SAA遺傳多態(tài)性與冠心病臨床預(yù)后的關(guān)聯(lián)研究

謝 翔， 宋長(zhǎng)來， 吳雪琴， 鄭穎穎， 劉 芬， 吳婷婷， 李 龍， 馬依彤

(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院1心臟中心， 烏魯木齊 830054； 2昌吉分院心血管內(nèi)科， 新疆 昌吉 831100；3新疆心血管病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 烏魯木齊 830054)

血清淀粉樣蛋白A(serum amyloid A,SAA)被證明是一種急性期反應(yīng)蛋白，既能發(fā)揮炎癥因子的作用[1]，又可以作為一種載脂蛋白，也是新發(fā)現(xiàn)的一種脂肪細(xì)胞因子[2]。近年來的文獻(xiàn)表明，SAA不僅和家族性高脂血癥具有關(guān)聯(lián)，還和糖尿病的發(fā)生具有關(guān)聯(lián)[3-4]。更多的文獻(xiàn)表明SAA基因和冠心病的關(guān)系密切[5-6]?；A(chǔ)研究[7]和臨床研究[8]均表明SAA的表達(dá)分布在動(dòng)脈粥樣硬化的各個(gè)時(shí)期，并參與動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈內(nèi)介入治療(percataneous coronary intervention,PCI)是冠心病患者的重要治療手段。PCI術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生，尤其是支架內(nèi)血栓形成、非致死性心肌梗死、出血事件等嚴(yán)重影響著CAD患者的臨床結(jié)局[9-10]。諸多的臨床證據(jù)顯示，CYP2C19[11]、ABCB1[12]、ITGB3等基因多態(tài)性[13],均與PCI術(shù)后臨床結(jié)局具有關(guān)聯(lián)。本研究探討SAA基因多態(tài)性與冠心病患者PCI術(shù)后臨床結(jié)局的關(guān)系，以期更好地評(píng)估冠心病介入術(shù)后患者的危險(xiǎn)分層及預(yù)后情況。

1 研究?jī)?nèi)容與方法

1.1研究對(duì)象隊(duì)列研究的方法，選擇1 248例接受PCI治療的冠心病患者，時(shí)間跨度為2008年1月-2010年3月。排除了180例，其中89例僅行冠狀動(dòng)脈內(nèi)球囊擴(kuò)張術(shù)(PTCA)，11 例失訪，80例無DNA標(biāo)本。最終納入1 068 例患者，其中男性854例，女性 21 例，平均年齡(59.46±11.04)歲。所有的患者符合以下標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)冠脈狹窄程度>50%，具有急性冠脈綜合癥的臨床證據(jù)。排除標(biāo)準(zhǔn):患者年齡>75歲，中至重度貧血，血小板低于 70×109/L，有活動(dòng)性消化道出血、或者有嚴(yán)重的肝腎功能不全、近3 個(gè)月內(nèi)腦血管意外史。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 采集血樣及血生化指標(biāo)檢測(cè) 采取患者空腹靜脈血5 mL，乙二胺四乙酸三鉀(K3EDTA)抗凝，-80℃冰箱保存，備用。血液生化指標(biāo)的檢測(cè)由新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心統(tǒng)一測(cè)定。

1.2.2 DNA提取、SNP選擇及基因分型 選擇rs12218位點(diǎn)，基因組的提取采用北京天根生化公司生產(chǎn)的全血基因組提取試劑盒。rs12218的基因分型采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)技術(shù)。采用primer 5.0軟件自行設(shè)計(jì)引物：5′AGGGAGAATGGGAGGGTGGG3′(P1)；5′GCAGGTCGGAAGTGATTGGGGTC′3(P2)。內(nèi)切酶為BglⅠ?；蚍中徒Y(jié)果見圖1。

1.3隨訪及臨床終點(diǎn)的判定所有患者均隨訪1 a。主要通過信件、門診或者再次住院的隨訪。隨訪的終點(diǎn)事件為不良心臟和腦血管事件(MACE事件)：包括所有死亡(心臟性和非心臟性)，支架內(nèi)血栓、非致死性心肌梗死；腦血管事件包括中風(fēng)、短暫腦缺血發(fā)作或可逆性缺血性損傷。

(1：CC基因型；2～4：CT基因型；5～7：TT基因型；M：DNA Marker I)

圖1SAA基因rs12218分型結(jié)果

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行處理。組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料的比較采用列聯(lián)表，卡方檢驗(yàn)檢驗(yàn)。COX回歸分析用來進(jìn)行多因素分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1基因分型結(jié)果SAA基因3種基因型頻率的分布符合遺傳平衡定律。男女之間比較基因型頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表 1。

表1 SAA基因型分布頻率/例(%)

2.2基線資料在不同基因型之間有差異的指標(biāo)為脈搏、尿素氮、高血壓、高甘油三酯血癥等(P<0.05)，見表2。不同基因型的靶血管及支架類型未見明顯差異，見表3。

