無菌試管苗安全高效接種技術(shù)規(guī)程

，　　，　，　，　

(達(dá)州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，　四川 達(dá)州 635000)

組培接種是一項(xiàng)技術(shù)性較強(qiáng)的工作，每一個(gè)操作細(xì)節(jié)都將會(huì)影響接種效果。實(shí)踐證明，接種技術(shù)不科學(xué)，接種操作不規(guī)范是組培生產(chǎn)中的最大污染來源。在多年的組培接種繁育實(shí)踐工作，總結(jié)出了一套無菌試管苗安全高效接種技術(shù)，操作規(guī)范、接種安全，而且試管苗污染率低，接種效率高、管理科學(xué)規(guī)范，效果非常明顯。

1　接種準(zhǔn)備

1.1接種室提前用甲醛和高錳酸鉀熏蒸消毒(每立方米用40%甲醛10 mL倒入裝有高錳酸鉀5 g的容器內(nèi))；并強(qiáng)制過濾通風(fēng)[1]。

1.2用香皂或洗手液將手洗凈，更換工作服、鞋、防塵帽、口罩。用75%酒精或0.5%苯酚對(duì)超凈工作臺(tái)噴霧降塵消毒，接通超凈工作臺(tái)電源，打開電源開關(guān)、風(fēng)機(jī)，打開紫外燈照射15～30 min[2]。

1.3準(zhǔn)備好消毒滅菌藥物、接種用苗、接種培養(yǎng)基、接種工具、酒精燈(在超凈工作臺(tái)外用漏斗添加酒精至1/2～2/3)。

1.4關(guān)閉紫外燈，打開照明燈。

1.5用75%的酒精消毒雙手、用75%酒精棉(棉球不能太大、酒精不能太多)擦拭超凈工作臺(tái)的臺(tái)面和側(cè)壁以及放在超凈工作臺(tái)中的所有器具，將棉球及時(shí)移出超凈工作臺(tái)，稍后點(diǎn)燃酒精燈[3]。

1.6將鑷子、剪刀、解剖刀等接種用器具在酒精燈火焰外焰上(不能太靠近酒精燈燈芯)進(jìn)行灼燒滅菌：從頭至尾過火數(shù)遍，然后反復(fù)過火尖端處(不得少于5 s)，然后擺放好讓其自然冷卻。

1.7將滅好菌的無菌濾紙?jiān)诔瑑艄ぷ髋_(tái)外褪去外包裝袋，在超凈工作臺(tái)上小心地打開包裝報(bào)紙，用無菌鑷子將無菌濾紙取出放在離風(fēng)窗10～20 cm(不可太往外)。去除第1張濾紙。將接種鑷子進(jìn)行再次灼燒滅菌，然后擺放好冷卻待用。

2　轉(zhuǎn)接苗

2.1　取　苗

在酒精燈火焰上方打開培養(yǎng)瓶的瓶蓋/封口膜，瓶口對(duì)準(zhǔn)酒精燈火焰外焰旋烤7～10 s，然后開始取苗，將取出的苗子放在無菌濾紙上。取苗時(shí)，瓶口不要斜向外；如果不能一次取出全部材料，要先把封口膜(瓶蓋)對(duì)著風(fēng)源放在酒精燈的左前方，取苗后及時(shí)蓋上。

2.2　切　苗

用鑷子和剪刀將植物材料在無菌濾紙上進(jìn)行剪切，要求快速準(zhǔn)確。將苗子切成帶1～2個(gè)葉片和腋芽的節(jié)段接種于培養(yǎng)基上[4]，在操作過程中，剪刀和鑷子都要在無菌濾紙斜上方操作，不可在其正上方操作。

2.3　接　苗

在酒精燈火焰上前方打開培養(yǎng)瓶的瓶蓋(封口膜)，封口膜放在酒精燈的左前方，將瓶口對(duì)準(zhǔn)酒精燈火焰外焰旋烤7～10 s，烤完瓶口后，在酒精燈火焰前上方用鑷子將接種材料接種到新的培養(yǎng)基上，接完后瓶口對(duì)準(zhǔn)酒精燈火焰外焰再次旋烤，然后及時(shí)封上封口膜[5]。接苗時(shí)，鑷子最好不要與瓶口接觸；組培苗在瓶?jī)?nèi)要排放整齊、均勻、美觀。

注意： 1) 接種過程中動(dòng)作要小心謹(jǐn)慎，以防將酒精瓶或酒精燈碰倒碰翻；嚴(yán)禁將棉球點(diǎn)燃后置于酒精燈或酒精瓶下及附近；用后的棉球要及時(shí)移出超凈工作臺(tái)；嚴(yán)禁將有明火或過燙的接種工具放入酒精瓶。萬一發(fā)生意外，應(yīng)及時(shí)用滅火器撲滅[6]。 2) 轉(zhuǎn)接苗時(shí)，雙手不能離開超凈工作臺(tái)，接種過程中不宜說話，出大氣，咳嗽。 3) 接種過程中手不能經(jīng)過濾紙上方；接種工具不能移出超凈工作臺(tái)。 4) 接種過程中要隨時(shí)對(duì)手進(jìn)行消毒，鑷子和接種刀要隨時(shí)灼燒滅菌并冷卻待用，不可太熱。 5) 每接完1瓶要換1次濾紙，對(duì)接種工具消1次毒。 6) 接種后要及時(shí)標(biāo)記：把品種代號(hào)、培養(yǎng)基類型、接種日期、個(gè)人編號(hào)標(biāo)示到瓶上。

3　接種收尾

3.1用酒精燈帽蓋滅酒精燈(嚴(yán)禁用嘴吹滅)。

3.2把接種過程中產(chǎn)生的垃圾清理掉，把工作臺(tái)收拾干凈，臺(tái)上的物品擺放整齊。

3.3關(guān)閉風(fēng)機(jī)、照明燈、電源開關(guān)，斷開電源。

3.4將瓶苗整齊有序地?cái)[放在培養(yǎng)架上。

3.5將垃圾及其它物品帶出接種室。

3.6做好接種工作記錄。

參考文獻(xiàn)：

[1]孟長(zhǎng)軍.組培實(shí)驗(yàn)室常見消毒方法優(yōu)劣比較[J].中國(guó)園藝文摘,2012(8):177-179.

[2]秦曉萍.馬鈴薯脫毒苗組培快繁技術(shù)[J].中國(guó)種業(yè),2015(4):81-83.

[3]朱廣廉.植物組織培養(yǎng)中的外植體滅菌[J].植物生理學(xué)通訊,1996,32(6):444-449.

[4]趙佐敏,艾勇.馬鈴薯組培脫毒試管苗繁育技術(shù)[J].中國(guó)馬鈴薯,2003,17(5):301-304.

[5]辛國(guó)斌.脫毒馬鈴薯實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)繁技術(shù)的改進(jìn)與應(yīng)用[J].中國(guó)馬鈴薯,2002,16(4):239-240.

[6]劉進(jìn)平,莫饒,吳繁花.組培工廠及植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的安全管理[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù)2005,25(1):125-129.

(本欄目責(zé)任編輯：申曉、陳婉瑩)