茶樹CsWRKY3基因的克隆及表達(dá)分析

戈林剛+葉保華+辛肇軍+孫曉玲

摘要：WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族普遍存在于植物體內(nèi)，對(duì)植物的多種生理過(guò)程有廣泛的調(diào)控作用，在眾多植物轉(zhuǎn)錄因子家族中占有重要地位。本研究從茶樹中克隆獲得一個(gè)WRKY基因，命名為CsWRKY3，該基因包含一個(gè)1 710 bp的開放讀碼框，編碼569個(gè)氨基酸。qRT-PCR結(jié)果顯示，CsWRKY3在茶樹根、葉、花中的表達(dá)水平較高，在莖、種子中的表達(dá)水平較低。當(dāng)茶樹葉片受到機(jī)械損傷或者被茶尺蠖幼蟲取食時(shí)，CsWRKY3基因被迅速誘導(dǎo)且表達(dá)差異顯著。本研究表明CsWRKY3轉(zhuǎn)錄因子基因參與了茶樹的抗蟲防御反應(yīng)。

關(guān)鍵詞：WRKY轉(zhuǎn)錄因子；茶樹；茶尺蠖；機(jī)械損傷；抗蟲防御

中圖分類號(hào)：S571.1：Q785文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2018）01-0001-08

Abstract WRKY transcription factor family exists widely in plants and has a wide range of regulation effects for a variety of physiological processes in plants， and occupys a very important position in plant transcription factor family. In this study， a WRKY gene， designated as CsWRKY3， was cloned from tea plants， and the open reading frame of CsWRKY3 was 1 710 bp， which encoded 569 amino acids. The results of real-time PCR showed that CsWRKY3 was highly expressed in roots， leaves and flowers， but was weakly expressed in stems and seeds. CsWRKY3 was quickly induced and expressed significantly when the leaves of tea plant were damaged by mechanical damage or eaten by the Ectropis obliqua larvae. This study showed that the CsWRKY3 was involved in defense response against insect pests of tea.

Keywords WRKY transcription factor； Camellia sinensis； Ectropis obliqua； Mechanical damage； Defense against insect pests

WRKY是一類僅存在于高等植物中的轉(zhuǎn)錄因子[1]。WRKY轉(zhuǎn)錄因子具有兩個(gè)重要特征：第一，至少有一個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域含有約60個(gè)氨基酸殘基，且具有WRKYGQK等7個(gè)保守序列；第二，在保守序列后含有一段鋅指結(jié)構(gòu)。根據(jù)所含WRKY結(jié)構(gòu)域數(shù)目和鋅指結(jié)構(gòu)序列的不同，可將WRKY轉(zhuǎn)錄因子分成三類。含有兩個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域且具有C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)的為第Ⅰ類；含有一個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域且具有C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)的為第Ⅱ類；含有一個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域且具有C2HC型鋅指結(jié)構(gòu)的為第Ⅲ類[2]。