表2 三種基因型之間臨床特征的比較(±s)

表3 PCI介入治療的相關(guān)參數(shù)/例(%)

2.3SAA基因多態(tài)性對(duì)PCI術(shù)后患者預(yù)后的影響1 068例患者均完成了1 a隨訪, MACE事件中，死亡36例(3.37%)，非致死性心肌梗死48例(4.49%)，支架內(nèi)血栓 38 例(3.56%)，另外有12例出血事件(1.12%)，總的MACE事件的發(fā)生率為8.61%，SAA不同基因型之間MACE事件的發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表4。

2.4COX回歸分析結(jié)果為了調(diào)整混雜因素的干擾，我們采用多因素COX回歸分析，結(jié)果顯示，在調(diào)整了其他的混雜因素后，仍然沒有發(fā)現(xiàn) SAA 基因多態(tài)性和不良事件的發(fā)生相關(guān)，見表5。生存分析顯示，不同基因型之間，其1 a MACE事件發(fā)生率及1 a無事件生存率均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見圖2。

表4 PCI術(shù)后1 a不良事件的發(fā)生率/例(%)

表5 COX回歸分析結(jié)果

a: 無事件生存率 b: MACE事件

圖2SAA不同基因型之間生存曲線比較

3 討論

PCI技術(shù)作為冠心病患者的常規(guī)治療越來越得到大家的認(rèn)可，也有越來越多的患者從中獲益。但是PCI術(shù)后支架內(nèi)再狹窄的問題也困擾著臨床醫(yī)生，尤其是在金屬裸支架年代[14]。隨著藥物涂層支架的問世，再狹窄的發(fā)生率明顯降低了，但卻增加的支架內(nèi)血栓的發(fā)生率[15]。盡管 PCI 術(shù)后規(guī)范應(yīng)用了雙聯(lián)抗血小板藥物，有時(shí)卻不能避免支架內(nèi)血栓的發(fā)生。因此冠心病患者 PCI 術(shù)后不良事件的發(fā)生的易感因素是多方面的。支架內(nèi)血栓形成是PCI術(shù)后最主要的并發(fā)癥。盡管支架內(nèi)血栓形成的因素有多種，包括患者本身的因素和手術(shù)操作過程[16]。該研究中，我們?nèi)脒x的患者均為藥物洗脫支架植入者。已經(jīng)有很多危險(xiǎn)因素被發(fā)現(xiàn)和支架內(nèi)血栓有關(guān)，包括急診 PCI、射血分?jǐn)?shù)下降的左心功能不全、合并有糖尿病或者是腎功能不全等。急診 PCI 術(shù)后支架內(nèi)血栓的形成和的炎癥反應(yīng)及血小板激活有關(guān)[17]。但也和術(shù)中操作如支架貼壁不良有關(guān)[18]。

本研究中對(duì) SAA 基因rs12218多態(tài)進(jìn)行研究。該位點(diǎn)在本研究前期工作中已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)和冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)。但在本研究中，卻沒有發(fā)現(xiàn)rs12218位點(diǎn)和冠心病 PCI術(shù)后臨床結(jié)局相關(guān)。3種基因型一般臨床資料的比較顯示，脈搏、高血壓以及高脂血癥存在明顯的差異，因此我們進(jìn)行多因素Logistic回歸分析已排除這些混雜因素的干擾，結(jié)果仍顯示SAA基因多態(tài)性與冠心病PCI術(shù)后的臨床結(jié)局無關(guān)。

另外，Li等[19]研究結(jié)果表明，支架內(nèi)血栓的發(fā)生率在糖尿病組顯著高于非糖尿病組。表明糖尿病患者PCI術(shù)后發(fā)生不良事件的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加，其機(jī)制可能和血糖及血脂代謝的紊亂有關(guān)。本研究前期的結(jié)果也已證實(shí)SAA 基因突變明顯升高血糖水平。另外，我們也發(fā)現(xiàn)SAA基因變異和冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)[20]，但在本研究中并沒有發(fā)現(xiàn)SAA基因多態(tài)性和冠心病PCI術(shù)后的不良預(yù)后有關(guān)。這種結(jié)果的可能原因有以下幾點(diǎn)：(1)研究設(shè)計(jì)中僅僅涉及單個(gè)SNP，這可能低估了SAA 基因在冠心病PCI 術(shù)后不良預(yù)后中的作用。(2)可能和本研究隨訪的時(shí)間較短有關(guān)，對(duì)于冠心病PCI術(shù)后患者的隨訪，較多的文獻(xiàn)報(bào)道了隨訪5 a的結(jié)果，這樣更容易發(fā)現(xiàn)一些潛在的關(guān)聯(lián)，因此尚需要我們?cè)诮窈蟮难芯恐羞M(jìn)一步闡述。

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