哈巴河縣野生楊樹(shù)菇菌種分離及培養(yǎng)基篩選研究

張俊花+林辰壹

摘要 采用對(duì)比法，對(duì)哈巴河縣野生楊樹(shù)菇不同液體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。結(jié)果表明，在溫度25 ℃、濕度80%的條件下，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基適宜野生楊樹(shù)菇菌種分離和菌絲擴(kuò)大繁殖。該結(jié)果可為今后栽培生產(chǎn)楊樹(shù)菇提供技術(shù)指導(dǎo)。

關(guān)鍵詞 野生楊樹(shù)菇；菌種分離；培養(yǎng)基篩選；新疆哈巴河

中圖分類號(hào) S646 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）01-0057-02

楊樹(shù)菇（pleurotus ostreatus），因自然發(fā)生在哈巴河縣楊樹(shù)樹(shù)干或伐樁上而得名。野生楊樹(shù)菇富含氨基酸和維生素，菇體肥厚，香氣濃郁，脆嫩爽滑，味道鮮美。楊樹(shù)菇子實(shí)體大型，菌蓋扁半球形或呈扇形，直徑4～20 cm，初期淺黑色，后期逐漸變淡，成熟時(shí)呈淺灰色或白色；菌蓋表面平滑，菌肉白色，肥厚；菌柄短，長(zhǎng)2～8 cm，基部有絨毛，側(cè)生或偏生，內(nèi)實(shí)，基部相連，菌蓋重疊[1]。楊樹(shù)菇既是新一代高檔的珍稀食用菌，也是一種極具開(kāi)發(fā)價(jià)值的藥用菌[2]。本文進(jìn)行3種培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)，找出適合野生楊樹(shù)菇的最佳培養(yǎng)基。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試儀器設(shè)備。純水及超純水系統(tǒng)（HY-CJ-1A）、手提式壓力蒸汽滅菌鍋（YXQ-280SD）、生化培養(yǎng)箱（SPX-250）、生物安全柜（BSC-1360ⅡA2）、溫度濕度計(jì)、電子天平、培養(yǎng)皿。

1.1.2 供試試劑。馬鈴薯葡萄糖瓊脂（不含抗生素）、蛋白胨、麥芽浸膏、瓊脂粉和酵母膏，由北京奧博星生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。供試菌株采自哈巴河縣。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基配方與制作。①PDA（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）[3]：將200 g馬鈴薯去皮，去芽眼，切成小條放入鋁鍋中，加入1 000 mL水，煮沸20～30 min至馬鈴薯酥而不爛時(shí)，用6～8層紗布過(guò)濾，取濾汁于鍋中，再補(bǔ)水至1 000 mL，加入瓊脂20 g溶化，再加入葡萄糖20 g攪拌均勻，趁熱分裝于試管中，用棉花塞塞好，每個(gè)試管10 mL。②市售PDA（北京奧博星生物技術(shù)有限公司）：取試劑38 g，加水1 000 mL水煮沸，攪拌均勻，趁熱分裝于試管，用棉花塞塞好，每個(gè)試管10 mL。③MYPA（麥芽酵母膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基）[4]。先在鋁鍋中加入1 000 mL水加熱，再取麥芽浸膏20 g、酵母膏2 g、蛋白胨1 g、瓊脂20 g，放入鍋中攪拌均勻后煮沸，趁熱分裝于試管，用棉花塞塞好，每個(gè)試管10 mL。

1.2.2 母種培養(yǎng)。將分裝好的不同的試管培養(yǎng)基放入滅菌器內(nèi)，當(dāng)鍋內(nèi)壓力達(dá)到0.15 MPa（鍋內(nèi)溫度127 ℃）時(shí)保持30 min，滅菌結(jié)束后待鍋內(nèi)壓力自然降至0時(shí)才可打開(kāi)鍋蓋[5]。待培養(yǎng)基滅菌完成后，取出傾斜放置在生物安全柜中冷卻。在滅菌的同時(shí)，將采集好的菌株先后用純水、超純水、75%酒精清洗干凈放置在生物安全柜中。

接種前開(kāi)啟紫外燈30 min，關(guān)閉紫外燈后，開(kāi)啟無(wú)菌循環(huán)系統(tǒng)，先用75%酒精棉球擦手，點(diǎn)燃酒精燈，將小刀和鐵絲在火焰上方消毒，用小刀將菌株沿菌蓋至菌柄中間縱向切開(kāi)，在菌柄和菌蓋交界處，用小刀切出一小塊菇體，每塊0.8 cm左右，厚度0.2 cm，然后用鐵絲挑起菇體放入培養(yǎng)基斜面中心處[6]，每接種1次都要對(duì)小刀、鐵絲在酒精燈上消毒。接種完成后放在25 ℃左右的培養(yǎng)箱內(nèi)暗光培養(yǎng)，每天通風(fēng)換氣，控制空氣相對(duì)濕度80%左右，觀察記錄菌絲生長(zhǎng)情況，待生長(zhǎng)最快的菌絲接近培養(yǎng)基另一端時(shí)，進(jìn)行菌種復(fù)壯培養(yǎng)[7]。

