血芙蓉化學(xué)成分研究

朱昆，白鳳芝，劉玉梅

（吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院藥學(xué)部，長春 130031）

血芙蓉（TeucriumviscidumBl）又名血見愁、山藿香、假紫蘇、皺面草、肺形草等，為唇形科香科屬植物，始載于《峨眉山藥用植物調(diào)查報告》，《生草藥性備要》稱其為血芙蓉，《福建中草藥》稱其為肺形草，是民間常用的中草藥[1]，主要分布于我國的江蘇省、浙江省、江西省、福建省、云南省等地。其味苦，微辛，性涼，具有涼血止血、解毒消腫的功效，主治咳血、吐血、肺癰、跌打損傷、痔瘡腫痛、腳癬、毒蛇咬傷及狂犬咬傷等癥[2]?，F(xiàn)代臨床研究發(fā)現(xiàn)，血芙蓉對病毒性結(jié)膜炎還具有一定的治療作用；以血見愁為君藥，對婦女非周期性子宮出血也取得良好的臨床療效[3～5]。

目前，民間對血芙蓉的應(yīng)用較為普遍，但是關(guān)于本藥化學(xué)成分的研究相對較少。為了更好地開發(fā)利用血芙蓉，尋找其活性化合物，本研究對產(chǎn)自江蘇省的血芙蓉化學(xué)成分開展了較為系統(tǒng)的研究，共分離鑒定出12個化合物：山奈酚（1）、山奈酚-3-O--D-吡喃葡萄糖苷（2）、山奈酚-3-O--D-吡喃葡萄糖芹糖苷（3）、山奈酚-3-O---蕓香糖苷（4）、5，8-橋二氧麥角甾-6，22-雙烯-3-醇（5）、6，7-二甲氧基香豆素（6）、棕櫚酸--單甘油酯（7）、3，4-二羥基苯甲酸（8）、正二十六烷酸（9）、胡蘿卜苷（10）、豆甾醇（11）、-谷甾醇（12），其中，化合物2、3、4、5、7、8為首次從血芙蓉中分離獲得。

1 材料與方法

1.1 材料

BrukerAM-400型核磁共振儀（德國 Bruker公司）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；薄層色譜板（煙臺化工研究所）；X4型顯微熔點測定儀（北京泰克儀器有限公司）；全部試劑（分析純，北京化工廠）。

血芙蓉藥材采購于蘇州市天靈中藥飲片有限公司，經(jīng)鑒定為正品血芙蓉（T.viscidum Bl）藥材。

1.2 方法

取血芙蓉干燥全草藥材 2kg，粉碎后用乙醇（70%）進(jìn)行回流提取，提取液減壓蒸餾后得到620g乙醇提取物。將提取物溶于水中，依次經(jīng)氯仿、乙酸乙酯及正丁醇萃取，得3部分萃取物和水層部分。用硅膠色譜柱對乙酸乙酯萃取物（120g）進(jìn)行反復(fù)分離，用氯仿-甲醇（v∶v=15∶1～1∶1）溶液梯度洗脫，再將分離得到的部分反復(fù)重結(jié)晶、制備薄層層析后得化合物 3（48mg）、4（79mg）、5（70mg）、8（110mg）、10（125mg）。用硅膠色譜柱對氯仿萃取物（70g）進(jìn)行反復(fù)分離，用石油醚-乙酸乙酯（v∶v=25∶1～1∶1）溶液梯度洗脫，再將分離得到的部分反復(fù)重結(jié)晶、制備薄層層析后得化合物 1（50mg）、2（69mg）、6（100mg）、7（118mg）、9（57mg）、11（118mg）和 12（90mg）。以上所分得的化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁共振譜以及TLC薄層層析鑒別實驗最終確定。