自1994年Ishiguro等第一次在甘薯中發(fā)現(xiàn)該轉(zhuǎn)錄因子的存在[3]、1996年Rushton等第一次在歐芹中將此轉(zhuǎn)錄因子命名為WRKY后[4]，研究人員圍繞WRKY做了更深入的研究。研究表明，WRKY轉(zhuǎn)錄因子依靠自身的WRKY結(jié)構(gòu)域與靶標(biāo)基因的W-box特異性結(jié)合，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)下游基因的調(diào)控作用[5]。大量的試驗(yàn)證明，WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與植物生長(zhǎng)和發(fā)育的過(guò)程，其不僅可以調(diào)節(jié)植物種子的發(fā)育及萌發(fā)、影響植物莖稈的生長(zhǎng)速度[6]，還對(duì)植物衰老的延緩或促進(jìn)有一定的調(diào)節(jié)作用[7]。進(jìn)一步的研究顯示，WRKY轉(zhuǎn)錄因子的存在與植物抵抗非生物脅迫息息相關(guān)[8]。如：水稻（Oryza sativa）含有的OsWRKY11對(duì)干旱和高溫脅迫有相應(yīng)的抵抗作用[9]；OsWRKY47可以調(diào)控下游基因的表達(dá)提高水稻抵抗干旱的能力[10]；GmWRKY27的存在可以提高大豆（Glycine max）的抗旱性和抗鹽性[11]。除此之外，WRKY轉(zhuǎn)錄因子還可以調(diào)控植物體對(duì)病蟲害的抵抗能力[12]。當(dāng)受到植食性昆蟲的為害后，植物體內(nèi)WRKY轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化[13]；CmWRKY48在菊花（Chrysanthemum morifolium）防御蚜蟲為害中起到重要作用，過(guò)量表達(dá)可以抑制蚜蟲群體的增長(zhǎng)[14]；水稻OsWRKY89基因的過(guò)表達(dá)可增強(qiáng)水稻對(duì)白背飛虱（Sogatella furcifera）的抗性[15]，OsWRKY53和OsWRKY70基因可以通過(guò)調(diào)節(jié)水稻體內(nèi)茉莉酸（jasmonic acid， JA）、乙烯（ethylene， ET）、水楊酸（salicylic acid， SA）和過(guò)氧化氫（H2O2）的合成來(lái)調(diào)節(jié)水稻對(duì)二化螟（Chilo suppressalis）、褐飛虱（Nilaparvata lugens）的抗性[16]。

茶樹（Camellia sinensis）是一種重要的多年生經(jīng)濟(jì)作物，主要種植于亞洲、非洲、拉丁美洲和大洋洲。茶葉中含有豐富的茶多酚等對(duì)人體有益的化合物，可有效預(yù)防惡性腫瘤的發(fā)生，降低心腦血管疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的出現(xiàn)概率[17]。由于生長(zhǎng)環(huán)境高溫潮濕，茶樹經(jīng)常受到茶尺蠖（Ectropis obliqua Prout）等害蟲的為害導(dǎo)致減產(chǎn)，嚴(yán)重時(shí)甚至絕產(chǎn)[18]。雖然WRKY轉(zhuǎn)錄因子的研究已經(jīng)相當(dāng)全面且深入，但是茶樹上WRKY轉(zhuǎn)錄因子的研究?jī)H局限在WRKY結(jié)構(gòu)分類[19]或其對(duì)于高溫等非生物脅迫的抗性方面[20]，鮮有WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與茶樹抗蟲方面的報(bào)道。本研究基于茶樹轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)克隆獲得一個(gè)WRKY基因，命名為CsWRKY3，對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，并研究茶尺蠖取食和機(jī)械損傷處理茶苗后CsWRKY3的相對(duì)表達(dá)水平，為研究CsWRKY3調(diào)控茶樹抗蟲性提供理論依據(jù)。endprint

1 材料與方法

1.1 供試茶苗

以2年生龍井43號(hào)扦插苗為供試茶苗，培養(yǎng)于（26±2）℃、光周期12 L∶12 D、相對(duì)濕度60%～70%的溫室中，根據(jù)茶苗發(fā)育情況，每季度施用有機(jī)肥一次。選擇長(zhǎng)勢(shì)較齊整、葉層較平均、無(wú)病蟲為害的茶苗用于試驗(yàn)。

1.2 供試?yán)ハx

茶尺蠖蛹取自浙江省紹興市御茶村茶業(yè)有限公司下轄茶園。室內(nèi)區(qū)分雌雄后，分開飼養(yǎng)于溫度（26±2）℃、光周期12 L∶12 D、相對(duì)濕度80%的RXZ智能型人工氣候箱內(nèi)，以幼嫩茶樹葉片作為食物。成蟲羽化并鑒定品種后，雌雄混養(yǎng)，待室內(nèi)穩(wěn)定馴養(yǎng)兩代后，取第三代幼蟲作為試驗(yàn)用蟲。

