車前草幼苗中黃酮類物質提取工藝

李 蒙

(西安文理學院 生物與環(huán)境工程學院，西安 710065)

車前草(Plantagoasiatica L.)屬車前科車前屬多年生矮生草本植物，在自然界中分布廣泛，生長于溫暖、潮潤、向陽的山野或路旁等處，民間采集幼嫩苗經加工成美味佳肴，而食用后能調節(jié)胃腸功能，治療小便不利、痰熱咳喘等多種疾病[1-2]，這是由于車前草不同組織中含有多種生物活性的黃酮類物質所起的療效[3-4].因此，具有藥食兩用的車前草被人們開發(fā)利用，是重要的中草藥資源，具有廣闊的市場前景.鑒此，本研究以車前草幼嫩苗作為實驗材料，乙醇溶劑提取，優(yōu)化提取工藝，以期為車前草資源利用提供支持.

1 材料與方法

1.1 材料

試驗采摘陜西省商洛市商州區(qū)黑龍口鎮(zhèn)山野中車前草種子，種植于西安文理學院植物繁育單元的溫室中，一個月內，采摘其幼苗作為研究對象；蘆丁標準品由上海源葉生物科技提供.

1.2 儀器

全自動鼓風干燥箱(型號：ZFD-5250A，陜西天美)，紫外·可見分光光度計(型號：UV-2450，島津公司)，電子天平(型號：BSA223S，上海智泰電子科技)，恒溫水浴鍋(型號：HH-S，北京科偉)，臺式高速大容量離心機(型號：5810R，艾本德).

1.3 實驗方法

1.3.1 車前草幼苗預處理

將采摘幼苗清洗干凈、瀝干幼苗上的水分，置于恒溫干燥培養(yǎng)箱中，在60 ℃干燥至恒重，葉片通過研磨粉碎，過60目篩，密封保存4 ℃.

1.3.2 乙醇提取車前草幼苗中黃酮類物質

稱取2 g粉碎樣品，加入石油醚脫脂與脫色，最后風干，然后在不同乙醇濃度、提取時間、溫度、料液比的條件下熱抽提取，12 000 r/min離心10 min，取上清液，搖勻定容至25 mL，即為黃酮類物質提取液.

1.3.3 車前草幼苗中黃酮類物質含量的測定

取5 mL提取液于25 mL容量瓶中，加入0.75 mL的5% NaNO3溶液，混勻后，加入0.75 mL的10% Al(NO3)3溶液，10 min后加入10 mL的1 mol/L NaOH溶液，再 30%乙醇定容，室溫放置10 min，然后510 nm分光光度計測定吸光值，測定提取液中黃酮含量.測定以蘆丁為對照的硝酸化鋁法.

以蘆丁為對照品的標準曲線的繪制：稱取2.0 mg蘆丁標準品溶解于60%乙醇中，定容于20 mL棕色容量瓶中，配制成濃度為0.1 mg/mL的蘆丁標準溶液.吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL蘆丁標準溶液，分別置于25 mL容量瓶中，各加入0.75 mL的5% NaNO3溶液，混勻后加入0.75 mL的10% Al(NO3)3溶液，室溫放置10 min，加入10.0 mL的1 mol/L NaOH溶液.30%乙醇定容至刻度，搖勻靜置10 min.在510 nm處測定不同濃度蘆丁混合溶液吸光值，繪制吸光度X與蘆丁含量Y(mg/mL)標準曲線為Y=0.025X-0.000 1(R2=0.994)，計算總黃酮得率(提取的黃酮量/提取物質量).

1.4 不同因素對黃酮提取效率的影響

[5]對影響車前草幼苗中黃酮提取效果的因素(乙醇濃度、提取溫度、提取時間和料液比)進行研究.

1.4.1 乙醇濃度對車前草幼苗中黃酮提取效果的影響

以40%、50%、60%、70%、80%不同濃度乙醇提取黃酮，在料液比為1∶30，溫度70 ℃提取2 h，測定車前草幼苗中黃酮含量.

1.4.2 提取溫度對車前草幼苗中黃酮提取效果的影響

以50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃不同溫度提取黃酮，在料液比為1∶30，以70%乙醇提取2 h，測定車前草幼苗中黃酮含量.

1.4.3 提取時間對車前草幼苗中黃酮提取效果的影響

以0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h不同時間提取黃酮，在料液比為1∶30，溫度70 ℃，以70%乙醇提取，測定車前草幼苗中黃酮含量.

1.4.4 料液比對車前草幼苗中黃酮提取效果的影響

分別以1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60的不同料液比，在70%乙醇濃度，溫度70 ℃，提取2 h的條件下，測定車前草幼苗中黃酮含量.

2 結果與分析

2.1 乙醇濃度對車前草葉片黃酮提取效果的影響

乙醇提取車前草幼苗中黃酮類物質，不同濃度乙醇提取溶劑與總黃酮提取率呈現一定的變化規(guī)律(圖1)，當乙醇濃度達到70%時，車前草幼苗中總黃酮類物質的提取效率最高.

2.2 提取溫度對車前草幼苗中黃酮提取效果的影響

乙醇提取車前草幼苗中黃酮類物質時，不同提取溫度與總黃酮提取率呈現一定的變化規(guī)律(圖2)，當提取溫度達到60～70 ℃時，車前草幼苗中總黃酮類物質的提取效率較高，其中70 ℃為最高.

圖1 乙醇濃度對總黃酮提取率的影響

圖2 提取溫度對總黃酮提取率的影響

2.3 提取時間對車前草幼苗中黃酮提取效果的影響

乙醇提取車前草幼苗中黃酮類物質時，不同提取時間與總黃酮提取率呈現一定的變化規(guī)律(圖3)，當提取時間達到2 h，車前草幼苗中總黃酮類物質的提取效率最高.

2.4 料液比對車前草幼苗黃酮提取效果的影響

乙醇提取車前草幼苗中黃酮類物質時，不同料液比與總黃酮提取率呈現一定的變化規(guī)律(圖4)，當料液比為1∶30時，車前草幼苗中總黃酮類物質的提取效率最高.

圖3 提取時間對總黃酮提取率的影響

圖4 料液比對總黃酮提取率的影響

3 結論與討論

研究不同因素對黃酮提取率的影響，結果發(fā)現受影響的主次順序為：乙醇濃度>提取溫度>料液比>提取時間，其中乙醇濃度為70%，提取溫度為70℃，料液比為1∶30，提取時間為2 h，是單因素試驗中最優(yōu)水平.黃酮提取過程受多種環(huán)境因素的影響，為了要得到準確的實驗結果，提取獲得黃酮類物質后，應盡快測定，研究發(fā)現黃酮提取液穩(wěn)定性會受到光照、溫度、pH值、金屬離子等影響[6].醫(yī)藥學領域中發(fā)現車前草總黃酮在治療前列腺增生以及體內的抗氧化性方面具有重要的意義[7-8].

[參考文獻]

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