2 結(jié)果

化合物 1：黃色粉末（甲醇），mp226℃～228℃。鹽酸鎂粉反應(yīng)（+），表明該化合物為黃酮類化合物。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)（+），表明該化合物存在酚羥基。1HNMR（500MH，CD3OD）：6.19（1H，d，H-6），6.40（1H，d，H-8），8.11（1H，d，H-2′，H-6′），6.89（1H，d，H-3′，H-5′）。13CNMR（125MH，CD3OD）:148.2（C-2），137.3（C-3），177.6（C-4），162.4（C-5），994（C-6），165.5（C-7），94.6（C-8），158.4（C-9），1 047（C-10），124.1（C-1′），130.7（C-2′），116.7（C-3′），160.6（C-4′），116.4（C-5′），131.0（C-6′）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報道基本一致，故鑒定該化合物為山奈酚。

化合物 2：黃色粉末（甲醇），mp185℃～186℃。該化合物不溶于水，易溶于甲醇。鹽酸-鎂粉反應(yīng)（+）、Molish反應(yīng)（+）、三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)（+），表明該化合物中存在酚羥基。酸水解檢測出D-葡萄糖，表明該化合物為黃酮苷類物質(zhì)。1HNMR（500MH，CD3OD）：8.15（2H，d，H-2′，H-6′），6.92（2H，d，H-3′，H-5′），6.24（1H，d，H-6），6.47（1H，d，H-8），5.19（1H，d，Glc-H-1），3.83～3.37 為葡萄糖上的其它質(zhì)子信號。13CNMR（125MH，CD3OD）:159.0（C-2），135.1（C-3），180.1（C-4），162.9（C-5），99.9（C-6），165.8（C-7），95.3（C-8），158.9（C-9），106.0（C-10），123.1（C-1′），133.0（C-2′），115.9（C-3′），160.0（C-4′），115.8（C-5′），133.0（C-6′），Glc:105.0（C-1），73.4（C-2），75.1（C-3），69.9（C-4），76.9（C-5），61.7（C-6）。上述化合物的波譜數(shù)據(jù)及理化性質(zhì)特點同文獻(xiàn)[7]的研究結(jié)果較為一致，故鑒定化合物2為山奈酚-3-O--D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 3：黃色針晶（甲醇），mp195℃～196℃。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)（+），表明該化合物中存在酚羥基。鹽酸-鎂粉反應(yīng)（+）、酸水解檢出D-葡萄糖和芹糖、Molish反應(yīng)（+），表明該化合物為黃酮苷類物質(zhì)。1HNMR（500MH，CD3OD）：8.2（2H，d，H-2′，H-6′），6.95（2H，d，H-3′，H-5′），6.24（1H，d，H-6），6.51（1H，d，H-8），5.19（1H，d，Glc-H-1），4.56（1H，d，Api-H-1），3.86～3.29為葡萄糖和芹糖其它的質(zhì)子信號。13CNMR（125MH，CD3OD）:159.4（C-2），136.5（C-3），179.6（C-4），164.1（C-5），100.9（C-6），167.0（C-7），95.7（C-8），160.4（C-9），106.1（C-10），123.0（C-1′），132.9（C-2′），116.8（C-3′），161.7（C-4′），116.6（C-5′），131.9（C-6′），Glc:105.4（C-1），73.3（C-2），76.6（C-3），70.7（C-4），78.2（C-5），65.5（C-6）。Api:101.0（C-1），73.1（C-2），79.2（C-3），74.9（C-4），61.4（C-5）。上述化合物的波譜數(shù)據(jù)及理化性質(zhì)同文獻(xiàn)[8]的研究結(jié)果較為一致，故鑒定化合物3為山奈酚-3-O--D-吡喃葡萄糖芹糖苷。

