熒光免疫層析法降鈣素原檢測試劑盒臨床性能評估

王艷玲 沈陽市兒童醫(yī)院檢驗科 （遼寧 沈陽 110032）

內(nèi)容提要： 目的：探討熒光免疫層析法降鈣素原檢測試劑盒的臨床性能。方法：使用熒光免疫層析法和ELISA檢測法，通過對比檢測結(jié)果的精密度、相對靈敏度、特異度，經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析評價熒光免疫層析法降鈣素原檢測試劑盒的價值，為臨床工作提供科學(xué)的依據(jù)。結(jié)果：與ELISA檢測法相比較，熒光免疫層析法檢測的結(jié)果精密度更好，低濃度和高濃度樣本的精密度系數(shù)分別為8.6%和4.8%；線性結(jié)果提示，在試劑盒標注的檢測范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系（r=0.9978）；兩種方法試劑盒檢測結(jié)果一致性良好（r=0.9681）；在0.5ng/mL和2.0ng/mL兩個特定濃度值時，熒光免疫層析法的靈敏度和特異度均高于85%。結(jié)論：熒光免疫層析法降鈣素原檢測試劑盒準確度更高、臨床應(yīng)用的靈敏度和特異度均高，線性關(guān)系良好，與ELISA檢測比較效果更佳，臨床價值更高。

降鈣素原（PCT）是降鈣素的前體，它的組成包含一定量的氨基酸，是一種大分子量的糖蛋白。PCT在正常生理情況下是由甲狀腺C細胞分泌而成[1]，當機體收到外界感染而產(chǎn)生的應(yīng)激應(yīng)答時，除甲狀腺C細胞分泌PCT以外，還有其他細胞和組織同樣分泌PCT，此時檢測體內(nèi)的PCT含量則明顯高于正常健康狀態(tài)下的含量，因此，PCT也是臨床上診斷感染、化膿炎癥等的實驗室指標。在感染最初的3h內(nèi)可以檢測到PCT含量，當6～12h時，感染體內(nèi)的PCT分泌量達最高[2]，為感染峰值，然后會隨著時間推移慢慢下降，相關(guān)文獻分析所得，PCT含量和感染嚴重程度有很大相關(guān)性，感染越嚴重，PCT含量越高，且該物質(zhì)在體內(nèi)的半衰期較長，代謝較慢，對人體危害很大，早期發(fā)現(xiàn)、早期檢測、早期治療對患者感染預(yù)后有至關(guān)重要的意義。本文探討熒光免疫層析試劑盒檢測方法的效果，將ELISA作為對照，評價該方法的準確性和綜合價值，現(xiàn)報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇本市某醫(yī)院2016年2月～2018年2月門診登記的疑似細菌感染病例共100例為研究對象，排除采血樣本中的溶血、脂血、黃疸等疾病病例，選擇共100例血液樣本參加檢測。100份樣本中無年齡、性別等一般資料的統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。血清PCT濃度檢測范圍覆蓋了試劑盒標準范圍（0.01～100ng/mL），根據(jù) VIDAS酶聯(lián)免疫熒光法來分析PCT濃度檢測結(jié)果：濃度在0.25ng/mL及以下的共有18例、超過0.25ng/mL不高于0.5ng/mL的共有10例、超過0.5ng/mL不高于2ng/mL的共有26例、超過2ng/mL不高于10ng/mL的共有27例、超過10ng/mL的共有19例。所應(yīng)用的儀器為梅里埃VIDAS酶聯(lián)免疫熒光法分析系統(tǒng)及PCT檢測試劑盒（生產(chǎn)批號為1002934040），生產(chǎn)廠家為梅里埃診斷產(chǎn)品上海分公司[3]，天寶頌原生物熒光免疫分析儀（TEBSUN）及PCT檢測試劑盒（生產(chǎn)批號為01220140426），生產(chǎn)廠家為北京瑞禾宏業(yè)生物技術(shù)有限公司[4]。

