兩種豆類材料的納豆制品納豆激酶活性動(dòng)態(tài)分析

劉超群

（北方民族大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，寧夏 銀川 750021）

納豆是一種起源古老而傳統(tǒng)的可食用發(fā)酵產(chǎn)品，其類似于豆豉，至今有上千年的歷史文化[1]。納豆是以大豆為原料經(jīng)草枯芽孢桿菌發(fā)酵而來(lái)的，具有溶血栓、抗腫瘤、降血壓、防止骨質(zhì)疏松、抗菌消毒等生理功能[2]。其最主要的功能是能夠溶解人體內(nèi)難以溶解的纖維蛋白。血栓一直是老年性心血管疾病難題，原因是血栓中含有一種不溶性纖維蛋白，而納豆激酶能有效地溶解血栓中的不溶性纖維蛋白，因此納豆激酶成為了新一代的醫(yī)用溶栓劑，也作為一種能預(yù)防血管栓塞的保健食品被人們所接受。

國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者對(duì)其基本性質(zhì)、作用、制備方法及純化技術(shù)方面的研究都取得了很大的成就。而且納豆的保健功效都是通過(guò)納豆激酶來(lái)反映的，在1987年就有學(xué)者發(fā)現(xiàn)納豆激酶有很強(qiáng)的溶栓功能，所以納豆激酶的活性對(duì)其保健功效至關(guān)重要。

表1 大豆組和綠豆組的納豆激酶OD值

1 試驗(yàn)儀器與材料

1.1 試驗(yàn)材料

納豆菌購(gòu)自吉林省雁鳴湖大豆生物科技有限責(zé)任公司，對(duì)甲基苯磺酰-L-精氨酸甲酯、15%三氯醋酸、10%亞硫酸鈉、5%變色酸、2%高錳酸鉀均購(gòu)自天津市大茂試劑廠，pH值為8的磷酸緩沖溶液購(gòu)自上海雙螺旋生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)儀器

水浴鍋（太倉(cāng)市華利達(dá)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；MS304S分析天平(奧豪斯儀器（常州）有限公司)；自動(dòng)生化分析儀 ADVIA 1800(西門子公司)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)材料預(yù)處理

大豆經(jīng)精選后清洗，經(jīng)高溫滅菌1 h后，在無(wú)菌條件下按原料重量 2%～4%的接種量接種納豆芽孢桿菌，之后于37℃、85%濕度條件下的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中發(fā)酵培養(yǎng)24～36 h即可。

2.2 納豆激酶樣品活性測(cè)定

納豆激酶活性采用TAME法測(cè)定[3]，以大豆和綠豆為原料進(jìn)行納豆發(fā)酵，每4 h（從發(fā)酵至成熟時(shí)間48 h內(nèi)）提取1次納豆制品上清液，分別加入TAME、pH值為8的磷酸鹽緩沖液和上清液，并設(shè)置空白對(duì)照組和重復(fù)組，空白管以磷酸鹽緩沖液代替。在37℃水浴鍋中放置0.5 h后即進(jìn)行降溫，同時(shí)加入15%三氯醋酸、2%高錳酸鉀、10%亞硫酸鈉和5%變色酸，放入沸水浴中顯色反應(yīng)25 min，取出后冷水浴冷卻，測(cè)定其在574 nm處的吸光度。具體數(shù)值見表1。

3 試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)發(fā)酵后的兩種豆類色澤透亮，且表面裹有薄薄一層微黃絲狀物質(zhì)。納豆激酶粗制品就是將其研磨成粉狀。將納豆制品從接種至發(fā)酵完成過(guò)程中的不同時(shí)間段檢測(cè)其OD值，結(jié)果表明，兩種原材料的納豆激酶在0～12 h活性逐漸增強(qiáng)，12 h活性最強(qiáng)（大豆為2.230，綠豆為1.679），12 h后逐漸減弱，至20 h接近失活。兩種材料的納豆制品從接種至發(fā)酵完成過(guò)程中，以大豆為原材料的納豆激酶活性大于以綠豆為原材料的納豆制品。

4 討論

據(jù)報(bào)道，目前全球中老年每年因患血栓死亡人數(shù)高達(dá)1 500萬(wàn)，而中國(guó)就約有300萬(wàn)，血栓疾病嚴(yán)重影響著人類的健康[4]，所以開發(fā)溶栓型藥物迫在眉睫。目前溶栓型藥物大多數(shù)副作用大、價(jià)格昂貴且都是注射用藥，增加了臨床治療的難度，而納豆激酶的高溶栓特性、價(jià)格便宜且高效就滿足了條件。其可以溶解血栓、預(yù)防和改善心腦血管和高血壓等疾病。有學(xué)者通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)表明，納豆粗提物可降低血脂水平，在降低血液黏度方面有很顯著的效果[5],同時(shí)由于納豆激酶具有可口服、安全性高、價(jià)格低和纖溶活力強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)，成為近年來(lái)溶栓類產(chǎn)品開發(fā)研究的熱點(diǎn)[6]。

測(cè)定納豆激酶活性的方法，根據(jù)測(cè)定原理可大致分為2種：一種是以納豆激酶的水解活性為基礎(chǔ)來(lái)測(cè)定其活性,如TAME法；另外一種是利用溶解纖維蛋白的特性測(cè)定其活性，如纖維蛋白平板法等。熊迎新等通過(guò)對(duì)TAME法和纖維蛋白平板法進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)TAME法因靈敏度高、操作簡(jiǎn)便，可作為一種常規(guī)檢測(cè)方法。其是利用常規(guī)納豆菌株在一定條件下發(fā)酵得到兩種原料的納豆激酶粗制品，所以本試驗(yàn)以市場(chǎng)上普通的大豆和綠豆為原料，活性測(cè)定采用TAME底物法。結(jié)果表明，兩種納豆制品的最佳食用時(shí)間為發(fā)酵至12 h左右，在這個(gè)時(shí)間段納豆激酶的活性最強(qiáng)，藥用、保健功效最佳，且以大豆為材料的納豆制品的納豆激酶活性大于綠豆材料納豆制品。納豆及納豆激酶擁有的這些功能優(yōu)勢(shì)為開發(fā)溶栓型藥物和保健品奠定了理論基礎(chǔ)。提純的納豆激酶經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的加工開發(fā)為藥物指日可待，能最大限度地發(fā)揮納豆激酶在溶血栓和降血脂方面的功效，造福于人類健康。

[1]高瑞萍，劉輝，劉嘉，等.納豆的研究進(jìn)展[J].食品與發(fā)酵科技，2011，47(01)：23-26.

[2]代增英，馮建嶺，李迎秋，等.納豆及納豆激酶的研究進(jìn)展[J].山東食品發(fā)酵，2013(01)：46-50.

[3]熊迎新，尹宗寧，楊超，等.納豆激酶活性測(cè)定方法的研究[J].藥物生物技術(shù)，2006(02)：140-143.

[4]劉蒞欣，胡桃紅.血栓性疾病抗栓治療的研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床醫(yī)生，2013，41（05）：1-3.

[5]徐章華，邵玉芬，朱國(guó)輝.蘇子油對(duì)大鼠血脂及血液流變性的影響［J］．營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，1997，19(01)：11-15．

[6]CAI D，W EI X，QIU Y，et al.High-level expression of nattokinase in Bacillus liche niformis by manipulating signal peptide and signal pepti-dase[J].J Appl Microbiol，2016，121(03)：704-712.