化合物4：黃色針晶（甲醇）。鹽酸鎂粉反應(yīng)（+）、Molish反應(yīng)（+），表明該化合物為黃酮苷類物質(zhì)。1HNMR（500MHz，CD3OD）：6.14（1H，d，J=1.5Hz，H-6），6.33（1H，d，J=1.5Hz，H-8），8.01（1H，d，J=9.0Hz，H-2′，H-6′），6.82（1H，d，J=9.0Hz，H-3′，H-5′），5.06（1H，d，J=7.5Hz，Glu-H-1），4.46（1H，s，Rha-H-1），1.04（3H，d，J=6.5Hz，CH3）；1CNMR（125MHz，CD3OD）:158.5（C-2），135.2（C-3），179.7（C-4），162.9（C-5），100.4（C-6），166.3（C-7），95.1（C-8），159.2（C-9），105.4（C-10），123.1（C-1′），132.7（C-2′），116.2（C-3′），161.7（C-4′），116.1（C-5′），132.8（C-6′），Glc:104.2（C-1），76.1（C-2），78.2（C-3），71.6（C-4），77.7（C-5），70.1（C-6），Rha:102.5（C-1），72.3（C-2），72.1（C-3），74.0（C-4），70.1（C-5），18.1（C-6）。上述化合物的波譜數(shù)據(jù)及理化性質(zhì)同文獻(xiàn)[7]的研究結(jié)果較為一致，故鑒定化合物4為山奈酚-3-O--蕓香糖苷。

化合物5：無色針晶（氯仿），mp.174℃～175℃，Liebermann-Burchard反應(yīng)（+）。1HNMR（500MHz，CDC13）；6.46（1H，d，J=8.5Hz，H-7），6.21（1H，d，J=8.5Hz，H-6），5.16（1H，dd，J=15.5，7.5Hz，H-22），5.11（1H，dd，J=15.5，7.5Hz，H-23），3.91（1H，s，H-3），0.96（3H，d，J=6.5Hz，H-21），0.87（3H，d，J=6.5Hz，H-28），0.84（3H，s，H-19），0.80（3H，s，H-18），0.79（3H，d，J=7.0Hz，H-27），0.78（3H，d，J=7.5Hz，H-26）。13CNMR（125MHz，CDCl3）:136.0（C-6），136.0（C-22），133.0（C-23），131.0（C-7），82.4（C-5），80.1（C-8），66.9（C-3），56.7（C-17），51.9（C-14），51.4（C-9），44.8（C-13），43.0（C-24），40.1（C-20），39.5（C-12），37.1（C-4），36.4（C-10），34.9（C-1），33.3（C-25），30.2（C-2），28.9（C-16），23.7（C-11），21.2（C-21），20.9（C-15），19.8（C-27），19.4（C-26），18.1（C-19），18.0（C-28）和 12.6（C-18）。上述化合物的波譜數(shù)據(jù)及理化性質(zhì)同文獻(xiàn)[9]的研究結(jié)果較為一致，故鑒定該化合物5為5，8-橋二氧麥角甾-6，22-雙烯-3-醇。

化合物6：無色片狀晶體（甲醇），mp.136℃～137℃。紫外燈365nm下有強(qiáng)烈藍(lán)色熒光。1HNMR（500MHz，CDCl3）：3.88（3H，s，6-OCH3），3.99（3H，s，7-OCH3），6.30（1H，d，J=9.4Hz，H-3），6.88（1H，s，H-8），6.89（1H，s，H-5），7.64（1H，d，J=9.4Hz，H-4）。13CNMR（125MHz，CDCl3）:161.8（C-2），112.9（C-3），142.9（C-4），109.0（C-5），149.9（C-6），152.7（C-7），99.9（C-8），145.9（C-9），111.6（C-10），56.7（6-OCH3），57.1（7-OCH3）。上述化合物的波譜數(shù)據(jù)及理化性質(zhì)同文獻(xiàn)[10]的研究結(jié)果較為一致，故鑒定化合物6為6，7-二甲氧基香豆素。

