人參皂苷Rd分析方法、藥物代謝動力學(xué)及劑型研究進(jìn)展

郝秀華，孫悅，王蕾，劉銀燕

（吉林大學(xué)藥學(xué)院，長春 130021）

人參皂苷Rd是中國傳統(tǒng)藥材人參的主要生物活性成分之一，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，人參皂苷Rd具備廣泛的藥理活性，主要有治療潰瘍性結(jié)腸炎、抗肝纖維化、提高機(jī)體免疫力、改善心腦血管系統(tǒng)、保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)、抑制腫瘤細(xì)胞生長、抗炎鎮(zhèn)痛、延緩衰老等作用[1～4]。本文對人參皂苷Rd分析方法、劑型及藥物代謝動力學(xué)的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，為人參皂苷Rd的藥物新劑型開發(fā)與利用提供參考。

1 人參皂苷Rd分析方法研究

人參皂苷Rd的含量測定方法有高效液相色譜法（HPLC)、超高效液相色譜法（UPLC）、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。

1.1 高效液相色譜法

HPLC具有檢測范圍廣、分析速度快、靈敏度高等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于中藥成分的含量測定。目前，關(guān)于HPLC測定人參皂苷Rd含量的報(bào)道較多，多采用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的C18色譜柱。宋小妹等[5]采用高效液相色譜法建立了漢中參中人參皂苷Rd的含量測定方法，以V（乙腈）：V（水）＝32∶64為流動相、ODS柱為色譜柱、203nm為波長，檢測漢中參葉中人參皂苷Rd含量，結(jié)果表明，人參皂苷Rd在9g/mL～90g/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系較好，回收率可達(dá) 99.97%。Ya等[6]利用 AlltechC18柱（250mm 4.6mm，5.0m）、以V（乙腈）：V（水）＝35∶65為流動相、203nm為檢測波長，建立一種HPLC測定方法，對三七中人參皂苷Rd含量進(jìn)行檢測，研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rd在2.06g/mL～112.88g/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。黃健等[7]利用HPLC法對三七養(yǎng)血膠囊中的人參皂苷Re、Rd、Rg1、Rb1含量分別進(jìn)行測定，結(jié)果良好。

1.2 超高效液相色譜法

與HPLC相比，UPLC分離效果更優(yōu)、分析時間大大縮短，為人參皂苷Rd的分析鑒定提供了新的平臺。逄世峰等[8]采用超高效液相色譜法，分別測定了西洋參中多種成分的含量，該研究將7種人參皂苷進(jìn)行定量測定，結(jié)果表明，人參皂苷Rd的線性關(guān)系較好，可被精準(zhǔn)測定。曹樹萍等[9]利用UPLC色譜柱，建立了參麥注射液中人參皂苷Rd及其他中間體的質(zhì)量研究方法，以乙腈-水體系為流動相進(jìn)行梯度洗脫，于36min內(nèi)分離出包含人參皂苷 Rd在內(nèi)的9個皂苷成分，分離測定效果好。蔡艷等[10]比較了幾種色譜柱的分析效果后，采用Waters Acquity BEH C18色譜柱對人參皂苷提取物中的成分進(jìn)行含量檢測，結(jié)果表明，在20min內(nèi)可完成人參皂苷Rd的有效分離和含量測定。

1.3 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

Cao等[11]采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，以 ACQUITYUPLCTMBEH C18為色譜柱、水-甲醇體系為流動相進(jìn)行梯度洗脫，對人參皂苷Rd在大鼠的腦內(nèi)分布進(jìn)行研究，結(jié)果表明，人參皂苷Rd在1.0ng/mL～1000ng/mL范圍內(nèi)可被檢測到；質(zhì)譜采用ESI負(fù)離子模式掃描、多反應(yīng)檢測模式（MRM）對人參皂苷Rd在大鼠體內(nèi)的藥物代謝物進(jìn)行研究，分析并推出了人參皂苷Rd體內(nèi)代謝物結(jié)構(gòu)，為人參皂苷Rd體內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)化研究提供參考。張家偉等[12]采用超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對大鼠灌用藥物后血液中幾種人參皂苷成分進(jìn)行測定，利用CORTECS C18柱、以含0.1%甲酸的水-0.1%的甲酸乙腈溶液為流動相、在0.5mL/min的流速下進(jìn)行梯度洗脫，質(zhì)譜采用負(fù)離子檢測方式進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測，結(jié)果顯示，大鼠血漿中人參皂苷Rd檢測可在3min內(nèi)完成，并且此方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)。趙瑛等[13]建立了西洋參中人參皂苷Rd及幾種人參皂苷含量的UPLC-MS分析鑒定方法，以C18柱為色譜柱，用乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）的流動相進(jìn)行梯度洗脫，研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rd的線性關(guān)系較好，濃度可被準(zhǔn)確檢測。