1.3 茶苗處理及取樣

1.3.1 茶苗不同組織、不同葉位樣品取材 在溫度（26±2）℃、相對(duì)濕度75%的溫室中進(jìn)行試驗(yàn)。選取生長(zhǎng)狀況相近的茶樹，取根、莖、葉、花、種子五種組織器官，每種5組重復(fù)；另分別選取芽下第一、二、三、四葉，每葉位5組重復(fù)。取樣后立刻投入液氮并轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱保存。

1.3.2 茶尺蠖取食處理 在溫度（26±2）℃、相對(duì)濕度75%的溫室中進(jìn)行試驗(yàn)。選擇發(fā)育狀況較均一的3齡茶尺蠖幼蟲（TG）2頭饑餓處理10 h后取食茶苗第二葉位，用規(guī)格為7 cm×5 cm的80目透明網(wǎng)袋套住被取食葉片，防止幼蟲逃逸。對(duì)照組不做任何處理。待TG取食葉片有明顯缺刻時(shí)開始計(jì)時(shí)，于0、1.5、3、6、12、24、48 h后取樣，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5個(gè)重復(fù)，取樣后立刻投入液氮并轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱保存。

1.3.3 機(jī)械損傷處理 在溫度（26±2）℃、相對(duì)濕度75%的溫室中進(jìn)行試驗(yàn)。用自制機(jī)械損傷處理器（用雙面膠包裹10只昆蟲針做成的末端平整的圓柱體）處理茶苗第二葉位，每片處理葉扎200次，對(duì)照組不做任何處理。于機(jī)械損傷0、0.5、1、2、4、8、12、24、48 h后取樣，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5個(gè)重復(fù)，取樣后立刻投入液氮并轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱保存。

1.3.4 樣品總RNA的提取和cDNA的合成 將所取試驗(yàn)樣品用高通量研磨儀在液氮環(huán)境下進(jìn)行研磨后，選用RNAprep Pure植物總RNA提取試劑盒（天根生物科技有限公司）提取樣品茶葉總RNA。提取到的RNA用Nanodrop ND2000（上海普元儀器有限公司）進(jìn)行濃度檢測(cè)，用PrimeScript RT reagent Kit（大連寶生物工程有限公司）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，所得cDNA放在-20℃冰箱內(nèi)待用。

1.4 CsWRKY3基因的克隆

CsWRKY3序列來(lái)源于實(shí)驗(yàn)室茶樹轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，經(jīng)ORF finder軟件確定其具有完整的開放讀碼框?；诖?，用Primer Premier 5.064設(shè)計(jì)序列全長(zhǎng)引物（WRKY3-F：5′-CACCACCCACCACTCACA-3′；WRKY3-R：5′-AAAACCTTCATACCTCCT-3′），以反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，對(duì)目的基因CsWRKY3進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增總反應(yīng)體系為20 μL：PrimeSTAR Max DNA Polymerase 12 μL、WRKY3-F和WRKY3-R各1 μL、cDNA 1 μL、ddH2O 5 μL。PCR擴(kuò)增使用兩步法，程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性2 min；98℃變性10 s，65℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；72℃終延伸5 min。擴(kuò)增所得的PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳、凝膠回收、加多聚腺苷酸（PolyA）并純化后，連接在pMD19-T載體上，連接成功后將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.coli DH5α Competent Cells感受態(tài)細(xì)胞，鑒定陽(yáng)性克隆后，送南京金斯瑞士生物有限公司測(cè)序。

1.5 序列分析

測(cè)序所得核苷酸序列ORF的尋找以及同源性分析比對(duì)利用NCBI網(wǎng)站的ORF finder和BLAST工具完成。利用DNAMAN軟件推測(cè)CsWRKY3基因編碼的氨基酸序列。目的基因編碼蛋白的等電點(diǎn)和分子量預(yù)測(cè)運(yùn)用DNAStar軟件進(jìn)行。利用DNAMAN軟件進(jìn)行不同物種WRKY蛋白序列比對(duì)。使用MEGA5軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。利用在線軟件SWISS-MODEL進(jìn)行蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）