化合物7：白色粉末，mp.70℃～71℃。1HNMR（500MHz，CD3OD）：0.83（3H，t，J=7.0Hz，H-16），1.53（2H，m，H-3），2.22（2H，t，J=7.5Hz，H-2），3.44（1H，m，H-3b′），3.54（1H，m，H-3a′），3.75（1H，m，H-2′），3.99（1H，m，H-1b′），4.07（1H，m，H-1a′）為甘油醇上的氫質(zhì)子信號。13CNMR（125MHz，CD3OD）:174.6（C-1），70.5（C-2′），65.7（C-1′），62.9（C-3′），34.0（C-2），31.9（C-14），13.7（C-16），22.6～29.5 為直鏈上的其它碳信號。上述化合物的波譜數(shù)據(jù)及理化性質(zhì)同文獻(xiàn)[11]的研究結(jié)果較為一致，故鑒定化合物7為棕櫚酸--單甘油酯。

化合物8：白色針晶（甲醇），mp.195℃～198℃。三氯化鐵-鐵氰化鉀（+），表明該化合物中存在酚羥基。1HNMR（500MH，CD3OD）：7.35（1H，brs，H-2），6.71（1H，d，J=8.0Hz，H-5），7.33（1H，dd，J=8.0，2.0Hz，H-6）。13CNMR（125MH，CD3OD），：123.7（C-1），118.0（C-2），146.3（C-3），151.7（C-4），115.9（C-5），124.0（C-6），171.1（C-7）。上述化合物的波譜數(shù)據(jù)及理化性質(zhì)同文獻(xiàn)[12]的研究結(jié)果較為一致，故鑒定化合物8為3，4-二羥基苯甲酸。

化合物9：白色固體（氯仿），該化合物易溶于氯仿，丙酮。1HNMR（500MHz，CDCl3）：2.31（2H，t，J=7.5Hz，H-2），1.62（2H，m，H-3），1.19-1.23（44H，m，4～25），0.83（3H，t，J=7.0Hz，H-26）。13CNMR（125MHz，CDCl3）：178.7（C-1），34.0（C-2），32.1（C-22），29.3～29.8（C-4～24），24.6（C-3），22.9（C-25），14.3（C-26）。上述化合物的波譜數(shù)據(jù)及理化性質(zhì)同文獻(xiàn)[13]的研究結(jié)果較為一致，故鑒定化合物9為正二十六烷酸。

化合物 10：白色粉末（甲醇），mp.291℃～292℃，該化合物易溶于吡啶，微溶于甲醇。同胡蘿卜苷對照品薄層層析后的Rf值較為一致，混合后熔點未出現(xiàn)下降。Liebermann-Burchard反應(yīng)（+），故鑒定化合物10為胡蘿卜苷。

化合物11：白色針狀晶體（氯仿）。該化合物難溶于水，易溶于氯仿。同豆甾醇對照品共薄層層析后的Rf值較為一致，混合后測定的熔點未見下降，故鑒定化合物11為豆甾醇。

化合物12：白色針狀晶體（氯仿），mp.141℃～142℃。該化合物難溶于水，易溶于氯仿，同 -谷甾醇對照品共薄層層析后的Rf值較為一致，混合后熔點未出現(xiàn)下降，故鑒定化合物11為 -谷甾醇。

3 討論

血芙蓉在民間應(yīng)用比較廣泛，但國內(nèi)對其化學(xué)成分的研究相對較少。有國外學(xué)者從血芙蓉中分離鑒定出2種新的新克羅烷二萜類化合物[14]。為了進(jìn)一步開發(fā)和擴(kuò)大血芙蓉的藥用資源，本研究采用色譜法對血芙蓉進(jìn)行分離純化，根據(jù)其物理化學(xué)性質(zhì)及光譜數(shù)據(jù)鑒定得到 12 個化合物，其中，化合物 2、3、4、5、7和8為首次從該植物中分離得到。通過本研究，不僅為血芙蓉的實驗室研究提供一定參考，更為將來血芙蓉的開發(fā)和利用提供明確依據(jù)。

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