綜上所述，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)更加廣泛地應(yīng)用于人參皂苷Rd的體內(nèi)、外代謝，分析等實(shí)驗(yàn)研究過程中。

2 人參皂苷Rd的藥物代謝動力學(xué)研究

目前，人參皂苷Rd的藥物代謝動力學(xué)研究多集中于人、犬、大鼠體內(nèi)，給藥方式主要以灌胃和注射為主，研究方法主要有血藥濃度法和尿藥濃度法。

2.1 吸收

2.1.1 灌胃給藥 林力等[14]考察4種人參皂苷的大鼠體內(nèi)藥物代謝動力學(xué)，分別以低、中、高3組劑量灌胃給藥，HPLC法測定給藥后不同時間點(diǎn)大鼠血藥濃度，繪制藥時曲線，并分析藥物代謝動力學(xué)參數(shù)，研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rd3組劑量給藥后，藥物達(dá)峰時間相同（均為8h），給藥劑量與血藥濃度均呈線性。但是，口服人參皂苷Rd吸收及生物利用度低，所以，采用口服給藥形式較少。

2.1.2 在體腸循環(huán) 羅德鳳等[15]研究人參皂苷Rd固體脂質(zhì)納米粒（Rd-SLN）在大鼠腸道的吸收行為時發(fā)現(xiàn)，與人參皂苷Rd對照液相比，Rd-SLN存在緩釋特點(diǎn)且在回腸段吸收率高于其它腸段。鄭夢成等[16]通過大鼠體腸吸收模型，進(jìn)一步研究人參皂苷Rd的吸收機(jī)制和腸吸收變化情況發(fā)現(xiàn)，其在小腸的吸收存在差異，吸收速率常數(shù)以回腸最高，其次為十二指腸和空腸。

2.2 分布

Li等[17]在對靜脈給藥鼠的組織分布研究中發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rd靜脈注射后迅速分布到不同組織，肺臟中最多，肝臟、腎臟、腦內(nèi)藥物含量最少；靜脈給藥24h后，各臟器中的人參皂苷Rd幾乎檢測不到。

2.3 代謝

2.3.1 尿液中的代謝產(chǎn)物 大量研究表明，人參皂苷Rd給藥后于體內(nèi)主要代謝為多種皂苷，少量以原型藥存在。Yang等[18]利用HPLC-MS分析方法研究大鼠口服和靜脈注射人參皂苷Rd后，尿液中藥物代謝情況，尿液樣品中可檢測到少量原型藥及其他7種代謝產(chǎn)物，包括人參皂苷Rb1、Rg3、Rh2、Rb1同分異構(gòu)體及3種結(jié)構(gòu)因羥基位置而不同的人參皂苷Rd氧化產(chǎn)物?？偨Y(jié)大鼠在口服給藥和靜脈注射后人參皂苷Rd糞便和尿液的代謝路徑，進(jìn)一步證實(shí)了人參皂苷Rd的代謝轉(zhuǎn)化方式主要是結(jié)合、水解、氧化及異構(gòu)化代謝。

2.3.2 腸道菌叢代謝產(chǎn)物 高霞等[19]依據(jù)鼠體內(nèi)腸道菌群的生理特性，研究了離體大腸菌群對人參皂苷Rd的轉(zhuǎn)化代謝發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rd主要經(jīng)脫氫和脫糖基方式代謝為4個產(chǎn)物，分別為人參皂苷F2、Rh2、Rg3及原人參二醇。

2.4 排泄

SUN等[20]采用HPLC法對人參皂苷Rd在大鼠體內(nèi)的組織排泄進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，大鼠口服人參皂苷Rd24h后，尿、糞累積排泄量分別為給藥量的63.36%和18.85%，說明人參皂苷Rd主要經(jīng)尿液排泄。

2.5 藥物代謝動力學(xué)參數(shù)特征

劉霞[21]以人參皂苷Rd20mg/kg的劑量對大鼠進(jìn)行靜脈注射給藥，收集處理各時間點(diǎn)血漿樣品，采用HPLC法分析血藥濃度變化，研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rd靜脈注射后藥物代謝動力學(xué)特征呈二室模型，符合一級動力學(xué)消除。此外，人們也發(fā)現(xiàn)，健康成年人體內(nèi)人參皂苷Rd的血漿清除率較慢，隨劑量的增加其消除半衰期改變不大，約18h左右。人連續(xù)給藥后，體內(nèi)只存在輕度的藥物蓄積，消除半衰期延長到20.5h[22]。

3 藥物劑型研究

目前，研究較多的人參皂苷Rd制劑主要為注射劑，這種制劑減輕了吞服困難病患的用藥問題，同時，還可避免其經(jīng)胃腸道給藥后，因肝臟的代謝，使進(jìn)入體循環(huán)的藥量減少、藥效降低，提高了人參皂苷Rd的生物利用度；但中藥注射劑普遍存在不同程度的不良反應(yīng)，且注射用具及注射劑中的輔料常導(dǎo)致注射部位疼痛，對患者產(chǎn)生一定傷害，因此，近幾年人們對人參皂苷Rd的劑型進(jìn)行了較深入地研究，設(shè)計(jì)出幾種效果優(yōu)良的劑型。

