人玻璃體液間隔多次微量取樣方法研究

徐道通 錢冠宇

貴州省遵義市公安局紅花崗分局刑事科學(xué)技術(shù)室，貴州 遵義 563000

死亡時(shí)間(PMI)推斷是法醫(yī)病理學(xué)的一大難點(diǎn)，現(xiàn)階段對于死者死亡事件的推斷需要綜合多項(xiàng)因素，如：嗜尸性昆蟲發(fā)育情況、胃內(nèi)容物殘留、尸體現(xiàn)象，盡管具有一定的參照標(biāo)準(zhǔn)，不過準(zhǔn)確性尚不能達(dá)到滿足。國內(nèi)外許多學(xué)者對玻璃體液變化規(guī)律與PMI進(jìn)行研究，主要來源于實(shí)驗(yàn)室的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，雖然找出了一些規(guī)律，但還未真正的應(yīng)用到人體死亡時(shí)間的推測上，且方法復(fù)雜、耗時(shí)，不能應(yīng)用于偵查實(shí)踐。只有研究并獲得人體玻璃體液相關(guān)離子濃度變化規(guī)律與PMI的關(guān)系，才能最終應(yīng)用于偵查破案及法庭科學(xué)上。

一、材料與方法

(一)材料

已知明確死亡時(shí)間的男女老少尸體110具，自2011年起，通過出勘非正常死亡，兇殺案，交通事故等尸體中獲得，共計(jì)三年時(shí)間。

(二)取樣方法

對有準(zhǔn)確死亡時(shí)間的110具尸體在死亡后每隔4h提取1次玻璃體液，由專人負(fù)責(zé)玻璃體液取樣和記錄，進(jìn)針方向在死者眼球外眥側(cè)，進(jìn)針位置在角膜緣外約5mm，留置針處理，針頭居于中央，對針尾進(jìn)行固定，使用1ml注射器每4h進(jìn)行一次抽取，抽取量在50μl，所有的樣本用去離子水1：4比例稀釋，編號入EP管，-40℃冰凍保存；在確定死亡時(shí)間的尸體，每間隔4小時(shí)進(jìn)行雙眼交替取樣。

二、樣本檢測及統(tǒng)計(jì)分析

(一)檢測

以上檢測分三次完成，第一次45具尸體于2012年12月完成，第二次54具尸體于2013年8月完成，第三次11具尸體于2014年3月完成。

(二)檢測方法

37℃水浴解凍，對110具尸體死后4h、8h、12h、16h、20h、24h、28h、32h采集樣本用美國BECKMAN系列全自動(dòng)生化分析儀，對提取液中的[Cl-]、[K+]、[Mg2+]、[Na+]、[Ca2+]、[P2+]等濃度實(shí)施檢測，檢測完成記錄數(shù)據(jù)并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，涉及到標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算、一元及多元回歸分析等統(tǒng)計(jì)分析和處理。

(三)統(tǒng)計(jì)分析

通過全自動(dòng)生化分析儀檢測得到的數(shù)據(jù)，通過SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用重復(fù)測量的方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。

三、結(jié)果

本文各類參數(shù)使用專業(yè)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS21.0，考慮到重復(fù)測量期間獲取的數(shù)據(jù)較多，而且部分?jǐn)?shù)據(jù)存在缺失，尤其是24h、28h、32h中數(shù)據(jù)缺失，影響到整個(gè)數(shù)據(jù)處理準(zhǔn)確性，遂將此部分?jǐn)?shù)據(jù)剔除，最終選擇的數(shù)據(jù)為4h、8h、16h、20h以及24h，將此階段不同時(shí)間點(diǎn)采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，研究表明不同時(shí)間點(diǎn)死者玻璃體液提取液中的[Cl-]、[K+]、[Mg2+]、[Na+]、[Ca2+]、[P2+]等濃度有明顯的差異性(P<0.001)，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對于其它時(shí)間點(diǎn)，考慮到數(shù)據(jù)不全面，無法做出判斷，將不同時(shí)間點(diǎn)測量的[Cl-]、[K+]、[Mg2+]、[Na+]、[Ca2+]、[P2+]等濃度進(jìn)行繪圖，初步研究認(rèn)為，隨著死者死亡事件的推遲，玻璃體液中的[K+]呈現(xiàn)出上升趨勢，而[Cl-]、[Mg2+]、[Na+]、[Ca2+]、[P2+]等離子濃度則呈現(xiàn)出下降趨勢，在不同時(shí)間點(diǎn)變化幅度方面，[K+]變化更大，而其他離子濃度變化較小。

四、討論

本文統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明：死后32h內(nèi)玻璃體液中其中[K+]含量變化的統(tǒng)計(jì)結(jié)果與劉茜等報(bào)道相似，我們運(yùn)用人體雙眼交替多次微量取樣法提取玻璃體液進(jìn)行離子濃度的研究，來對死亡時(shí)間進(jìn)行推測，這樣的方法最真實(shí)有效，避免人體與動(dòng)物之間的差異，影響對死亡時(shí)間的推斷。假如對同一尸體進(jìn)行不同時(shí)間的取樣，增加了樣本的使用率，加上單個(gè)個(gè)體玻璃體資源有限，環(huán)境及個(gè)體等因素的影響，不易應(yīng)用于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，得到的結(jié)果比較單一，可信度及精準(zhǔn)性較低?？紤]到現(xiàn)實(shí)中冰凍尸體對死后玻璃體離子濃度變化有一定的影響，以及尸體需要盡快的處理，死后更長時(shí)間的玻璃體的提取及研究。