Sels基因遺傳多態(tài)性與冠心病的關(guān)聯(lián)研究

謝 翔， 吳雪琴， 宋長(zhǎng)來(lái)， 鄭穎穎， 劉 芬， 吳婷婷， 李 龍， 馬依彤

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院1心臟中心， 烏魯木齊 830054； 2昌吉分院心血管內(nèi)科， 新疆 昌吉 831100；3新疆心血管病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 烏魯木齊 830054)

近年來(lái)研究表明，冠心病(CHD)的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，目前CHD已經(jīng)成為成年人發(fā)病和死亡的重要原因,已經(jīng)悄然成為危及人類(lèi)健康的首位疾病[1]。近年來(lái)新的危險(xiǎn)因素的發(fā)現(xiàn)，尤其是基因多態(tài)性的發(fā)現(xiàn)[2]，為廣大臨床醫(yī)生提供了新的診療思路。眾所周知，血糖、血脂異常及炎性反應(yīng)與冠心病有著密切的關(guān)聯(lián)。硒蛋白 S (Sels)基因可編碼 Sels 蛋白，并作為血清淀粉樣蛋白 A (SAA) 的受體存在[3]，通過(guò)與 SAA 相互作用參與糖、脂代謝及炎癥反應(yīng)[4-6]，在 2 型糖尿病、炎癥反應(yīng)、心血管疾病以及代謝性疾病之間建立了聯(lián)系。鑒于 SAA 及其受體 Sels 在炎癥反應(yīng)、血脂及血糖代謝中的重要作用，近年來(lái)二者在動(dòng)脈硬化、糖尿病、冠心病及其它炎癥方面的研究越來(lái)越多見(jiàn)。但是關(guān)于 Sels 遺傳多態(tài)性和冠心病之間的關(guān)系尚不清楚。本課題以遺傳多態(tài)性為切入點(diǎn)，選擇 Sels 基因多態(tài)性進(jìn)行分析，研究其和冠心病之間的關(guān)系，以期為冠心病的診療提供新思路。

1 研究?jī)?nèi)容與方法

1.1研究對(duì)象采用病例-對(duì)照研究的方法。納入人群均為2006 年1 月-2011年10 月期間新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院的住院患者。病例組納入標(biāo)準(zhǔn)：采用Judkin's 法行選擇性冠狀動(dòng)脈造影術(shù)，冠心病診斷參照美國(guó)心臟病協(xié)會(huì)的診斷標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)合臨床癥狀、病史、實(shí)驗(yàn)室檢查發(fā)現(xiàn)及心電圖改變至少一支或以上主要冠狀動(dòng)脈直徑≥50%。共入選冠心病患者1 416 例(冠心病組)。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)冠心病的家族史，并且胸部 X 線片、標(biāo)準(zhǔn) 12 導(dǎo)聯(lián)心電圖、血生化檢查均未見(jiàn)異常，以胸部不適癥狀就診且行冠狀動(dòng)脈造影正常者，共入選對(duì)照組1 373 例。

1.2采集血樣、生化指標(biāo)檢測(cè)及DNA提取研究對(duì)象空腹12 h 以上，抽取靜脈血5 mL，KEDTA抗凝于-80℃保存，備用。研究對(duì)象的血液生化指標(biāo)由新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心統(tǒng)一測(cè)定。DNA 的提取采用北京天根生化公司生產(chǎn)的全血基因組提取試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行 DNA 提取。

1.3標(biāo)簽SNP的選擇采用 Haploview4.2 軟件查找標(biāo)簽SNP ，共入選4個(gè)標(biāo)簽SNP (rs12910524，rs1384565，rs2101171和rs4965814)，如圖1所示。

圖1 采用Haploview4.2軟件選擇Sels基因標(biāo)簽SNPs

1.4基因分型采用TaqMan 技術(shù)進(jìn)行基因分型。PCR方法采用Applied Biosystems公司的TaqMan Universal Master Mix，基因分型的結(jié)果采用SDSv1.63 版本的終點(diǎn)分析軟件分析，結(jié)果如圖2所示。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料的比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，以Logistic回歸分析排除其他危險(xiǎn)因素的干擾，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1研究對(duì)象的臨床資料比較冠心病組危險(xiǎn)因素明顯多于對(duì)照組，對(duì)照組的年齡均高于冠心病組，見(jiàn)表1。