3.1 遲釋制劑

腸溶制劑屬于遲釋制劑，可以避免藥物在胃中發(fā)生降解，提高目標(biāo)位置的藥物濃度，增強(qiáng)治療效果。劉霞[21]根據(jù)人參皂苷Rd的理化性質(zhì)，模擬人體腸道的特征，制備了一種人參皂苷Rd腸溶膠囊，并對該劑型灌胃大鼠后進(jìn)行體內(nèi)藥物腸道分布研究，研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rd腸溶膠囊在胃中不溶解，于結(jié)腸大量釋藥，發(fā)揮對潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用，其治療機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

3.2 貼劑

人參皂苷Rd口服吸收利用度低，注射給藥可能存在毒性反應(yīng)，因此，出現(xiàn)了對人參皂苷Rd經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的研究。程軍軍[23]研究了不同滲透促進(jìn)劑對人參皂苷Rd透皮吸收的影響后，優(yōu)化制備一種人參皂苷Rd貼劑。以聚丙烯酸樹脂、癸二酸二丁醋、琥珀酸溶于丙酮、異丙醇、無水乙醇得到的混合溶液作為壓敏膠液，加入溶解了滲透促進(jìn)劑（2%氮酮、1%月桂醇、5%薄荷醇）的人參皂苷Rd-丙二醇溶液，將此含藥壓敏膠液均勻涂布、干燥、即得貼劑。大鼠透皮試驗(yàn)表明，此人參皂苷Rd貼劑可明顯抑制炎癥引發(fā)的大鼠足腫脹，發(fā)揮抗炎作用。

3.3 固體脂質(zhì)納米粒

為了提高人參皂苷Rd的生物利用度，劉德育等[24]以人參皂苷Rd、單硬脂酸甘油酯、大豆卵磷脂于70℃水浴下溶于無水乙醇的混合液為有機(jī)相，以溶解Poloxamer 188的水溶液為水相，采用高壓乳勻法，制備了人參皂苷Rd固體脂質(zhì)納米粒，考察脂質(zhì)體粒徑、外觀及包封率，脂質(zhì)納米粒表面均勻分散，顆粒大小相似，有良好穩(wěn)定性，在4℃下保存4周后，粒徑和包封率的變化不大，結(jié)果較理想。同時，研究了其在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)發(fā)現(xiàn)，與原型藥相比，該劑型可提高體內(nèi)血藥濃度、改善藥物代謝動力學(xué)性質(zhì)、提高人參皂苷Rd的生物利用度。

3.4 環(huán)糊精包合物

基于人參皂苷Rd難溶于水，吸收利用較差的特點(diǎn)，姬海婷等[25]在60℃條件下利用溶劑-攪拌法制備了人參皂苷Rd的羥丙基--環(huán)糊精包合物，結(jié)果顯示，人參皂苷Rd可與環(huán)糊精形成1-1型包合物，且人參皂苷Rd在環(huán)糊精中的相溶解度曲線為AL型，包合物形式對人參皂苷Rd有良好的增溶效果，對其臨床應(yīng)用具有重大意義。

4 小結(jié)

人參皂苷Rd作為人參的主要活性成分，藥理作用廣泛。在我國，人參皂苷Rd的藥用資源十分豐富，其分析方法多樣化，主要以液相色譜技術(shù)、色譜-光譜聯(lián)用技術(shù)為主。人參皂苷Rd藥物代謝動力學(xué)研究尚未完善，已有文獻(xiàn)研究表明，其體內(nèi)藥物代謝動力學(xué)符合二室模型，為一級動力學(xué)消除；口服吸收少，多聚集于結(jié)腸；肺臟中藥物分布最多，其次為肝臟、腎臟，腦內(nèi)最少；根據(jù)近年來文獻(xiàn)報(bào)道，人參皂苷Rd靜脈給藥后，尿液中代謝產(chǎn)物形式可達(dá)7種。此外，根據(jù)人參皂苷Rd理化性質(zhì)進(jìn)行的劑型設(shè)計(jì)研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)糊精類包合形式可以增加其溶解度；制備成脂質(zhì)體劑型可提高藥物生物利用度；制備成腸溶制劑可增強(qiáng)藥物靶向性，達(dá)到治療效果；經(jīng)皮給藥系統(tǒng)可以簡化給藥方式，減少毒副作用。

綜上所述，人參皂苷Rd有極大的研究發(fā)展空間，隨著現(xiàn)代科技分析技術(shù)的發(fā)展，人參皂苷Rd的研究會得到更系統(tǒng)完善的補(bǔ)充，為其進(jìn)一步應(yīng)用提供依據(jù)。

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