多管發(fā)酵法與紙片法檢測(cè)水中糞大腸菌群的比較

楊璐　朱雨欣

【摘 要】本文采用多管發(fā)酵法和紙片法同步檢測(cè)了太湖水的糞大腸菌群，并對(duì)兩種方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了比較分析，結(jié)果表明，兩者結(jié)果并無(wú)顯著性差異，且多管發(fā)酵法，操作步驟繁雜、干擾因素多，檢測(cè)周期長(zhǎng)，不適合大批量樣品的分析；紙片法操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)時(shí)間短，適合大批量水樣的分析。

【關(guān)鍵詞】糞大腸菌群；多管發(fā)酵法；紙片法；無(wú)顯著性差異

水是微生物廣泛分布的天然環(huán)境，水的細(xì)菌學(xué)測(cè)定特別是腸道菌的檢驗(yàn)，是研究水體污染和環(huán)境衛(wèi)生的重要指標(biāo)。糞大腸菌群是總大腸菌群的一部分，主要來(lái)自糞便，被糞便污染的水源水如溪水也可能被腸道病原菌污染，從而引起腸道傳染病甚至流行病，因此快速、方便、精準(zhǔn)的糞大腸菌群檢測(cè)方法對(duì)于判斷水體糞大腸菌群的污染狀況和對(duì)于有效預(yù)防、控制流行病有很深遠(yuǎn)的意義。

目前糞大腸菌的測(cè)定方法有多管發(fā)酵法、濾膜法、延遲培養(yǎng)法、紙片法等。多管發(fā)酵法、濾膜法是傳統(tǒng)檢測(cè)方法，干擾多、專一性差、操作繁瑣費(fèi)時(shí)，需要確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，因此檢測(cè)周期較長(zhǎng)，需48～72h，不適合大量樣品的分析。在常規(guī)檢驗(yàn)步驟不能實(shí)現(xiàn)時(shí)，可以用延遲培養(yǎng)法。紙片法依據(jù)環(huán)保部標(biāo)準(zhǔn)HJ 755-2015《水質(zhì) 總大腸菌群和糞大腸菌群的測(cè)定 紙片快速法》，在水質(zhì)監(jiān)測(cè)工作中，紙片法由于其方便高效，應(yīng)用逐年增多。本文采用多管發(fā)酵法和紙片法同步檢測(cè)了太湖水的糞大腸菌群，并對(duì)兩種方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了比較分析。

1 糞大腸菌群的實(shí)驗(yàn)方法

1.1 多管發(fā)酵法

多管發(fā)酵法是根據(jù)大腸菌群在一定溫度下能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣并能使乳糖蛋白胨培養(yǎng)液變黃且產(chǎn)生氣泡的原理，將水樣按三個(gè)10倍遞減的濃度接種到有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中進(jìn)行初發(fā)酵試驗(yàn)，在37℃±0.5℃下培養(yǎng)24±2h，再將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的陽(yáng)性發(fā)酵管中輕微振蕩，用接種環(huán)或滅菌棒轉(zhuǎn)到EC培養(yǎng)液中進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24±2h，發(fā)酵管產(chǎn)氣說(shuō)明糞大腸菌群陽(yáng)性。

1.2 紙片法

每個(gè)水樣按三個(gè)10倍遞減的是濃度接種，每個(gè)濃度梯度分別接種5張紙片。每張大紙片接種10mL水樣，每張小紙片接種1mL水樣，再是1︰10稀釋的水樣接種到5張小紙片中，每張接種1mL，濃度高時(shí)可適當(dāng)稀釋。接種水樣時(shí)要均勻涂抹于紙片上，用手輕輕壓平，做好標(biāo)記，于44.5℃±1℃下培養(yǎng)18～24h。觀察結(jié)果，若紙片上出現(xiàn)紅斑或紅暈且周圍變黃為陽(yáng)性或紙片全部變黃無(wú)紅斑或紅暈也為陽(yáng)性。紙片無(wú)變化，紙片部分變黃無(wú)紅斑或紅暈，紙片不變黃有紅斑或紅暈均為陰性結(jié)果。

1.3 計(jì)算

兩種方法均根據(jù)不同接種量所出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的數(shù)目，從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù)，再經(jīng)下面的公式換算成每100mL的MPN值。

MPN值=MPN指數(shù)×10（ml）/接種量最大的一管（ml）

MPN值再乘10，即為1L水樣中的糞大腸菌群數(shù)。

2 實(shí)際水樣檢測(cè)結(jié)果

用紙片法和多管發(fā)酵法對(duì)8個(gè)實(shí)際水樣中的糞大腸菌群作比對(duì)檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表1。

對(duì)兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行秩和檢驗(yàn)，結(jié)果為t=7，P>0.10，表明紙片法與多管發(fā)酵法檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異。

3 檢測(cè)方法的比較

在糞大腸菌群檢測(cè)方法中多管發(fā)酵法是傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，干擾多、專一性差、操作繁瑣費(fèi)時(shí)，需要確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，不適于大量樣品的分析。但傳統(tǒng)方法均有原理簡(jiǎn)單、費(fèi)用較低、利于推廣的優(yōu)點(diǎn)，因此仍是常規(guī)監(jiān)測(cè)中的主要檢測(cè)方法。

紙片法與多管發(fā)酵法相比，紙片法只需在44.5℃下培養(yǎng)18～24h就可出結(jié)果，紙片法快速省時(shí)簡(jiǎn)單方便，適合大批量監(jiān)測(cè)和應(yīng)急監(jiān)測(cè)。兩者比較見(jiàn)表2。

4 結(jié)論

實(shí)際水樣檢測(cè)結(jié)果證明，紙片法與多管發(fā)酵法檢測(cè)結(jié)果之間無(wú)顯著性差異。但是紙片法的檢測(cè)結(jié)果普遍略低于經(jīng)典的多管發(fā)酵法，這可能是因?yàn)榧埰ㄊ菍⒔臃N后的樣品直接放于44.5℃環(huán)境中培養(yǎng)，而多管發(fā)酵法是將接種后的樣品先置于37℃環(huán)境中進(jìn)行初發(fā)酵試驗(yàn)，再置于44.5℃環(huán)境中復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，比前者多一個(gè)富集過(guò)程。

紙片法具有快速簡(jiǎn)單方便等優(yōu)點(diǎn)，可以較準(zhǔn)確地判斷水樣微生物污染情況，可以作為環(huán)境分析方法中糞大腸菌群的快速篩查方法。因此在工作量大且需要快速判定時(shí)，可采用紙片法替代多管發(fā)酵法。

【參考文獻(xiàn)】

[1]《水質(zhì)總大腸菌群和糞大腸菌群的測(cè)定紙片快速法HJ 755-2015》環(huán)境保護(hù)部，2015.

[2]《水質(zhì)糞大腸菌群的測(cè)定多管發(fā)酵法和濾膜法HJ/T 347-2007》環(huán)境保護(hù)部，2007.endprint