the three strains were different, which excluded synonyms or homonyms strains, which could be applied in oyster mushroom production in Dazhou regions.

; appropriate strains; strain comparative test; screening

S646

A

2095-0934（2018）01-046-04

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系四川創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)專項(xiàng)資金

孫傳齊（1983—），男，助理研究員，主要從事食用菌品種選育、栽培技術(shù)研究。