對(duì)反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）。選用SuperReal PreMix Plus （SYBR Green）作為熒光標(biāo)記染料，以茶樹GAPDH（GAPDHF： 5′ATACCACGTCACCTCGGT3′；GAPDHR：5′ACTTATGATGAAATCAAAGCTGC3′）為內(nèi)部參照基因，以CsWRKY3qrtF： 5′CCCTTCACCTTGGAGATGTT3′； WRKY3qrtR：5′AGAGCTCCCAAATCCTGAGA3′為CsWRKY3實(shí)時(shí)熒光定量引物。反應(yīng)總體系為20 μL：SYBR Green SuperReal PreMix Plus 10 μL、上下游引物各1 μL、cDNA 1 μL、ddH2O 7 μL。qRT-PCR反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性30 s；95℃變性5 s，60℃退火30 s，40個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品設(shè)置5個(gè)生物學(xué)重復(fù)。

1.7 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)通過(guò)PASW Statistics 18（Statistica，SAS，Institute，lnc.，Cary，NC，USA）軟件進(jìn)行差異性分析。CsWRKY3在不同組織、不同葉位中的表達(dá)水平使用單因素方差分析法（ANOVA）進(jìn)行比較，若差異顯著（P<0.05），則使用Duncans法進(jìn)一步分析。茶尺蠖幼蟲取食、機(jī)械損傷兩種不同處理下CsWRKY3轉(zhuǎn)錄因子基因的表達(dá)水平使用獨(dú)立樣本T-test進(jìn)行比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶樹CsWRKY3基因的克隆endprint

以茶尺蠖取食的茶樹葉片為材料提取總RNA并反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA。經(jīng)PCR 擴(kuò)增，獲得了大小約為2 000 bp 的特異性條帶（圖1），將克隆到的片段切膠回收連接克隆載體后測(cè)序，得到1 958 bp 的序列，與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的cDNA序列完全匹配。經(jīng)ORF finder軟件預(yù)測(cè)，CsWRKY3基因的開放閱讀框（ORF）全長(zhǎng)1 710 bp，編碼含有569個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)（圖2）。預(yù)測(cè)該蛋白的分子量為62.98 kD，等電點(diǎn)為7.70。使用在線軟件SWISS-MODEL對(duì)蛋白三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)（圖3），該蛋白結(jié)構(gòu)與番茄（Solanum habrochaites）中的ShWRKY4蛋白結(jié)構(gòu)極其相似[21]。

2.2 茶樹CsWRKY3氨基酸序列比對(duì)

在NCBI中對(duì)CsWRKY3進(jìn)行BLAST比對(duì)后，選取相似度高的10種植物的WRKY基因的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果顯示，CsWRKY3與胡蘿卜（Daucus carota，XM_017374603.1）、克萊門柚（Citrus clementina，XM_006431899.1）、陸地棉（Gossypium hirsutum，XM_016867635.1）、落花生（Arachis ipaensis，XM_016311067.1）、亞洲棉（Gossypium arboreum，XM_017783051.1）、葡萄（Vitis thunbergii，AM886166.1）、煙草（Nicotiana tabacum，AB022693.1）、大豆（Glycine max，NM_001317594.1）的WRKY蛋白均含有2個(gè)典型WRKY結(jié)構(gòu)域和1個(gè)C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)，屬于WRKY家族中的第Ⅰ類；楊樹（Populus trichocarpa， KR025520.1）、芝麻（Sesamum indicum，XM_011084080.2）的WRKY蛋白均含有1個(gè)典型WRKY結(jié)構(gòu)域和1個(gè)C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)，屬于WRKY家族中的第Ⅱ類（圖4）。

