熒光定量PCR檢測性病的結(jié)果研究

符穎 陳菊香 何瑞英

（文昌市皮膚性病防治中心 海南 文昌 571300）

臨床中較為常見的傳染性疾病中，性病是其中之一，該病主要是通過性行為傳播[1]。近年來，性病的發(fā)生率呈現(xiàn)出逐年上升趨勢，而該病在臨床上的檢出率則相對不高，因此，尋找準確、檢出率高的檢驗方法是當前檢驗人員面對的首要問題?；谏鲜銮闆r，本文以在我中心就診的疑似性病患者58例作為研究對象，對熒光定量PCR檢測性病的結(jié)果進行分析，內(nèi)容如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

抽取2016年1月至2017年1月在我中心就診的疑似性病患者58例作為研究對象，其中男性患者38例，女性患者20例，年齡20～48歲，平均年齡（33.5±3.8）歲，本次研究經(jīng)單位倫理委員會批準，入選者均對本次研究內(nèi)容知情同意，并在知情研究同意書上簽字確認。醫(yī)生經(jīng)過詢問患者病史、查看體征并根據(jù)癥狀后，58例疑似性病患者均被臨床診斷為性病。

1.2 方法

入選者均進行熒光定量PCR檢測，女性患者使用窺陰器擴張，將宮頸外分泌物使用無菌生理鹽水棉球洗凈，再將無菌棉拭子插入宮頸內(nèi)1～2cm處，旋轉(zhuǎn)5～10s，取出宮頸分泌物，將棉拭子置入無菌玻璃管中，送檢。男性患者使用無菌棉拭子在尿道口旋轉(zhuǎn)5～10s，刮取的分泌物密封送檢。檢驗者先對標本進行處理，在標本試管中加入1ml無菌生理鹽水，充分搖晃均勻后，吸取1.5ml液體放入離心管中，離心5min后，沉淀加入無菌生理鹽水1ml，搖晃均勻后離心5min，在重復(fù)洗滌1次。沉淀后加入50μ1DNA提取液，充分搖晃均勻，沸水10min后放在4℃環(huán)境下靜置6h，再離心5min后，取上清液加入到反應(yīng)管中。同時提取梯度稀釋標準品放入反應(yīng)管中。離心5s后放入PCR擴增儀，進行擴增和反應(yīng)前熒光檢測，在規(guī)定的條件下反應(yīng)10個循環(huán)后，放置在33℃環(huán)境下保溫，1min后迅速將反應(yīng)管放入熒光檢測儀中，讀取并記錄讀數(shù)。觀察患者的情況，將檢測結(jié)果統(tǒng)計分析。

1.4 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料應(yīng)用平均值±標準差(±s)，計量資料采用t檢驗，組間對比進行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2.結(jié)果

58例疑似患者熒光定量PCR檢測結(jié)果與臨床診斷結(jié)果比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1 疑似患者經(jīng)熒光定量PCR檢測結(jié)果與臨床診斷結(jié)果比較[n=58，(%)]

3.討論

社會的發(fā)展，生產(chǎn)力的提高，使人們的生活水平不斷提升，交往活動頻繁，人們的思想觀念發(fā)生了很大的轉(zhuǎn)變，而改革開放進程加快，國外開放思想的涌入，使人們的性意識也發(fā)生了極大的改變，不潔性行為情況的發(fā)生導(dǎo)致我國性疾病人數(shù)逐漸增多，對人們的健康造成了嚴重的威脅[2]。而我國醫(yī)療服務(wù)系統(tǒng)尚未完善，一些人缺乏性衛(wèi)生意識，或者具有不完全的性衛(wèi)生意識但未對自我保護加以重視，從而導(dǎo)致我國公共衛(wèi)生建設(shè)和社會經(jīng)濟發(fā)展受到了影響。因此，加強對性疾病的監(jiān)察和監(jiān)管，杜絕性疾病發(fā)生，及早發(fā)現(xiàn)、診斷疑似性病患者，確診后盡早治療對降低性病損害健康的程度起到了重要的意義。

目前，臨床中對于性病的檢測，傳統(tǒng)的衣原體培養(yǎng)方式，但這種方式需要較高的培養(yǎng)條件，需要特殊的設(shè)備，檢測花費時間長，因此，多數(shù)實驗室很難開展該技術(shù)[3]。此外，ELISA法也是臨床中常用的檢測技術(shù)，該方式的檢測敏感性高，檢測速度快，但準確性低，而且對一些早期癥狀不明顯的性病，檢出率也存在差異性[4]。因此，需要一種花費時間短，檢測結(jié)果準確性高的檢測方法，從而起到及時、準確的診斷，為臨床治療提供依據(jù)的目的。

熒光定量PCR檢測技術(shù)是臨床中常用的一種基因診斷方法，熒光定量PCR檢測技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號的累積，對PCR進程實時監(jiān)測，最后通過標準曲線對位置模板進行定量分析。在相關(guān)研究中已經(jīng)證實，該方法具有高靈敏性和特異性，目前已在臨床中頻繁的使用。該項檢測技術(shù)在性病的檢測上，是通過搜集的分泌物，按照要求實施檢測，在檢測中排除了環(huán)境因素的影響，自動分析數(shù)據(jù)，因此，受到干擾小，準確率高，進而提供了臨床中對性病的檢測。而且，隨著年齡的增長，人體內(nèi)的性激素水平呈現(xiàn)出逐年升高的趨勢，性行為較為活躍，這也是近年來性疾病發(fā)生率逐年提高的因素。本次研究中，對來我中心就診的疑似病例進行熒光定量PCR檢測，與臨床診斷進行對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，檢測結(jié)果與臨床診斷結(jié)果無明顯差異。這說明熒光定量PCR檢測具有較高的準確性。與孫海錄[5]在同類研究中得出的結(jié)果具有一致性，進一步證實了熒光定量PCR檢測的準確性高。

綜上所述，熒光定量PCR檢測性病具有較高的診斷價值，其檢測準確性高，花費時間短，能夠為臨床治療奠定基礎(chǔ)，適合在臨床性病檢測中推廣應(yīng)用。

[1]魏霜，汪天杰，龍陽，周廣彪，林春貴，黃帥，吳希陽.多重富集定量PCR(ME-qPCR)同時檢測4種食源性病原弧菌[J].中國農(nóng)業(yè)科學，2016，49(23):4619-4627.

[2]高宇琳.熒光定量PCR檢測3種性病病原體結(jié)果分析[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11(17):632-633.

[3]韋平宣.廣西河池地區(qū)性病門診首次就診患者泌尿生殖道病原體熒光定量PCR檢測結(jié)果分析[J].分子診斷與治療雜志，2012，4(05):339-342.

[4]鮮勝.熒光定量PCR檢測3種常見性病病原體結(jié)果臨床分析[J].醫(yī)學信息，2013，26(4):178.

[5]孫海錄.熒光定量PCR檢測性病臨床結(jié)果分析[J].中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學專業(yè))，2011，13(35):247.