1.2 方法

ELISA檢測：免疫測定夾心法與最終的熒光檢測相結(jié)合是其工作原理，首先配置好待檢測的樣本溶液備用，然后與固定相的抗PCT抗體結(jié)合，再結(jié)合堿性磷酸酶標記的抗PCT單克隆抗體，將制備好待檢測的溶液置于波長405nm下，看水解后的熒光強度所反映的PCT濃度值。線性范圍區(qū)間是0.05～200ng/mL。

熒光免疫層析法：層析夾心法工作原理，在層析進行時，樣本的PCT與標記的單克隆抗體結(jié)合，從硝酸纖維素膜層逐漸移動至檢測區(qū)層，結(jié)合物最后沉淀在T區(qū)，標記熒光結(jié)合物向系統(tǒng)發(fā)出信號，收到反饋后轉(zhuǎn)化為定量的數(shù)據(jù)結(jié)果。與ELISA檢測不同的是線性范圍區(qū)間是0.01～100ng/mL。

比較兩種方法測定的結(jié)果的精密度、方法學(xué)本身操作、線性范圍、特異度及靈敏度、質(zhì)量控制上述幾項指標。

2.結(jié)果

2.1 精密度比較（準確性）

參照標準是美國臨床實驗室標準化協(xié)會（CLSI）定制的EP5-A程序[5]，重復(fù)試驗20次分別測量試劑盒高低值，計算平均值誤差在3以上的均作為離群點，離群點是影響結(jié)果準確性即精密度判斷的重要影響因素[6]。經(jīng)測得和計算得出熒光免疫層析法的高（高濃度）低（低濃度）值變異系數(shù)分別為8.6%和4.8%，與試劑盒要求的結(jié)果范圍相符，精密度良好。各個離散點和離散點的平均誤差值較小，繪制回歸曲線線性關(guān)系良好。

2.2 方法學(xué)比較

本次試驗檢測的樣本量為100份，其中出現(xiàn)2例檢測結(jié)果超過試劑盒標準范圍區(qū)間，統(tǒng)計學(xué)不采用該結(jié)果，予以剔除，另外有7例結(jié)果接近于0.05ng/mL，計算數(shù)據(jù)時按照0.05ng/mL錄入，108份樣本采用配對t檢驗統(tǒng)計學(xué)方法分析，得出t值為-0.586，P＞0.05，成對樣本的相關(guān)系數(shù)r為0.9681，P＜0.01，兩樣本試劑盒結(jié)果值呈正相關(guān)關(guān)系。

2.3 靈敏度和特異度

（臨界值0.5ng/mL）TEBSUN試劑盒相對于VIDAS試劑盒的檢測結(jié)果計算的靈敏度達96.54%，相對特異度為85.33%；（臨界值2.0ng/mL）TEMSUN試劑盒相對于VIDAS試劑盒的檢測結(jié)果計算的靈敏度達86.01%，相對特異度為97.89%，總體符合率達94.33%。

3.討論

近年來，細菌譜逐漸擴大，抗生素也隨之增加，然而醫(yī)學(xué)對于臨床上不同菌株的快速診斷和鑒別也有了新的要求[7]。檢測方法和精準的操作對于結(jié)果有著不同的意義。本文探討的是熒光免疫層析法來檢測降鈣素原試劑盒的臨床性能情況，收到了很好的試驗結(jié)果，檢測的靈敏度、特異度、精準度都較高，較于其他檢測方法更有優(yōu)勢。早期快速準確的檢測病菌、及時做出準確的診斷對患者預(yù)后結(jié)局有很重要的意義。熒光免疫層析法有著很高的精準度、相對靈敏度和特異度也較高，檢測時限也較短，這種方法更適用于急診重癥感染的患者。PCT熒光染色因為它有較高的識別性，當細菌感染后，進行熒光標記被檢測到的時間很短[8]，所以臨床上被實驗室經(jīng)常使用。全身炎癥綜合反應(yīng)如膿毒血癥等利用熒光層析法可以得到快速準確的結(jié)果輔助臨床鑒別診斷。