2.3 茶樹CsWRKY3系統(tǒng)發(fā)育分析

選用MEGA5軟件中鄰接樹算法對(duì)篩選出的與CsWRKY3序列相似度較高的10個(gè)不同物種的WRKY蛋白序列繪制系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果顯示，CsWRKY3與雙子葉植物綱中的胡蘿卜DcWRKY33、大豆GmWRKY25、落花生AiWRKY33進(jìn)化關(guān)系較接近，與DcWRKY33的序列相似度達(dá)66.39%（圖5）。

2.4 CsWRKY3在茶樹不同組織、不同葉位中的表達(dá)分析

qRT-PCR數(shù)據(jù)分析顯示，CsWRKY3在茶樹根、莖、葉、花、種子等組織器官中均有表達(dá)，且在不同的組織器官中表達(dá)水平存在一定的差異（圖6）。如圖所示，茶樹CsWRKY3基因在根中表達(dá)量最高，與莖、葉、花、種子之間存在顯著性差異；CsWRKY3基因在葉、花中的表達(dá)量無(wú)顯著差異，在莖、種子中的表達(dá)量也無(wú)顯著差異，但在莖和種子中的表達(dá)量遠(yuǎn)低于在根、葉、花中的表達(dá)量。

如圖7所示，CsWRKY3基因在不同葉位中的表達(dá)量存在明顯差異，在發(fā)育相對(duì)成熟的第四葉位的表達(dá)量最高，且與第一、二、三葉位存在顯著差異；CsWRKY3基因在第一、二、三葉位中的表達(dá)量沒(méi)有顯著差異。

2.5 機(jī)械損傷處理后CsWRKY3的表達(dá)分析

機(jī)械損傷處理茶樹葉片不同時(shí)間后，CsWRKY3基因的相對(duì)表達(dá)水平在損傷0.5 h后迅速達(dá)到表達(dá)高峰，且與對(duì)照組存在極顯著差異，這種顯著性差異一直持續(xù)到葉片受損4 h；在0.5、1、2、4 h這四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，CsWRKY3基因的相對(duì)表達(dá)水平分別是對(duì)照組的75.2、17.8、8.1、4.3倍；損傷48 h后，CsWRKY3基因的表達(dá)水平與對(duì)照無(wú)顯著差異（圖8）。

2.6 茶尺蠖取食后CsWRKY3的表達(dá)分析

qRT-PCR數(shù)據(jù)分析表明，茶尺蠖幼蟲取食茶苗第二葉位1.5 h后，CsWRKY3被迅速誘導(dǎo)且差異極顯著，表達(dá)水平是對(duì)照茶苗的11.9倍；TG取食3、12、24 h后茶樹CsWRKY3基因的表達(dá)水平均有明顯的上調(diào)，分別是對(duì)照的4.9、2.7、3.6倍；CsWRKY3基因的誘導(dǎo)呈現(xiàn)驟升緩降再升再降的趨勢(shì)，于取食48 h后與對(duì)照沒(méi)有顯著差異（圖9）。

3 討論與結(jié)論

WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族普遍存在于植物體內(nèi)，對(duì)植物的多種生理過(guò)程有廣泛的調(diào)控作用，在眾多植物轉(zhuǎn)錄因子家族中占有重要地位[22]。自1994年Ishiguro等在研究中首次發(fā)現(xiàn)WRKY轉(zhuǎn)錄因子的存在起，研究者分別對(duì)擬南芥[23]、番茄[24]、水稻[25]等多種植物中的WRKY轉(zhuǎn)錄因子做了深入研究。

