改良非梗阻性無(wú)精子癥患者睪丸精子快速冷凍解凍方法獲臨床妊娠1例

宋雪梅 嚴(yán)為巧 黃曉潔

作者單位：221009 江蘇，徐州市婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心

臨床上，無(wú)精子癥可以分為非梗性無(wú)精子癥和梗阻性無(wú)精子癥兩類。無(wú)精子癥患者通過(guò)外科手術(shù)取精并借助輔助生殖技術(shù)可以擁有自己的遺傳學(xué)后代。2016年6月本院生殖醫(yī)學(xué)中心對(duì)經(jīng)皮睪丸多點(diǎn)細(xì)針抽吸精子進(jìn)行快速冷凍解凍后行單精子卵胞漿注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)并獲得臨床妊娠，現(xiàn)報(bào)道如下。

臨床資料

1.病史：患者，男，26歲，因婚后6年未避孕未孕來(lái)本院就診。生殖系統(tǒng)檢查，左側(cè)睪丸約16 ml，右側(cè)睪丸約17 ml，生殖激素測(cè)定示FSH:3.24 U/L，LH1.78 U/L，T:296 ng/dl，PRL:8.66 ng/ml，E2:25.6 pg/ml，分析染色體核型正常，超聲生殖系統(tǒng)檢查未發(fā)現(xiàn)明顯梗阻。禁欲3 d以上分別采集3 次精液，常規(guī)檢查離心后高倍鏡下多張涂片、多個(gè)視野未見(jiàn)精子。于2015年9月11日利多卡因局部麻醉，行經(jīng)皮睪丸多點(diǎn)細(xì)針抽吸精子，將穿刺取得的曲細(xì)精管浸于Quinn′s-1006 (SAGE，America)培養(yǎng)液加10%人血清白蛋白(HSA，SAGE，America)，在解剖鏡下使用1 ml注射器針尖小心地剝開(kāi)曲細(xì)精管，再于倒置顯微鏡下觀察尋找精子。女方，28 歲，月經(jīng)規(guī)律，子宮腺肌瘤，本中心常規(guī)超長(zhǎng)方案促排卵。

2.精子冷凍：將經(jīng)處理后含有割碎曲細(xì)精管的精子懸液離心(2 000 轉(zhuǎn)/分鐘)10 min，倒掉上清，用100微升5%HSA的Quinn′s1006培養(yǎng)液重懸沉淀，與精子冷凍保護(hù)劑(SAGE，America)1:1混勻，移入冷凍麥稈進(jìn)行分裝，麥稈在液氮上方距液氮面3 cm、2 cm、1 cm處各放置40秒，最后放入液氮中長(zhǎng)期保存。

3.精子解凍：冷凍精子麥稈從液氮迅速插入ICSI皿37℃礦物油，待麥稈上的微滴顏色變淺后迅速轉(zhuǎn)移至Quinn′s 1023操作滴[1]，倒置顯微鏡下找精子。

結(jié)果

2015年10月13日取卵，獲卵9個(gè)，MⅡ卵5個(gè)，行ICSI，正常受精4個(gè)，D2天移植2個(gè)優(yōu)質(zhì)胚胎(4CⅠ和5CⅡ)，剩余2個(gè)三級(jí)胚胎繼續(xù)培養(yǎng)至D6天，無(wú)囊胚形成。胚胎移植后11天外周血測(cè)β-hCG陽(yáng)性。目前嬰兒已活產(chǎn)，身體各項(xiàng)指標(biāo)均正常。

討論

非梗阻性無(wú)精子癥患者，若附睪穿刺術(shù)未觀察到精子不得不行睪丸活檢，而重復(fù)的睪丸取精可能會(huì)對(duì)睪丸功能產(chǎn)生負(fù)面影響，為減少睪丸穿刺取精的次數(shù)，冷凍保存睪丸活檢獲得的精子以更好的保護(hù)男性生育力。研究報(bào)道，采用傳統(tǒng)的精子冷凍方法和利用空透明帶為載體保存睪丸精子，前者精子冷凍解凍后的回收利用率低，后者因倫理問(wèn)題限制其在臨床上應(yīng)用[2-3]。眾所周知，睪丸穿刺獲得的精子往往數(shù)量少，活力差，提高睪丸精子冷凍解凍后的回收利用率是其能在臨床上廣泛應(yīng)用的前提。2013年，劉吉等[4]報(bào)道睪丸組織冷凍結(jié)合胞漿內(nèi)單精子注射臨床妊娠1例，但精子解凍后偶見(jiàn)微動(dòng)精子，說(shuō)明解凍后的精子活力較差。2016年，史海躍等[5]研究睪丸精子冷凍復(fù)蘇對(duì)ICSI助孕結(jié)局的影響，其中精子復(fù)蘇過(guò)程需加入培養(yǎng)液對(duì)精子離心洗滌，這個(gè)過(guò)程中勢(shì)必降低精子回收利用率。本文病例將冷凍精子麥稈從液氮直接放入ICSI皿37℃礦物油中解凍并迅速移入精子滴，精子不需要離心洗滌，可以全部回收，直接在精子滴中挑選活力好的精子行ICSI，患者成功妊娠并活產(chǎn)。整個(gè)冷凍解凍過(guò)程時(shí)間短，易于操作。此方法除可以用冷凍精子數(shù)量少、活力差的附睪、睪丸精子外，還可以用于嚴(yán)重少精子癥患者的冷凍，避免女方取卵日因射出精液中無(wú)精子而行有創(chuàng)性的附睪、睪丸穿刺?？傊?，本文采用的快速冷凍解凍方法可以用于稀少精子快速冷凍解凍，適于在輔助生殖臨床上推廣應(yīng)用。