1.2.3 母種擴(kuò)繁。根據(jù)菌絲的生長(zhǎng)情況，選擇菌絲長(zhǎng)勢(shì)很好且無(wú)雜菌的培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)繁。接種前開(kāi)啟紫外燈30 min，手、臺(tái)面、接種工具、母種管用酒精棉球擦拭消毒，點(diǎn)燃酒精燈，火焰上方灼燒接種藥勺后冷卻，凡是伸進(jìn)試管的桿部均過(guò)火滅菌。將原始母種和空自斜面培養(yǎng)基同時(shí)握在左手，右手拔掉棉塞，用手將試管口在火焰上方不斷攪動(dòng)，先用藥勺棄去原始母種前端1 cm處，然后快速移取0.5 cm2大小的菌種接入試管斜面培養(yǎng)基中央。抽出藥勺，再將試管口在火焰上方攪動(dòng)，在火焰旁塞上棉塞，另一只手換接種管，重復(fù)上述操作，接種完畢后貼上標(biāo)簽。接種后，放在培養(yǎng)室內(nèi)避光培養(yǎng)，培養(yǎng)初期每天都要仔細(xì)觀察，對(duì)污染的試管及時(shí)挑除，以免菌絲將污染處蓋住，難以挑出，造成損失。

1.2.4 菌絲生長(zhǎng)量測(cè)定。先將配制好的不同的培養(yǎng)基200 mL分裝于250 mL的錐形瓶?jī)?nèi)，用棉塞塞好，然后將平面培養(yǎng)皿與錐形瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌0.15 MPa時(shí)保持30 min，滅菌完成后在超凈工作臺(tái)內(nèi)趁熱將不同的培養(yǎng)基倒入平面培養(yǎng)皿上，平面培養(yǎng)皿的厚度為2 mm。冷卻后，通過(guò)從已培養(yǎng)好的楊樹(shù)菇母種試管中，用環(huán)狀接種針在火焰旁取大小相等的菌塊，放入平面培養(yǎng)皿的中央，在溫度25 ℃、濕度80%的恒溫培養(yǎng)箱中倒置避光培養(yǎng)9 d，每隔3 d測(cè)量1次，第3天開(kāi)始用“十”字法測(cè)量菌落直徑并觀察菌絲的長(zhǎng)勢(shì)情況[8]。每個(gè)處理3次重復(fù)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

利用SPSS 20.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素ANOVA Duancan差異顯著性分析比較（P<0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長(zhǎng)情況

由表1可知，組織分離后的組織塊在自制PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲萌發(fā)期時(shí)間最長(zhǎng)，菌絲生長(zhǎng)稀疏，30 d長(zhǎng)滿試管；市售PDA和MYPA培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲萌發(fā)期時(shí)間為2 d，菌絲生長(zhǎng)潔白、濃密、粗壯、整齊，明顯優(yōu)于自制PDA培養(yǎng)基。市售PDA（擴(kuò)繁）培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲萌發(fā)快，2 d后開(kāi)始萌發(fā)菌絲，菌絲生長(zhǎng)粗壯、濃密、潔白、整齊、有序，20 d可長(zhǎng)滿試管。由此表明，在溫度25 ℃、濕度（RH）80%±5%的條件下，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基適于該菌的室內(nèi)培養(yǎng)。

2.2 菌絲生長(zhǎng)量

由表2可知，在溫度25 ℃、濕度（RH）80%±5%的條件下進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，第3天和第6天時(shí)，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)量顯著高于自制PDA（P<0.05），在第9天時(shí)，MYPA培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)量最大，顯著高于其他2個(gè)處理，并且市售PDA培養(yǎng)基顯著高于自制PDA培養(yǎng)基（P<0.05）。方差分析結(jié)果表明，在溫度25 ℃、濕度（RH）80%±5%的條件下，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基均適于該菌的室內(nèi)培養(yǎng)。

3 結(jié)論與討論

通過(guò)查找資料選擇了常用的3種培養(yǎng)基（自制PDA、市售PDA和MYPA培養(yǎng)基）對(duì)野生楊樹(shù)菇進(jìn)行菌絲培養(yǎng)，自制PDA中馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g；市售PDA中馬鈴薯浸粉3 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g；MYPA培養(yǎng)基中麥芽浸膏20 g、酵母膏2 g、蛋白胨1 g、瓊脂20 g。通過(guò)培養(yǎng)觀察，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲萌發(fā)期時(shí)間2 d，菌絲生長(zhǎng)潔白、濃密、粗壯、整齊，明顯優(yōu)于自制PDA培養(yǎng)基，且試管長(zhǎng)滿時(shí)間較自制PDA培養(yǎng)基短；在菌絲生長(zhǎng)量方面市售PDA和MYPA培養(yǎng)基顯著高于自制PDA，而在菌絲生長(zhǎng)量的第9天，MYPA培養(yǎng)基明顯高于市售PDA培養(yǎng)基。3種培養(yǎng)基中MYPA培養(yǎng)基中氮源豐富，市售PDA次之，自制PDA最少，一定量的氮源對(duì)該菌絲的生長(zhǎng)很重要。但MYPA培養(yǎng)基在配制過(guò)程中因是膏狀，稱樣復(fù)雜，市售PDA操作方便。市售PDA和MYPA培養(yǎng)基各有利弊。綜上，在溫度25 ℃、濕度（RH）80%±5%的條件下，市售PDA和MYPA培養(yǎng)基適于該野生楊樹(shù)菇的菌種分離和菌絲體的擴(kuò)大繁殖。

4 參考文獻(xiàn)

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