(3種不同的顏色代表不同的基因型)

2.2Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)卡方檢驗(yàn)結(jié)果顯示，4個(gè)SNP位點(diǎn)在對(duì)照組中均符合Hardy-Weinberg 平衡(P>0.05)。

2.3Sels基因多態(tài)性和冠心病的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示，rs12910524和rs1384565 2個(gè)位點(diǎn)與冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān),見(jiàn)表2。

2.4Sels基因單體型分析采用Sels基因4個(gè)SNPs位點(diǎn)構(gòu)建單體型。分析結(jié)果顯示，單體型分布頻率在冠心病組和對(duì)照組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表3。

2.5多因素分析為了剔除混雜因素的干擾，本研究采用非條件 Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，在排除混雜因素的影響后，rs1384565仍和冠心病的發(fā)生具有關(guān)聯(lián)，見(jiàn)表4。

表1 研究對(duì)象的的臨床資料比較

注：BMI：體質(zhì)指數(shù)；SBP: 收縮壓；DBP: 舒張壓；BUN: 血尿素氮；GLU: 血糖；TG: 甘油三酯； TC：總膽固醇；HDL-C：高密度脂蛋白；LDL-C：低密度脂蛋白

表2 Sels 基因標(biāo)簽 SNP 在病例和對(duì)照組中的分布/例(%)

注：1：等位基因； 2： 少見(jiàn)等位基因; MAF：等位基因頻率。

表3 Sels 基因單體型分布頻率/例(%)

表4 非條件Logistics回歸分析結(jié)果(前進(jìn)法)

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，Sels基因多態(tài)性和冠心病存在關(guān)聯(lián)性，本研究顯示Sels基因rs138456、rs12910524位點(diǎn)基因多態(tài)性與冠心病具有密切相關(guān)性。無(wú)論是基因型還是單體型，Sels基因多態(tài)性均增加了冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

許多研究表明，Sels不僅參與血糖的代謝，而且在脂類(lèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中具有重要的作用。Liu等[7]在糖尿病動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn),Sels 基因表達(dá)水平與血糖水平及胰島素水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，與甘油三酯水則呈現(xiàn)正相關(guān)。Sels基因高表達(dá)時(shí)達(dá)抑制糖原合成，減少胰島素對(duì)糖異生的關(guān)鍵限速酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的抑制作用，增加肝糖的輸出，這一現(xiàn)象提示 Sels基因表達(dá)和血脂及血糖的代謝密切相關(guān)。近年來(lái)較多的研究探討了Sels與糖尿病之間的關(guān)系[8]，并已經(jīng)有初步的研究結(jié)論，認(rèn)為Sels及其基因可能參與糖尿病的發(fā)病機(jī)制[9]。更有學(xué)者認(rèn)為Sels是搭建糖尿病與炎癥反應(yīng)之間的橋梁[10]。同時(shí)，大量證據(jù)顯示，炎癥在導(dǎo)致內(nèi)皮功能異常方面有重要的作用，而內(nèi)皮功能紊亂在動(dòng)脈硬化(AS)的發(fā)病機(jī)制中起主要作用。SAA 是一種公認(rèn)的炎癥反應(yīng)標(biāo)志物，可以激活 NF-κB 進(jìn)而介導(dǎo)和調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)，參與炎癥反應(yīng)。作為其功能受體，Sels可以通過(guò)與血清淀粉樣蛋白A相互作用進(jìn)而調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)[11-15]。Sels的生物學(xué)功能主要包括保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷、參與炎癥反應(yīng)和處理、降解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白，同時(shí)可以保護(hù)胰島細(xì)胞和血管內(nèi)皮等細(xì)胞免受氧化應(yīng)激誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡進(jìn)而發(fā)揮其抗氧化損傷的作用[16]。

本研究發(fā)現(xiàn) Sels 基因多態(tài)性與冠心病有密切相關(guān)性?？赡芘cSels上述功能相關(guān)。但本研究也存在一定局限性，Sels 基因的變異可能影響血清 Sels 水平，從而導(dǎo)致冠心病的風(fēng)險(xiǎn)增加，但本研究沒(méi)有檢測(cè)Sels水平的變化。在下一步的研究中，我們將對(duì)該基因的功能進(jìn)行研究，以期為進(jìn)一步揭示冠心病的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)。

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