本研究根據(jù)茶樹轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，通過(guò)RT-PCR技術(shù)獲得一個(gè)茶樹WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因并命名為CsWRKY3，該基因ORF區(qū)域包含1 710個(gè)堿基，編碼569個(gè)氨基酸，與其他植物WRKY基因具有較高相似性。氨基酸序列分析表明該基因編碼蛋白含有2個(gè)特征性WRKY結(jié)構(gòu)域和1個(gè)C2H2鋅指結(jié)構(gòu)，根據(jù)Eulgem等對(duì)WRKY的分類[2]，屬于第Ⅰ類WRKY轉(zhuǎn)錄因子。

前人研究顯示，WRKY基因的表達(dá)具有組織特異性，例如：LCWRKY5基因僅在山羊草的根和葉中有表達(dá)[26]，AtWRKY25主要表達(dá)于擬南芥的根中[27]。本研究結(jié)果顯示，茶樹CsWRKY3轉(zhuǎn)錄因子基因在茶樹根、葉中相對(duì)表達(dá)量較高，在莖、種子中相對(duì)表達(dá)量較低，這與報(bào)道的馬鈴薯中StWRKY2基因在根和葉中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其它組織相一致[28]，表明CsWRKY3的表達(dá)也具有組織特異性。依據(jù)文獻(xiàn)研究規(guī)律，我們推測(cè)CsWRKY3在茶樹葉片中的相對(duì)表達(dá)水平之所以較高，可能與茶樹的防御反應(yīng)有關(guān)[29]。WRKY基因具有誘導(dǎo)表達(dá)性，常見的是受到機(jī)械損傷的誘導(dǎo)，有報(bào)道顯示罌粟植株在受到機(jī)械損傷后體內(nèi)PsWRKY基因迅速被誘導(dǎo)[30]，煙草WRKY基因會(huì)在葉片受到機(jī)械損傷的情況下過(guò)量表達(dá)[31]，基于此，我們以機(jī)械損傷和茶尺蠖取食茶樹葉片來(lái)驗(yàn)證該基因的功能。endprint

Erb等[32]研究發(fā)現(xiàn)，植食性昆蟲取食植物葉片會(huì)對(duì)葉面造成機(jī)械損傷，從而引起植物的抗性反應(yīng)。本試驗(yàn)中，茶樹葉片經(jīng)過(guò)機(jī)械損傷處理和茶尺蠖幼蟲取食處理后CsWRKY3被迅速激活，表達(dá)水平高于對(duì)照且差異顯著，并且持續(xù)表達(dá)時(shí)間較長(zhǎng)。Skibbe等[33]的研究結(jié)果顯示，煙草受到煙草天蛾幼蟲取食時(shí)，NaWRKY3和NaWRKY6會(huì)激發(fā)茉莉酸途徑提高煙草的抗蟲性，據(jù)此我們推測(cè)CsWRKY3可能通過(guò)茉莉酸途徑參與茶樹對(duì)茶尺蠖的防御作用。李冉[34]的研究表明，二化螟為害水稻后OsWRKY24和OsWRKY70轉(zhuǎn)錄因子可以直接調(diào)控JA合成途徑的關(guān)鍵酶基因，或者通過(guò)調(diào)節(jié)其他轉(zhuǎn)錄因子間接調(diào)控JA合成酶基因。胡凌飛[16]的研究表明，二化螟和褐飛虱取食水稻時(shí)，OsWRKY53、OsWRKY70可以通過(guò)調(diào)控JA、ET和SA途徑來(lái)抵抗蟲害。這為我們下一步深入研究CsWRKY3參與的茶樹抗蟲作用機(jī)制提供了思路。

本試驗(yàn)首次在茶樹中克隆到了CsWRKY3基因，并研究了該基因在不同組織器官中的表達(dá)差異性；通過(guò)分析該基因在機(jī)械損傷和茶尺蠖幼蟲取食下的表達(dá)情況，推測(cè)CsWRKY3基因參與了茶樹抵抗植食性昆蟲為害的防御反應(yīng)，這為后期研究CsWRKY3參與茶樹抗蟲反應(yīng)的作用機(jī)制提供了研究基礎(chǔ)。

參 考 文 獻(xiàn)：

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